氯化锂-匹鲁卡品对大鼠癫痫模型的影响

氯化锂-匹鲁卡品对大鼠癫痫模型的影响

氯化铝-考虑到癫痫动物模型的行为、eeg。病理和药理学特征与i型癫痫相似，且癫痫发作程度清晰。同时，它对癫痫的病因机制进行了研究，提出了治疗策略，并对抗癫痫药物进行了新的审查。但此模型病死率过高,不利于构造慢性癫痫的动物模型。国外有些学者提出重复注射低剂量匹鲁卡品可以降低病死率,但使用这种方法后致癫大鼠的比率(63%)较低。故本研究的目的是要寻求一种方法:在保证高的致癫大鼠比率的同时最大限度的降低其病死率。实验动物及致癫行为1实验动物及分组健康雄性SD大鼠48只,2~3个月,体重220~250g。根据匹鲁卡品剂量和干预措施随机分为5组:实验1组:5只匹鲁卡品100mg/kg;实验2组:7只匹鲁卡品50mg/kg;实验3组:5只匹鲁卡品10mg/kg;实验4组:8只匹鲁卡品50mg/kg(n=8)。前两组使用地西泮终止发作,后两组使用水合氯醛终止发作。另选一组为对照组:7只以同等体积的生理盐水代替匹鲁卡品。2实验药品(1)匹鲁卡品(溶于生理盐水中,Sigmap6503);(2)氯化锂(溶于生理盐水,生物工程上海公司);(3)硫酸阿托品;(4)地西泮;(5)10%水合氯醛。3实验方法3.1实验动物癫痫发作Racie分级0级:无抽搐发作;1级:面部肌肉痉挛表现为咀嚼运动;2级:颈部肌肉痉挛表现为点头运;3级:一侧前肢阵挛;4级:站立伴双前肢阵挛;5级:在4级基础上身体向后倒下。3.2实验动物具体致癫步骤(1)氯化锂3mEq/kg腹腔注射;(2)14~17h之后腹腔注射硫酸阿托品1mg/kg;(3)30min之后按照分组情况腹腔注射不等剂量的匹鲁卡品或生理盐水;(4)若注射40min后仍然未诱发发作,可重复给于匹鲁卡品10mg/kg;(5)癫痫发作60min后根据分组情况腹腔注射地西泮(10mg/kg)或10%水合氯醛(300mg/kg)终止发作,注射止痉剂30min仍没有终止发作,可原剂量重复注射1次;(6)对照组除以生理盐水代替匹鲁卡品外,其他处理措施同实验1组。观察实验鼠致癫及致死情况。4统计学处理采用SPSS10.0Windows统计软件对实验数据进行统计学处理,所有计量资料以均数±标准差(x¯±s)(x¯±s)来表示,比较率使用Fisher确切概率法,方差不齐资料选用非参数检验。结果1肢体肌肌肌肌肌肌肌肌肌肌肌肌肌具体数量,先出现单、双侧肢体肌肌肌肌腹腔注射匹鲁卡品15~39min后大鼠先后出现生物行为的改变:首先出现竖毛、流涎、流血泪、点头、探索样行为、目光呆滞、腹泻等,继而出现面肌痉挛,咀嚼样运动,点头,单、双侧肢体痉挛,最后身体向后摔倒。在所有诱发出癫痫发作的大鼠中均可观察到4级以上的发作。2实验动物的诱发成功对照组:无1例诱发出癫痫发作,也无1例死亡;实验1组:腹腔注射匹鲁卡品后16~35min后(27.60±7.23min)5只大鼠全部诱发出4级以上的癫痫持续状态。3只动物在注射完地西泮后仍然有点头,一侧肢体阵挛,呼吸不均匀、流涎等表现,生存25~44h(34.67±10.60h)后死亡,病死率为60%;实验2组:腹腔注射匹鲁卡品7~36min(20.14±11.02min)后7只大鼠全部诱发出4级以上的发作。注射地西泮到发作终止时间为56~72min(53.14±9.03min),大鼠表现同实验1组。6只动物生存20~55h(33.4±15.49h)后死亡,病死率为85.7%。与实验1组比较,死亡时间和病死率均无显著性差异(P>0.05);实验3组:首次给与10mg/kg匹鲁卡品腹腔注射后无一只诱发成功,重复多次,总量达到100mg/kg时仍然没有发作,致癫鼠比率与实验1、2组相比有显著性差异(P<0.05)。原大鼠饲养两周后按照实验4组要求处理。有3只诱发出3级以上的发作,存活,另两只在笼中饲养两周后,结合氯化锂腹腔注射匹鲁卡品55mg/kg,同样诱发出3级以上的发作,发作60min后使用10%水合氯醛300mg/kg终止发作,全部存活;实验4组:腹腔注射匹鲁卡品后16~25min(19.00±3.56min)后诱发4级以上的发作,共有7只大鼠诱发成功。注射水合氯醛后4~21min(12.14±6.67min)完全终止发作。完全终止发作后动物进入昏睡,呼吸均匀平稳,呼吸道分泌物较实验1、2组明显减少。与实验2组的发作终止时间比较,P<0.05,有显著性差异。7只动物全部存活。病死率与实验2组比较有显著性差异(P<0.05)。匹鲁卡品在癫痫发作过程中会导致大鼠的病死率,在临床匹鲁卡品为节后拟胆碱药,可直接兴奋外周和中枢的M-胆碱能受体,产生拟胆碱能作用,腹腔注射后可在中枢神经系统激活胆碱能受体而产生惊厥发作。氯化锂可以增强匹鲁卡品的这种拟胆碱能作用从而减少其用量。成年大鼠匹鲁卡品癫痫模型呈现3个时期:癫痫持续状态期,静止期,慢性期。其中慢性期的大鼠脑神经元的损伤和苔藓出芽类似于人类的癫痫脑组织病理改变。所以,若能保证大鼠有较长时间的存活就可以为研究慢性癫痫提供时机。腹腔注射100mg/kg匹鲁卡品病死率(60%)和50mg/kg病死率(87.5%)在统计学上没有显著性差异。在实验中观察到没有诱发成功的大鼠,其匹鲁卡品总量最高已达到400mg/kg,除了匹鲁卡品的外周毒副作用(如:流涎、流血泪,竖毛等)外没有其他异常,生存状态良好,这说明匹鲁卡品只要没有诱发癫痫发作就不会导致大鼠的死亡。Jope等人也发现几乎所有的动物都死于没有控制发作持续时间。这说明匹鲁卡品诱发的癫痫发作时间过长导致动物病死率的增加,有效的限制癫痫发作的时间可以增加存活大鼠的数量,与匹鲁卡品的剂量(至少在400mg/kg以内)似乎没有相关性,而选择迅速有效的止痉剂就显得尤为重要。水合氯醛能有效的降低癫痫鼠的病死率。在本次实验中,实验2组和实验4组所使用的匹鲁卡品剂量一致(均为50mg/kg),动物体重,饲养条件等因素均一致,使用水合氯醛终止和地西泮终止动物的病死率(分别为0%和87.5%)存在显著性差异,而且从使用水合氯醛到发作完全终止所需时间比地西泮显著减少(分别为12.14±6.67min和53.14±9.03min,P<0.05),这和胡越等人控制氯化锂-匹鲁卡品诱发癫痫持续状态发作的实验研究结果一致。临床上也经常使用水合氯醛灌肠来急救处理癫痫持续状态。水合氯醛迅速终止发作的机制尚不明,实验中发现地西泮可以增加呼吸道的分泌物,增强了匹鲁卡品的拟胆碱能作用,从而造成呼吸困难,严重者造成急性肺水肿、死亡,使得致癫鼠的病死率居高不下。使用水合氯醛后可以在较短时间内迅速终止发作,减轻呼吸困难,有效地降低致癫鼠的病死率。重复多次低剂量注射匹鲁卡品后大鼠的致癫率较低。在本实验中5只大鼠重复10mg/kg腹腔注射匹鲁卡品无1例诱发癫痫成功。国外Maike等采用10mg/kg匹鲁卡品多次重复注射致癫大鼠的比率为63/103(61%),国内闫卫红等用30mg/kg匹鲁卡品多次重复注射致癫率为28%,这说明重复低剂量注射虽然病死率低,但是致癫率也低,对于实验研究并没有多大实际意义。另外,原大鼠饲养两周后,换用单剂量50mg/kg既可诱发成功。这与Maike等研究相矛盾:他们指出:若大鼠在重复多次低剂量注射后不能诱发癫痫时说明这种大鼠和诱发成功的大鼠存在基因变异,但这种说法无法解释实验中观察到的