不同溶媒中草素稳定性研究

不同溶媒中草素稳定性研究

蜘蛛虱（v.jatamansijna）是一种落后于勘探动物科的植物，在《中国药典》（1977年版）中注册。具有镇静安神、理气止痛、消炎止泻、除湿等功效。其主要化学成分包括挥发油、缬草素类、黄酮类等,其中缬草素类属环烯醚萜类化合物。环烯醚萜类化合物属于臭蚁二醛的缩醛衍生物,其半缩醛结构不稳定,容易发生酸水解、热降解等。目前关于环烯醚萜类化合物稳定性的研究很少,对蜘蛛香中缬草素稳定性的系统性研究尚未见报道。本文对缬草素在不同溶媒中的稳定性进行研究,以期为蜘蛛香药材的提取、制剂、贮存提供理论依据和技术支持。1材料表面1.1仪器、检测方法Agilent1100型高效液相色谱仪(德国AgilentTechnologies);LB801型超级恒温器(辽阳市恒温仪器厂);KQ5200E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);Sartorius-BS110S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。乙腈(色谱纯,美国Fisher公司);纯净水(屈臣氏,经0.45μm水系滤膜滤过);甲醇、无水乙醇、氯仿(分析纯,北京化工厂);缬草素对照品(自制)。1.2败酱科草属植物生物量的鉴定蜘蛛香药材购自云南师宗县,经北京中医药大学石晋丽副教授鉴定为败酱科缬草属植物蜘蛛香ValerianawallichiiDC的干燥根茎及根。22草素含量测定2.1流动相乙腈-水色谱柱:LunaC18柱(250mm×4.6mm,5μm)(美国Phenomenex公司);流动相乙腈-水(68∶32),流速为0.95mL/min,检测波长为254nm,柱温35℃。缬草素在此色谱条件下的保留时间为15.7min,吸收峰对称性好且没有拖尾现象。2.2对照品溶液的制备精密称取缬草素2.0mg,置5mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.40g/L的对照品溶液。依次精密吸取对照品溶液,分别以0.1、10、20、30、40、50、60μL体积进样,按上述色谱条件测定,以进样体积为横坐标(X),以峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归,得回归方程为Y=747.54X-197.35,r=0.9998,说明缬草素在0.04~24.00μg范围内线性关系良好。2.3精密度实验取上述对照品溶液按上述色谱条件连续进样5次,记录峰面积积分值,计算出峰面积RSD值为2.37%(n=5)。2.4重复试验取5份上述对照品溶液,分别进样,测得峰面积积分值,计算RSD值为1.36%(n=5),结果表明本方法重现性较好。2.5加标回收率试验精密称取已测定含量的缬草素5份,分别精密加入缬草素对照品,甲醇溶解,按上述色谱条件测定,测得峰面积积分值,计算回收率,平均回收率为100.1%,RSD值为0.98%(n=5),表明本方法具有良好的回收率。2.6相对含量的计算计算各时间的相对含量,相对含量(%)=即时样品中缬草素含量/零时样品中缬草素含量×100%3稳定试验和结果3.1溶剂对草素的降解精密称取缬草素5份,每份0.0053g,置于25mL容量瓶中分别用甲醇、无水乙醇、氯仿、90%甲醇、90%乙醇溶解定容,把以上5种缬草素溶液分别分为6份,封于棕色容量瓶中。将样品置于25℃的水浴锅内,定时取样,HPLC法检测缬草素含量,按2.6项下公式计算出缬草素的相对含量,结果见表1。由表1可以看出缬草素在5种溶媒中随放置时间的累积含量在逐渐下降,在氯仿和无水乙醇中变化较慢,在甲醇和90%乙醇中次之,在90%甲醇中降解最快。说明氯仿、乙醇、甲醇对缬草素的溶剂化效应不同,随着极性增大,稳定性逐渐下降;缬草素在有水的条件下,降解快速,不稳定。3.2材料的提取和测定草素含量将蜘蛛香药材冷冻粉碎过60目筛,精密称取蜘蛛香药材5份,每份1.0g,分别加甲醇、无水乙醇、氯仿、90%甲醇、90%乙醇各50mL,浸泡0.5h,超声提取40min,补足失重,即得蜘蛛香提取液。把以上5种蜘蛛香提取液分别分为6份,封于棕色容量瓶中。将样品置于25℃的水浴锅内,定时取样,HPLC法检测缬草素的含量,按2.6项下公式计算出缬草素的相对含量,结果见表2。由表2可以看出,上述5种蜘蛛香提取液中随放置时间的累积缬草素的含量逐渐下降,在氯仿和无水乙醇中变化较慢,在甲醇和90%乙醇中次之,在90%甲醇中降解最快,其变化与缬草素的溶液变化趋势基本一致。4溶剂及提取溶剂对草素稳定性的影响缬草素在90%乙醇和90%甲醇中降解快速,产生包括缬草醛在内的多个极性比缬草素大的物质,推测可能是缬草素分子结构中含有酯键、环氧乙烷结构,这些官能团遇水容易分解,产生一系列物质;在无水条件下降解缓慢,且随极性的减小稳定性更好,原因可能是不同的溶剂具有不同的溶剂化效应,溶剂化效应不同,溶剂的极性对缬草素稳定性的影响也不同,适当极性的溶剂如氯仿,可使缬草素相对较稳定。不同蜘蛛香提取液中的缬草素,随着溶媒极性的增大,缬草素降解越来越严重,其降解趋势与缬草素单体在不同溶媒中的变化基本一致,可见不同提取物中的其他成分不改变缬草素的稳定性。因此制备缬草素的过程中,蜘蛛香提取应尽可能用极性较小的溶媒,但考虑到乙醇的毒性较氯仿低,故使用较高浓度的乙醇,减少提取过程中的水分,尽量避免水