实验一 邻二氮菲分光光度法测定微量铁

PAGEPAGE3实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1．掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理2．熟悉绘制吸收曲线的方法，正确选择测定波长3．学会制作标准曲线的方法4．通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁，掌握721型分光光度计的正确使用方法，并了解此仪器的主要构造。二、实验原理根据朗伯-比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。邻二氮菲（1，10—二氮杂菲），也称邻菲罗啉是测定微量铁的一个很好的显色剂。在pH2—9范围内（一般控制在5—6间）Fe2+与试剂生成稳定的橙红色配合物Fe（Phen）32+lgK=21.3，在510nm下，其摩尔吸光系数为1.1×104L/moL.cm,）。Fe3+与邻二氮菲作用生成蓝色配合物，lgK稳=14.1，稳定性较差，因此在实际应用中常加入还原剂盐酸羟胺，使Fe3+还原为Fe2+。其反应式如下：2Fe3+

+2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H+

+2Cl-本方法的选择性很高。相当于含铁量40倍的Sn、AI、Ca、Mg、Zn、Si，20倍的Cr、Mn、V、P和5倍的Co、Ni、Cu不干扰测定。三、试剂与仪器（一）仪器：1．721型分光光度计2．50mL容量瓶8个（5-6人/组），100mL1个，500mL1个3．移液管：2mL1支，10mL1支4．刻度吸管：10mL、5mL、1mL各1支（二）试剂：硫酸铁铵、盐酸、盐酸羟胺、醋酸钠、醋酸、邻二氮菲。（三）标准溶液配制1)100μg·mL-1铁标准溶液配制：准确称取0.4317g铁盐NH4Fe(SO4)2·12H2O，置于烧杯中，加入20mL6mol·L-1HCl溶液和少量水，溶解后，定量转移至500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，充分摇匀，得100μg·mL-1储备液。2)10μg·mL-1铁标准溶液配制：用移液管吸取上述100μg·mL-1铁标准溶液10.00mL，置于100mL容量瓶中，加入2.0mL6mol·L-1HCl溶液，用水稀释至刻度，充分摇匀。3）HCI6moL/L：100mL4）盐酸羟胺10%（新鲜配制）：100mL5）邻二氮菲溶液0.1%（新鲜配制）：200mL6）HAc—NaAc缓冲溶液（pH=5）500mL：称取136gNaAc，加水使之溶解，再加入120mL冰醋酸，加水稀释至500mL四、实验步骤1．绘制吸收曲线：用吸量管吸取铁标准溶液（10ug/mL）0.0、2.0、4.0mL分别放入50mL容量瓶中，加入1mL10%盐酸羟胺溶液、2.0mL0.1%邻二氮菲溶液和5mLHAc—NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置5分钟，用3cm比色皿，以试剂溶液为参比液，于721型分光光度计中，在440—560nm波长范围内分别测定其吸光度A值。当临近最大吸收波长附近时应间隔波长5—10nm测A值，其他各处可间隔波长20—40nm测定。然后以波长为横坐标，所测A值为纵坐标，绘制吸收曲线，并找出最大吸收峰的波长。2．标准曲线的绘制：用吸量管分别移取铁标准溶液（10ug/mL）0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL依次放入7只50mL容量瓶中，分别加入10%盐酸羟胺溶液1mL，稍摇动，再加入0.1%邻二氮菲溶液2.0mL及5mLHAc—NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置5分钟，用3cm比色皿，以不加铁标准溶液的试液为参比液，选择最大测定波长为测定波长，依次测A值。以铁的质量浓度为横坐标，A值为纵坐标，绘制标准曲线。3．水样分析：分别加入5.00mL（或10.00mL，铁含量以在标准曲线范围内为宜）未知试样溶液，按实验步骤2的方法显色后，在最大测定波长处，用3cm比色皿，以不加铁标准溶液的试液为参比液，平行测A值。求其平均值，在标准曲线上查出铁的质量，计算水样中铁的质量浓度。五、数据记录与处理1、吸收曲线1）记录数据波长λ/nm440460480500502504506508吸光度A波长λ/nm510512514516518520540560吸光度A2）绘制吸收曲线，确定最大吸收波长λmax=nm2、标准曲线1）记录数据序号0123456铁标液体积（mL）01.02.04.06.08.010.0浓度吸光度A2）绘制标准曲