《宠物疫病与公共卫生》实训 1-10 传染病死亡宠物尸体剖检 课件

传染病死亡宠物尸体剖检训练目标

1.学会尸体外部检查内容和方法

2.学会宠物尸体剖检的操作方法

3.学会宠物尸体剖检记录主要仪器设备与场地设备材料：剪刀、镊子、大搪瓷盆、酒精灯、死亡犬或猫。场地：传染病实训室或宠物医院化验室。训练内容与步骤

（1）先用肉眼观察动物体表的情况。（2）将动物尸体仰卧固定于解剖板上，充分露出胸腹部。（3）用70%酒精或其它消毒液浸擦尸体的颈胸腹部的皮毛。（4）检查皮下组织。（5）检查胸、腹腔器官。（6）必要时破颅取脑组织作检查。（7）妥善处理动物尸体。注意事项（1）在规定的地点和场所进行剖检，避免散播疫病；（2）怀疑炭疽时，先做末梢血液涂片，必要时取脾抹片、染色镜检，排除炭疽后再解剖；（3）采取病料应在死后立即进行，夏季不超过6～8h，冬季不超过24h；（4）病料在短时间内不能送到检验单位时，用保存液保存。宠物病料的采集、包装与送检训练目标结合病例诊断工作，学会被检宠物病料的采取、保存、包装和记录的方法。主要仪器设备与场地设备材料：（1）器材：煮沸消毒器、外科刀、外科剪、镊子、试管、平皿、广口瓶。包装容器、注射器、采血针头、脱脂棉、载玻片、酒精灯、火柴等。（2）药品：保存液、来苏儿等。（3）新鲜动物尸体。场地：传染病实验室、宠物医院。病料的采取

（1）剖检前检查（2）取材时间（3）器械的消毒（4）病料的采取方法各器官、组织病料的采取方法

（1）内脏及淋巴结（2）液体性病料（3）肠（4）皮肤（5）胎儿（6）骨、脑（7）粪、尿病料的保存

1.细菌检验材料的保存

2.病毒检验材料的保存

3.病料组织学检验材料的保存病料的包装与送检

（1）液体病料（2）盛装组织或脏器的玻璃容器（3）当怀疑为危险传染病（炭疽、禽流感）的病料时，应将盛病料的器皿于金属匣内，将匣焊封加印后装入木匣寄送注意事项（1）采取微生物检验材料时，要严格按照无菌操作手续进行，并严防散布病原。（2）要有秩序地进行工作，注意消毒，严防本身感染及造成他人感染。（3）正确地保存和包装病料，正确填写送检单。（4）通过对流行病学、临诊病状、剖检材料的综合分析，慎重提出送检目的。病原细菌的形态检查训练目标学会细菌染色标本片（抹片）的制备和几种常用的染色方法。主要仪器设备与场地（1）器材载玻片、接种环、眼科镊子、显微镜、酒精灯、火柴、香柏油、二甲苯、吸水纸、凹玻片、盖玻片（22mm×22mm）、生理盐水、95%酒精、冰醋酸、各种染色液等。（2）病料。细菌标本片的制备

（1）玻片准备（2）抹片制备（3）干燥（4）固定不同细菌材料细菌标本片的制备

（1）液体材料细菌标本片的制备（2）非液体材料细菌标本片的制备（3）组织脏器材料细菌标本片的制备细菌标本固定方法

（1）火焰固定：将干燥好的抹片，使涂抹面向上，以其背面在酒精灯外焰上如钟摆样来回拖过数次，略作加热但不能太热，以不烫手为度)进行固定。（2）化学固定：血液、组织脏器等抹片要作姬姆萨染色，不用火焰固定，而用甲醇固定，细菌标本片的染色

（1）美蓝染色法（2）革兰氏染色法（3）瑞氏染色法（4）姬姆萨染色法美蓝染色法在已干燥固定好的抹片上，滴加适量的(足够覆盖涂抹点即可)美蓝染色液，经1～2min，水洗，干燥(可用吸水纸吸干，或自然干燥，但不能烤干)，镜检。菌体染成蓝色。革兰氏染色法在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫溶液，经1～2min，水洗；加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1～3min，水洗；加95%酒精于抹片上脱色，约0.5～1min，水洗；加稀释的石炭酸复红(或沙黄水溶液)复染10～30s，水洗；吸干或自然干燥，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。瑞氏染色法抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可稍多加些，或看情况补充滴加；经1～3min，再加约与染液等量的中性蒸馏水或缓冲液，轻轻晃动玻片，使之与染液混合，经5min左右，直接用水冲洗(不可先将染液倾去)，吸干或烘干，镜检。细菌染成蓝色，组织细胞细胞浆呈红色，细胞核呈蓝色。姬姆萨染色法抹片甲醇固定并干燥后，在其上滴加足量染色液或将抹片浸入盛有染色液（于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5～10滴姬姆萨染色液原液，即稀释为常用的姬姆萨染色液）的染缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干，镜检。细菌呈蓝青色，组织细胞细胞浆呈红色，细胞核呈蓝色。细菌标本片的观察细菌的基本形态有球形、杆形、螺旋形，排列方式常见有单个散在、成双、成链、不规则排列等。细菌经革兰氏染色后可染成蓝紫色（G+细菌）或红色（G-细菌），经美蓝染色后染成蓝色。病原细菌的分离培养实训目标学会划线分离培养的基本要领和方法，了解厌氧菌培养的原理及其方法，熟悉细菌的分离培养技术。主要仪器设备与场地设备材料：普通琼脂平板、斜面、麦康凯平板、接种环、酒精灯、记号笔、培养箱。场地：传染病实验室需氧菌的分离培养方法

（1）病原细菌划线分离培养（2）纯培养菌的获得与移植法（3）肉汤增菌培养（4）穿刺接种厌氧菌的分离培养方法

（1）焦性没食子酸法（2）肝块（疱肉）肉汤（3）共栖培养法（4）高层琼脂法（摇振培养法）细菌在培养基上的生长特性观察

（1）固体培养基上的生长特性（2）液体培养基上的生长特性（3）半固体培养基上的生长特性注意事项（1）细菌的分离培养必须严格无菌操作。（2）灭菌接种环或接种针在挑取菌落之前应先冷却。（3）划线接种时应先将接种环的环部稍稍弯曲，以便于划线时环与琼脂面平行，这样不易划破琼脂；同时划线时应用力适度，太重易划破琼脂，太轻又可能长不出菌落；分区划线接种时，每区开始的第一条线应通过上一区的划线。（4）不同细菌需要的培养时间相差很大，应根据不同的菌种培养观察需足够的时间。病原细菌生化试验实训目标（1）掌握细菌鉴定中常用生化试验的原理、方法和结果判定。（2）了解细菌生化试验在细菌鉴定及疾病诊断中的重要意义。主要仪器设备与场地（1）器材恒温箱、微波炉或电炉、三角烧瓶、烧杯、平皿、试管、酒精灯、接种环、精密PH试纸、各种细菌培养物等。（2）试剂蛋白胨、氯化钠、糖类、磷酸氢二钾、95%酒精、硫酸铜、浓氨水、10%氢氧化钾、3%淀粉溶液、对二甲氨基苯甲醛、浓盐酸、硫代硫酸钠、10%醋酸铅水溶液、磷酸二氢铵、硫酸镁、枸橼酸钠、甲基红、0.5%溴射香草酚蓝酒精溶液、1.6%溴甲酚紫酒精溶液、0.2%酚红溶液、蒸馏水、琼脂、1mol/L氢氧化钠溶液等。训练内容与步骤

（1）糖类分解试验（2）甲基红（M.R）试验（3）维-培（V.P）二氏试验（丁二醇发酵试验）（4）靛基质试验（5）硫化氢生成试验（6）枸橼酸盐利用试验病原细菌的药敏试验实训目标学会常用抗菌药物的药敏试验，为合理用药打下良好基础。主要仪器设备与场地设备材料：琼脂培养基、肉汤培养基，青霉素、链霉素、磺胺嘧啶及黄连素、庆大霉素、磺胺嘧啶等药物的干燥滤纸片，葡萄球菌、大肠杆菌等菌种，酒精灯、试管、微量注射器、微量吸管、恒温培养箱。场地：传染病实验室。纸片法

（1）抗菌素纸片的制备（2）培养基（3）菌液（4）试验方法（5）结果测定葡萄糖指示法

（1）抗菌素纸片及菌液的准备，同纸片法（2）配制指示培养基（3）灭菌后，待培养基凉至50℃左右时，加入菌液0.5ML，充分混匀后（防止气泡）作倾注培养。（4）待凝固后，用镊子将抗菌素纸片分别贴于表面，于37℃条件下培养24hr后观察。（5）结果判定：纸片周围有细菌生长者呈现黄色，不生长时仍为紫色，并侧量抑菌圈的直径，判定其敏感方法，方法同纸片法。试管法试管法是将药物作倍比稀释，观察不同含量对细菌的抑制能力，以判定细菌对药物的敏感度，常用于测定抗菌素及中草药对细菌的抑制能力。注意事项（1）器材（2）培养基成分（3）敏感菌株（4）标准液和被检液（5）培养时间（6）PH值动物接种试验实训目标学会实验动物的接种方法主要仪器设备与场地设备材料：（1）实验动物：家兔、豚鼠、鸡、小白鼠等。（2）接种材料：细菌培养物（肉汤培养物或细菌悬液）、尿液、脑脊液、血液、分泌物、脏器组织悬液等。（3）接种器材：注射器、针头、剪毛剪、剪刀、镊子。场地：传染病实验室实验动物常用接种方法

（1）皮肤划痕接种（2）皮下接种（3）皮内接种（4）肌肉接种（5）腹腔内接种（6）静脉注射（7）脑内接种法接种量家兔0.20m1，豚鼠0.15m1，小白鼠0.03m1。凡作脑内注射后1hr内出现神经症状的动物作废，认为是接种创伤所致。实验动物采血法①家兔采血法②豚鼠采血法③小白鼠采血法④绵羊采血法⑤鸡采血法实验动物接种后的观察（1）外表检查（2）体温检查（3）呼吸检查（4）循环器官检查（5）实验动物经接种后而死亡或予以扑杀后，应对其尸体进行剖解，以观察其病变情况病毒的鸡胚接种技术实训目标（1）掌握病毒的鸡胚培养方法及其目的（2）学会病毒的鸡胚接种技术。主要仪器设备与场地设备材料：受精卵、恒温箱、照蛋器、卵盘、卵杯、接种箱、注射器(1～5m1)、针头、中号镊子、眼科剪和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、吸管、酒精灯、试管架、胶布、蜡、锥子、锉、煮沸消毒器、消毒剂(3％碘酊棉、75％酒精棉、5％石炭酸或3％来苏儿)。场地：传染病实验室选胚根据需要选用合适日龄的鸡胚，大多数病毒适于9～12日龄的鸡胚。鸡胚应以白色蛋壳者为好，便于照蛋观察。鸡胚应发育正常，健康活泼，不要过大、过小或畸形蛋孵化的胚。鸡胚应来自健康无病的鸡群，而且不能含有可抑制所接种病毒的母源抗体，最好选用SPF鸡胚或非免疫鸡胚。照蛋定位接种前应在照蛋器下检查鸡胚，挑出死胚和弱胚。对所有健康胚应先用红铅笔画出气室位置，再于胚胎对侧画出接种位点（进针点），接种点应避开大血管，靠近气室边缘处，离胚头约1cm左右。鸡胚接种方法①尿囊腔接种法②绒毛尿囊膜接种法③卵黄囊接种法④羊膜腔接种法注意事项（1）无菌技术（2）谨慎操作（3）保持培养条件（4）无菌试验螨虫性皮肤病螨虫过敏性皮炎的发病时间有一个显著特点，那就是集中在晚上睡觉时发作，因为床铺是螨虫最多的地方，平均一张床上至少存活有数百万只的螨虫，当我们躺上床铺的时候，其实就是钻入了螨虫的老巢，肌肤也就跟它们亲密接触了，因此这个时候最容易发病，而且发病也最严重，这就直接导致螨虫过敏性皮炎患者无法正常入眠，休息和工作都受到极大干扰。消毒技术实训目标（1）掌握宠物圈舍、笼具、用具、地面和粪便的消毒方法；（2）学会常用消毒液的配制及消毒效果检查的方法。。主要仪器设备与场地设备材料：1.器材喷雾消毒器、天平或台秤、盆、桶、缸、清扫及洗刷用具、高筒胶鞋、工作服、橡胶手套等。2.药品新鲜生石灰、粗制氢氧化钠、漂白粉、来苏儿、高锰酸钾、福尔马林等。场地：传染病实验室、宠物饲养场等。常用消毒器械的使用方法（1）喷雾器的使用方法手动喷雾器机动喷雾器（2）火焰喷灯的使用方法常用消毒剂的配制方法（1）消毒剂浓度表示法百分比浓度摩尔浓度（2）消毒液稀释计算方法浓溶液容量=（稀溶液浓度／浓溶液浓度）×稀溶液容量圈舍、用具和地面土壤的消毒（1）圈舍、用具消毒第一步先对圈舍地面、用具等进行彻底清理第二步用化学消毒剂进行消毒化学药物蒸气消毒（2）地面土壤消毒粪便的消毒（1）焚烧法（2）化学药品消毒法（3）掩埋法（4）生物热消毒法发酵池法堆粪法污水的处理污水的处理有沉淀法、过滤法、化学药品消毒法。常用的消毒方法是漂白粉消毒，用量是每立方米水用漂白粉（含25％活性氯）6g（清水）或8～10g（混浊的水）。消毒效果的检查（1）房舍机械清除效果检查（2）消毒剂选择正确性的检查（3）消毒对象的细菌学检查（4）粪便生物热消毒效果检查注意事项进行消毒时注意人的防护，如配制消毒药时要防止生石灰飞入眼中；漂白粉消毒时防止引起结膜炎和呼吸道炎；防止工作人员感染，并注意防止病原微生物散播；宠物食具及饮水器应选用气味小的消毒药。宠物免疫接种技术实训目标（1）学会免疫接种的方法与步骤；（2）熟悉动物生物制剂的保存、运送和用前检查方法。主要仪器设备与场地设备材料：1．器材金属注射器（5、10、20ML等规格）、玻璃注射器（1、2、5ML等规格）、金属皮内注射器、针头（兽用12～1