第三章 中药制剂的检查1

第四章

中药制剂的检查

江西中医学院药学系中药制剂的检查

内容与要求杂质的概念、分类、来源杂质的限量计算重金属检查原理及注意点砷盐检查原理及KI、酸性SnCl、HgBr试纸的作用中药制剂的检查项目：干燥失重、水分灰分、酸不溶灰分中药制剂的特殊杂质检查原则掌握熟悉中药制剂的检查包括：

制剂通则检查一般杂质检查特殊杂质检查微生物限度检查第一节中药制剂中的杂质检查

一、杂质及其来源药品的杂质是指药物中存在的危害人体健康或影响药物质量的物质.杂质检查是药物纯度评价的一项重要内容.一杂质的概念

二杂质的分类

一般杂质

——指在自然界中分布广泛,在多种药材的采集、收购、加工以及制剂的生产或贮存过程中容易引入的杂质.特殊杂质

——指某一些中药制剂中单独存在的杂质，是在制备过程或储存中根据其来源、生产工艺及药品性质可能引入的杂质。

生产制备过程引入贮存过程中引入三杂质的来源中药材原料中引入杂质限量

——在不影响药物疗效、稳定性及不发生毒副作用的前提下,药物中所含杂质的最大允许量.百分表示(%)百万分表示(ppm)限量表示方法二、杂质限量检查%100×=样品量杂质的最大允许量杂质限量标准对照法（用一定量的杂质对照品溶液）三、杂质限量的计算

若用ppm表示杂质限量则：注意:①单位是否统一②供试品是否有稀释③表示方法%或ppm举例：阿胶砷盐检查法：取本品2.0g，加氢氧化钙1g，混合，加少量水，搅匀，干燥后先用小火烧灼使炭化，再在500-600℃炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸3ml与适量的水使溶解成30ml，分取溶液10ml，加盐酸4ml与水14ml，依法检查（附录ⅨF），含砷量不得过百万分之三。精密量取标准砷溶液（每1ml相当于1μg的As）2ml

610SCV)ppm(L××=L=2×1×10/(2.0×10/30)=3ppm6

灵敏度法在供试品溶液中加入试剂，在一定条件下，观察有无正反应出现。例：肉桂油中重金属检查

取本品10ml，加水10ml与盐酸1滴，振摇后，通硫化氢气使饱和，水层与油层均不得变色。第二节一般杂质检查方法1.重金属的概念重金属是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用生成不溶性硫化物而显色的金属杂质.如：Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、Sb、Sn、As、Ni、Co、Zn等.重金属存在，影响药物的稳定性及安全性.铅易在体内积蓄中毒,以Pb为代表.重金属检查法（一）基本原理：

原理：在弱酸性(pH3.5醋酸盐缓冲液)条件下，硫代乙酰胺水解,产生H2S,与微量重金属离子(以Pb2+为代表)生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液（硫代乙酰胺法）

在碱性介质中,以Na2S与微量重金属离子生成不溶性的硫化物（硫化钠法）重金属检查法2操作方法样品管乙管对照管甲管第一法：适用于供试品不经有机处理，在酸性溶液中显色的重金属检查（二）检查方法：重金属检查法丙管供试品溶液标准铅溶液+同上显色结果观察对照管样品管样品管不得深于对照管重金属检查法

颜色比较甲管乙管丙管≤≤合格否则，第二法重金属检查法

操作

缓缓炽灼放冷H2SO40.5-1.0ml供试品炭化

加热

HNO3

500-600℃H2SO4

除尽放冷完全灰化

蒸干HCl2ml

水15ml

中性按硫代乙酰胺

蒸干

氨试液

法检查注意：做空白试验

适用于供试品需炽灼破坏，取遗留残渣经处理在酸性溶液中显色的重金属检查第二法第三法硫化钠法适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性溶液的药物中重金属的检查.原理

在碱性介质中,以Na2S为显色剂,使Pb2+与S2-作用生成PbS的混悬液,与一定量标准铅溶液经同法处理所呈颜色比较,不得更深.重金属检查法

方法灵敏度Pb2+标准溶液10

g/ml（使用不超过一周）

取用量为2ml时，加硫代乙酰胺所显颜色最适合于目视法观察①（三）注意事项重金属检查法

pH在3.0~3.5时,呈色较完全.硫代乙酰胺加入量以2ml呈色最深最佳显色时间2分钟

溶液的pH对于金属离子与硫化氢呈色影响较大.(25ml供试液中有2ml醋酸缓冲液)

②反应条件重金属检查法

供试品溶液有颜色时的处理

Ⅰ.稀焦糖溶液调节

Ⅱ.指示剂调节③重金属检查法

④

其他离子的干扰干扰：弱酸性溶液中Fe3+氧化H2S析出S,产生混浊影响检查.a.供试品中微量高价Fe3+存在排除：加入抗坏血酸或盐酸羟胺使

Fe3+还原为Fe2+.重金属检查法

b.空白处理：

为消除盐酸或其他试剂可能夹杂重金属，当盐酸用量>1.0ml氨试液>2.0ml……..

除另有规定外，对照溶液应取同样量试液蒸干后，依法检查。重金属检查法

c.供试品为铁盐（大量的Fe3+）

Fe3+在HCl溶液中能形成配位化合物用乙醚提取

Fe3++HCl→[HFeCl6]2-（黄色）水层加氨试液调至碱性,残存的Fe3+可用KCN掩蔽,按硫化钠法检查.

如：枸橼酸铁铵的重金属检查重金属检查法a.HNO3处理后,必须蒸干除尽NO.b.炽灼温度严格控制：500-600℃⑤中药制剂中重金属检查的前处理重金属检查法

c.

药物本身能生成不溶性硫化物加入掩蔽剂消除干扰其他：a.标准铅溶液的稀释配制b.硫化钠棕色瓶中保存可1-2个月重金属检查法砷盐检查法

(一)古蔡氏法

(二)二乙基二硫代甲酸银法（Ag-DDC法）

(一)古蔡氏法（Gutzeit）1.原理金属锌与酸作用产生新生态的氢与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢,遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑,与同条件下一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较,测得供试品得含砷限度.砷盐检查法反应式如下：棕色黄色2操作④加锌粒2g,立即将装妥的导气管B密塞与A瓶,置25-40℃水浴中,反应45分钟,取出溴化汞试纸,比较砷斑.①导气管B中装入醋酸铅棉球②再于旋塞C的平面上放一片溴化汞试纸③样品、对照品分别置于检砷瓶中,加盐酸5ml与水21ml,再加2.5%碘化钾试液5ml与0.3%酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置10分钟2.装置

检砷瓶A

导气管B

具孔塞CABC砷盐检查法

3.讨论1)试剂的作用a.KI的作用——还原剂：As5+→As3+

五价砷生成AsH3的反应速度比三价砷速度慢,加入KI使五价砷还原为三价砷后再与活泼氢反应,以增大AsH3的生成速度.砷盐检查法砷盐检查法

①还原剂(表现在3方面)Ⅰ.将五价砷还原为三价砷(As5+→As3+)b.酸性SnCl2的作用

进而促进AsH3不断生成稳定的络离子Ⅱ.将KI被氧化生成的I2再还原为I-砷盐检查法砷盐检查法

H2阻碍酸与锌粒反应Zn超电压0.70Sn超电压0.50SnCl2Ⅲ.SnCl2与Zn粒表面形成Zn-Sn齐

——起去极化作用,使氢气均匀而连续地发生.砷盐检查法

c.PbAc2棉花的作用

——排除硫化物的干扰(1mgS2-)

砷盐检查法

d.HgBr2试纸的作用

HgBr2试纸与AsH3作用生成砷斑.

注意事项a.标准砷溶液规定取2ml(1

g/ml)

b.Zn粒的大小及用量

大小：能通过1号筛（850~2000

m）

用量：约2g.c.反应温度：25－40℃反应时间：45分钟

砷盐检查法a.供试品是硫化物,亚硫酸盐,硫代硫酸盐排除方法：加入浓硝酸处理

干扰物的排除砷盐检查法Fe3+能消耗还原剂(KI、SnCl2),并能氧化砷化氢.排除方法：先加酸性SnCl2试液使

Fe3+→Fe2+砷盐检查法b.供试品是铁盐(Fe3+)c.共价键结合的砷化物排除方法：进行有机破坏——酸破坏法或碱破坏法砷盐检查法

碱破坏法

a加入氢氧化钙500-600

C灼烧例：酚磺酞

b加入无水碳酸钠碱融（环状有机酸碱金属）例：苯甲酸钠砷盐检查法酸破坏法加稀硫酸与溴化钾例：葡萄糖中砷盐检查

(二)二乙基二硫代氨基甲酸银法(Ag-DDC法)

silver

diethyldithiocarbamate

本法不仅用于砷盐的限量检查,而且可用作微量砷盐的含量测定.1.原理第一步：同古蔡氏法生成砷化氢第二步：砷化氢还原Ag-DDC溶液,产生红色的胶态银.

目视比色法仪器分析510nm三、铅、镉、砷、汞、铜的检查原子吸收分光光度法电感耦合等离子体质谱法。四、铁盐的检查方法：硫氰酸盐法原理：铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配离子,与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较。操作：4ml25mld.HCl30%硫氰酸铵过硫酸铵50mgH2O50mlH2O

样品标准溶液2)最佳比色浓度a.仪器分析线性范围5~90

gFe3+/50mlb.目视比色浓度范围10~50

gFe3+/50ml讨论：标准铁溶液——硫酸铁铵(含硫酸)浓度10

gFe3+/ml五、干燥失重测定法：

（水分和挥发物质）1、常压恒温干燥法（烘干法）2、干燥剂干燥法(受热易分解或挥发的样品)3、减压干燥法（熔点低，受热不稳定及较难赶除水分的样品）

恒重

六、水分测定法：1、烘干法（不含或少含挥发性成分）2、甲苯法（含挥发性成分）3、减压干燥法（含挥发性成分的贵重药品）4、气相色谱法（外标法）供试品、甲苯、玻璃珠水分甲苯甲苯法水分测定管直型冷凝管短颈圆底烧瓶n=16（tR/W）2水峰计大于3000乙醇峰计大于200n=5.54（tR/W1/2）2气相色谱法（外标法）大于2水峰RSD不得大于2.0%七、炽灼残渣检查法缓缓炽灼放冷H2SO40.5-1.0ml供试品炭化

加热700-800℃H2SO4除尽完全灰化残渣将用于重金属测定时炽灼温度应控制在500-600℃八、灰分、酸不溶性灰分检查总灰分：限制中药中的泥沙和其他杂质酸不溶性灰分：限制中药中的泥沙等杂质例：黄芪总灰分不得过5.0%,酸不溶性灰分不得过1.0%

第三节

中药制剂的特殊杂质检查特殊杂质检查：按照制剂的生产或储存过程中，根据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质进行检查检查原则：利用药品和杂质的理化性质及生理作用的差异，采用物理的、化学的、药理的、微生物的方法来检查。举例：

1、土大黄苷的检查：取本品（大黄）粉末0.2g，加甲醇2ml,温浸10分钟，放冷，取上清液10μl,点于滤纸上，以45％乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视，不得显持久的亮紫色荧光。

2.西洋参中人参的检查

西洋参样品人参对照药材薄层色谱法不得显对照药材同样斑点人参：取人参对照药材1g，照[鉴别]项下对照药材溶液制备的方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取[鉴别]项下的供试品溶液和上述对照药材溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13:7:2)5～10℃放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干,喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，不得显与对照药材完全相一致的斑点。

3.双酯型生物碱：毒性大，是乌头有大毒的主要有效成分。乌头炮制过程中，双酯型生物碱发生水解除去酯基后无毒性。

3+

制川乌中酯型生物碱的检查——高效液相色谱法附子理中丸中乌头碱的限量检查——薄层色谱法

第四节农药残留量的检查常用农药按化学结构可分为：

有机氯类：六六六、DDT

有机磷类:三硫磷、氯硫磷苯氧羧酸类氨基甲酸酯类二硫代氨基甲酸酯类无机农药植物性农药其他一、供试品的制备残留农药的提取

根据农药的种类选取溶剂和提取方法常用溶剂：丙酮、乙腈、苯、氯仿、二氯甲烷常用方法：索氏提取法、振荡提取法

样品的纯化常用步骤：LLP－柱层析分离

二、检测方法：色谱法

注意事项：1、尽快分析、保存好2、避光，注意容器和包装材料、试剂干扰3、防止损失气相色谱法层析柱

常用玻璃柱或弹性石英毛细管柱；固定相常用非极性的或中等极性的溶液；单体一般为80～100目检测器有机氯农药常用电子捕获检测器ECD；有机磷农药常用火焰光度检测器FPD、氮磷检测器NPD或质谱检测器MSD固定液担体柱温程序升温，温度范围一般为100～300℃载气

高纯氮（99.99％），流量为50～150ml/min高效液相色谱法：常用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，甲醇-水或乙腈-水作为流动相，检测器选用紫外或荧光检测器。有机氯农药残留量检查色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱SE-54(或DB-1701)、电子捕获检测器，进样口温度：230℃，检测器温度：300℃，不分流进样，程序升温对照品储备液六六六（BHC）[α-，β-，γ-，δ-BHC]，滴滴涕（DDT）[PP’-DDE，-DDD，-DDT，OP’-DDT]及五氯硝基苯（PCNB）+石油醚（60-90℃）分别制成每1ml约含4-5µg的溶液混合对照品储备液的制备对照品储备液0.5ml→10ml混合对照品溶液的制备取混合对照品储备液制成每1L含0µg、1µg、5µg、10µg、50µg、100µg、500µg浓度系列。有机氯农药残留量检查

供试品溶液制备供试品研细，称取适量（相当于药材2g），置100ml具塞锥形瓶中，+水20ml浸泡过夜，+丙酮40ml，称定，超声处理30min，放冷，用丙酮补足减失的重量，+氯化钠约6g及二氯甲烷30ml，称定，超声处理15min，用二氯甲烷补足减失的重量，静置使分层，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml，于40℃水浴减压浓缩至近干，加少量石油醚（60～90℃）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚（60-90℃）溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚（60～90℃）至5ml。+硫酸1ml，振摇1分钟，离心（3000转/分）10分钟。精密量取上清液2ml置具刻度的浓缩瓶，连接旋转蒸发器，40℃（或用氮气）将溶液浓缩至适量，精密稀释至1ml，即得。测定有机磷农药残留量检查色谱条件与系统适用性试验：弹性石英毛细管柱DB-17MS(或HP-5)、氮磷检测器，进样口温度：230℃，检测器温度：300℃，不分流进样，程序升温对照品储备液：对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷，用乙酸乙酯，制成每1ml约含100µg的溶液混合对照品储备液的制备：对照品储备液1ml→20ml混合对照品溶液的制备：取混合对照品储备液制成每1ml含0.1µg、0.5µg、1µg、2µg、5µg浓度系列。有机磷农药残留量检查供试品溶液制备供试品研细，称取适量（相当于药材5g），+无水硫酸钠5g，+乙酸乙酯50-100ml，冰浴超声处理3min，放置，取上层液滤过，药渣加乙酸乙酯30-50ml，冰浴超声处理3min，放置，滤过，合并滤液，40℃减压浓缩至干，+乙酸乙酯5ml，使溶解。精密量取1ml，加到活性炭小柱（120-400目，0.25g），置多功能真空样品处理器上，用正己烷-乙酸乙酯（1:1）5ml洗脱。洗脱液置氮吹仪上浓缩至近干。+乙酸乙酯1ml，溶解。测定有机磷农药残留量检查1-敌敌畏2-速灭磷3-久效磷4-甲拌磷5-巴胺磷6-二嗪农7-乙嘧硫磷8-甲基嘧啶硫磷9-甲基对硫磷10-稻瘟净11-水胺硫磷12-氧化喹硫磷13-稻丰散14-甲喹硫磷15-克线磷16-乙硫磷十六种有机磷农药的气相色谱图拟除虫菊酯类农药残留量检查：气相色谱法

色谱条件与系统适用性试验：弹性石英毛细管柱SE-54或DB-5，电子捕获检测器。进样口温度270℃，检测器温度330℃。选最佳的分流比。程序升温：理论塔板数按溴氰菊酯峰计算应不低于1×105，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。对照品储备液的制备：氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯适量，用石油醚(60℃～90℃)分别制成每1mL约含20～25µg。混合对照品储备液的制备：对照品储备液1ml→10ml。混合对照品溶液的制备量取混合对照品储备液，制成每1L分别含0µg、4µg、8µg、40µg、200µg的溶液。供试品溶液的制备取样约l～2g；精密称定，置100mL具塞锥形瓶，加石油醚(60℃～90℃)-丙酮(4:1)混合溶液30mL，超声处理15分钟，滤过，药渣再重复上述操作2次后，合并滤液。滤液加入适量无水硫酸钠脱水后，于40℃～45℃减压浓缩至近干，用少量石油醚(60℃～90℃)反复操作至丙酮除净，残渣加适量石油醚(60℃～90℃)溶解，置混合小柱上，用石油醚(60℃～90℃)-乙醚(4:1)混合溶液90mL洗脱，收集洗脱液。于40℃～45℃减压浓缩至近干，再用石油醚(60℃～90℃)3～4mL重复操作至乙醚除净，用石油醚(60℃～90℃)