药用植物zxxrrx抑制剂对小鼠腹泻的治疗作用

药用植物zxxrrx抑制剂对小鼠腹泻的治疗作用

蜘蛛香是科维托科的一种蝴蝶香。始载于《滇南本草》,2010版药典(一部)亦收载。为云南省多民族共用的传统草药,是苗药的主流品种之一,微苦、辛、温,归心、脾、胃经。功效为:理气止痛、消食止泻、祛风除湿、镇惊安神,用于脘腹胀痛、食积不化、腹泻痢疾、风湿痹痛、腰膝酸软、失眠等。课题组前期实验研究发现:蜘蛛香原粉及环烯醚萜类成分对慢性应激所致IBS模型大鼠的胃肠功能亢进具有改善作用且二者可明显减少IBS模型大鼠的排便粒数。进一步对蜘蛛香环烯醚萜类成分进行分离得到了ZXX。在以上基础上,本研究将对ZXX止泻、改善胃肠功能的药效学进行研究,为临床治疗腹泻型肠易激综合征等胃肠疾病奠定有效物质基础。1实验材料1.1动物许可证ICR小鼠,体重20~22g,雄性。购自北京金牧阳实验动物养殖有限责任公司,动物许可证编号:SCXK(京)2009-0007。1.2药物和试剂1.2.1药物、试剂和仪器蜘蛛香环烯醚萜类成分ZXX:由北京中医药大学中药化学系提供,按照蜘蛛香临床用药剂量和ZXX提取率将ZXX设为3种剂量:大剂量(1.6mg/kg)、中剂量(0.8mg/kg)、小剂量(0.4mg/kg)。复方地芬诺酯片:常州康普药业有限公司,批号:1104032。番泻叶:购自北京中医药大学国医堂。越鞠保和丸:北京同仁堂制药有限公司,批号:X0020。硫酸阿托品:天津药业集团新政股份有限公司,批号:1101222。利血平注射液:1g/L,天津金耀氨基酸有限公司,批号:1104081。伊文思蓝,Sigma进口分装。1.2.2番泻叶的制备ZXX、复方地芬诺酯、越鞠保和丸、硫酸阿托品和百忧解:取适量药物溶于0.5%CMC中制成混悬液。番泻叶配制方法:热水浸泡2次,每次20min,双层纱布过滤,合并滤液,制成40g(生药)/100mL药液,然后加入等量碳素墨水,制成20%番泻叶-50%碳素墨水的混合液。4℃保存备用。利血平注射液:用生理盐水稀释20倍后备用。1.3主要设备自主活动仪:MK-ANIMEX,日本。MC-108L型电子体温计:欧姆龙(大连)有限公司。2实验方法2.1为复方地芬诺酯组20.ICR小鼠,90只,雄性。将动物随机分为:正常对照组,番泻叶模型(4g/kg)组,ZXX高、中、低剂量组(1.6、0.8、0.4mg/kg)和复方地芬诺酯组(20mg/kg)。各组给药量均为0.2mL/10g,对照组给予0.5%CMC,每日给药1次,连续4d。第3日给药后各组动物均禁食不禁水24h,第4日各组动物给药1h后,除对照组外各组动物均灌胃给予20%番泻叶-50%碳素墨汁,对照组动物灌胃等容量的50%碳素墨汁。随后将动物单只置于800mL玻璃烧杯下,观察出现第1粒黑便的潜伏期(灌胃碳素墨汁起至第1粒黑便出现的时间),连续观察6h。2.2单次给药及应激ICR小鼠,90只,雄性。将动物随机分为:正常对照组,应激加番泻叶模型(4g/kg)组,ZXX高、中、低剂量组(1.6、0.8、0.4mg/kg)和复方地芬诺酯组(20mg/kg)。各组给药量均为0.2mL/10g,对照组给予0.5%CMC,每日给药1次,连续9d。除对照组外其它组小鼠每日用15℃冷水浸没至其胸腰段,造成应激状态。每天持续1h,共应激8d。每次应激结束后除对照组外其他动物灌胃10%的番泻叶水煎液(2g/kg)。第8日给药后各组动物均禁食不禁水12h,第9日各组动物给药1h后,除对照组外均灌胃给予10%番泻叶-50%碳素墨汁(碳素墨水与等量20%番泻叶水煎液的混合液),对照组动物灌胃等容量的50%碳素墨汁。随后将动物单只置于代谢笼中,观察出现第1粒黑便的潜伏期(灌胃碳素墨汁起至第1粒黑便出现的时间),连续观察8h。2.3小鼠解血糖给药、造模和推进率测定ICR小鼠,84只,雄性。将动物随机分为:正常对照组,利血平模型组(0.3mg/kg),ZXX高、中、低剂量组(1.6、0.8、0.4mg/kg),硫酸阿托品组(1mg/kg)和越鞠保和丸组(2g/kg),各组给药量均为0.2mL/10g,对照组给予0.5%CMC,每日给药1次,连续9d。除对照组外,其它组小鼠给药同时皮下注射利血平(0.3mg/kg)造模,对照组小鼠皮下注射等量生理盐水。第8日给药后将动物禁食不禁水24h,第9日给药后1h给小鼠灌服半固体糊[配制方法:16g奶粉、8g糖、10g小鼠饲料粉(过80目筛)和3mL1%伊文思蓝溶液,加入5%CMC至250mL,充分搅拌均匀],0.4mL/只。15min后脱颈椎处死小鼠,开腹,取出小肠,轻轻剥离后直铺于白纸上,测量小肠全长(幽门至回盲部的距离)及推进距离(幽门至蓝色半固体糊前沿的距离)。按下式计算小肠推进率。小肠推进率(%)=推进距离/小肠全长×100%。2.4动物分组及观察指标表1ICR小鼠,72只,雄性。将动物随机分为:正常对照组,利血平模型组(0.3mg/kg),ZXX高、中、低剂量组(1.6、0.8、0.4mg/kg),百忧解组(2mg/kg),各组给药量均为0.2mL/10g,对照组给予0.5%CMC,每日给药1次,连续9d。除对照组外,其它组小鼠给药同时皮下注射利血平(0.3mg/kg)造模,对照组小鼠皮下注射等量生理盐水。第7日给药并皮下注射利血平后1h,将小鼠置于自主活动记录仪中,记录4min内动物活动次数。第8日给药并皮下注射利血平后1h,将小鼠放入烧杯中,观察其眼睑闭合并评分(评分标准:眼睑全闭4分;闭3/4,3分;闭1/2,2分;闭1/4,1分;全睁,0分)。然后将体温计探头插入小鼠肛门内约1.2cm测量体温。2.5-4方差分析采用SPSS17.0统计软件分析,数据以ue0af±s表示,用One-wayANOVA进行方差分析,LSD进行组间比较,P<0.05为有统计学差异。3结果3.1短p>0.0灌服番泻叶后可引起动物腹泻。与正常对照组比,模型小鼠排便潜伏期显著缩短(P<0.01),且排出黑色稀便。与番泻叶致泻模型组比较,ZXX大剂量组可显著延长小鼠排黑便潜伏期(P<0.01),复方地芬诺酯组可明显延长小鼠排黑便潜伏期(P<0.05)。实验结果见表1。3.2各组小鼠排黑便刑期与正常对照组比,应激加番泻叶模型组小鼠排便潜伏期显著缩短(P<0.01)。与模型组比,ZXX大剂量组可显著延长小鼠排黑便潜伏期(P<0.01),复方地芬诺酯组可明显延长小鼠排黑便潜伏期(P<0.05)。实验结果见表2。3.3小鼠肠运动相关指标检测肠推进率:与对照组比较,模型组有显著性差异(P<0.01);与模型组比较,ZXX各剂量均有显著性差异(P<0.01),提示ZXX各剂量具有抑制利血平造成的小鼠肠运动亢进的作用。实验结果见表3。3.4小鼠造林后活动次数对zx的影响与对照组比较,利血平模型组小鼠自主活动显著下降(P<0.01);与模型组比较,ZXX各剂量均有增加小鼠活动次数的趋势,但无显著性差异(P>0.05)。实验结果表4。利血平慢性给药可致小鼠体温下降、闭眼。由表5可知ZXX各剂量对利血平慢性给药所致体温下降均有明显的拮抗作用,而中剂量和低计量可明显逆转利血平化小鼠的闭眼状况。4应激与腹泻对小鼠腹泻的治疗作用本研究采用番泻叶致小鼠腹泻模型,应激加番泻叶致小鼠腹泻模型和利血平造成小鼠胃肠运动障碍和行为异常模型,来观察ZXX对腹泻和胃肠功能亢进小鼠的作用。传统中医认为,番泻叶甘、苦、寒,归大肠经,具有泻热导滞、通便、利水之功效,有效成分主要为番泻苷A、B,其泻下作用比刺激性较蒽醌类及其他泻药更强,因而泻下时可伴有腹痛。将番泻叶热水浸泡2次,每次20min,双层纱布过滤,合并滤液,制成40g(生药)/100mL药液,结果腹泻率为100%。利血平能使中枢和外周交感神经末梢囊泡内NE等单胺类递质耗竭,由肾上腺素能神经功能低下,副交感神经功能相对偏亢所致,小鼠的行为学表现食欲减退、体重减轻、活动减少、腹泻等症状,其实质是兴趣和愉悦感减少,精神状态异常。小鼠利血平化阻断了交感神经对胃肠道平滑肌运动的支配作用,而突出了胆碱能神经的支配作用,从而引起胃肠运动亢进。实验发现,与番泻叶致腹泻模型小鼠比应激加番泻叶致泻模型小鼠情绪暴躁,毛发较稀疏,体重下降。在排便潜伏期测定的实验结果中显示:ZXX对应激加番泻叶(2g/kg)腹泻的作用效果(170.08±57.98)min优于对番泻叶(4g/kg)致小鼠腹泻的作用(136.40±50.97)min,提示ZXX对应激兼腹泻的治疗作用优于单纯的腹泻。在对利血平致小鼠腹泻模型胃肠运动的实验中发现,利血平化小鼠的行为学表现食欲减退、体重减轻、活动减少、腹泻等症状。实验结果显示ZXX