药用植物蜘蛛香中草醚醛提取工艺研究

药用植物蜘蛛香中草醚醛提取工艺研究

蜘蛛香是指属于真菌科的蜘蛛类植物的蜘蛛类v.whichiid。直到1977年，才被记录在《中华人民共和国药典》中。具有镇静安神、理气止痛、消炎止泻、祛风除湿的功效，主要用于失眠、腹胀、消化不良、腹泻、疟疾等。缬草素类成分(Valepo-triates)是其镇静催眠的活性成分之一。药理实验证明,缬草素类成分中的一个降解产物缬草醚醛(Homobaldrinal)的镇静作用远强于缬草素、异缬草素及乙酰缬草素,其稳定性也强于缬草素类成分。本文以蜘蛛香为研究对象,以其主要成分缬草醚醛作为考察指标,采用正交试验设计方法筛选蜘蛛香的最佳提取工艺,为蜘蛛香的提取工艺研究提供依据。1材料表面1.1色谱分析柱HP1100型高效液相色谱仪(安捷伦);色谱分析柱(美国Phenomenex公司,LunaC18);WFH-203B三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司)。1.2色谱-质谱条件药材样品购自云南昆明,经北京中医药大学石晋丽副教授鉴定为败酱科植物蜘蛛香ValerianajatamansiJ.(V.wallichiiDC.)的干燥根及根茎;缬草醚醛对照品(自制,在选定色谱条件下按面积归一化法计算含量>98%,供含量测定用);乙腈(色谱纯,美国Fisher公司);水(高纯水);乙醇(北京化工厂,分析纯)。2方法和结果2.1hplc法测定了稻草醚的含量2.1.1乙腈水0.0m色谱柱:LunaC18柱(250mm×4.6mm,5μm);乙腈∶水(50∶50)为流动相;检测波长为287nm;流速0.95mL/min;柱温35℃。2.1.2对照品贮备液精密称取真空干燥至恒重的缬草醚醛对照品10mg,置25mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,为对照品贮备液。再精密量取贮备液5mL置于10mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀即得。2.1.3u3000形貌精密吸取药材提取溶液2.0mL,蒸干,残渣加甲醇溶解,置5mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。用0.45μm微孔滤膜过滤得供试品溶液。2.1.4测量分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,按照外标一点法计算缬草醚醛含量。2.1.5测定波长的确定分别取供试品溶液和对照品溶液,于200~600nm处进行全波长扫描,结果表明,两者在212nm和287nm处均有最大吸收,但在212nm处杂峰太多,对测定影响大,故选择287nm为测定波长。2.1.6线性回归分析分别精密量取对照品溶液2、4、6、8、10、12、14μL注入高效液相色谱仪,测定其峰面积,以峰面积A对进样量c(μg)进行线性回归,方程为:A=478.37c+0.6936,r=1。结果表明:缬草醚醛的进样量在0.404~2.828μg范围内时,与其峰面积呈良好的线性关系。2.1.7进样精密度试验精密量取上述对照品溶液10μL,进样,测定峰面积,重复进样5次,计算5次测定结果,平均峰面积为961.681,RSD值为0.26%,表明该方法精密度良好。2.1.8进样检测峰面积、峰面积的测定取样品供试品溶液分别于0、1、2、4、6、8、12、24h,分别进样10μL,测定峰面积,计算8次测定结果,平均峰面积为652.821,RSD值为0.25%。结果表明样品供试溶液在24h内稳定性良好。2.1.9加样含量测定取药材粗粉5份,每份约10g,精密称定,分别制备5份供试品溶液并进行含量测定,计算测定结果平均含量为80.14mg,RSD值为2.38%。结果表明该方法重现性良好。2.1.1加样回收率测定精密称取已知药材含量的样品6份,分别添加缬草醚醛对照品溶液0.5、1.0、1.5mL,按含量测定方法测定峰面积,计算缬草醚醛回收率,平均值为98.75%,RSD值为1.68%。结果表明回收率良好。2.1.1提取液中草醚醛含量测定称取药材10g左右,加70%乙醇先浸润30min,再用20倍量回流提取3次,每次5h,滤过,合并滤液,加乙醇定容,摇匀,作为药材中缬草醚醛最大提取量的提取溶液(平行3份),按含量测定方法测定峰面积,计算药材中缬草醚醛含量分别为8.87、8.94、8.78,3次平均为8.86mg/g。2.2粉碎度的测定蜘蛛香药用部位主要为根及根茎,若直接进行回流提取,有效成分不能提取完全,故以缬草醚醛含量为指标,对其进行粉碎度的考察。分别称取3份药材,每份5g(重复3次),粉碎过14、24、40目筛,用12倍量70%乙醇提取4h。缬草醚醛含量分别为3.5、3.8、3.3mg/g,表明选用粉碎粒度为过24目筛的药材进行回流提取缬草醚醛含量较高。2.3回流提取时间及提取次数的影响因素影响提取效率的主要因素为乙醇的浓度、乙醇用量、回流提取时间及回流提取次数,故用这4个因素作为考察因素。以缬草醚醛含量作为指标,运用L9(34)正交试验设计法进行,因素水平安排详见表1。2.4提取溶剂和正交试验结果按L9(34)正交试验表设计工艺条件,称取药材10g,按正交试验各项的要求进行,先用不同浓度的乙醇浸润0.5h,回流提取规定次数和时间,滤过,合并滤液,加乙醇定容,摇匀,作为药材的提取溶液。所有正交试验都重复一次,正交试验结果见表2。用SAS8.0统计分析软件对2次正交试验结果的平均值进行方差分析,结果见表3。由表3可知,各因素对缬草醚醛含量影响以因素A最显著,其次是C和B,D因素影响最小,故确定蜘蛛香中缬草醚醛的最佳提取工艺为A1B3C3D2,即12倍量70%的乙醇回流提取2次,每次3h。2.5稳定性试验由于优选工艺未包括在正交设计表的9次试验中,故对其进行了验证试验。同一批药材,取10g,按优选工艺A1B3C3D2进行3次验证试验,测定缬草醚醛含量。结果表明,通过正交试验优选的提取工艺制备的3批样品,缬草醚醛含量基本稳定,且提取率约89%,故此法稳定可行。结果见表4。3草醚醛成分的提取蜘蛛香中缬草醚醛最佳提取工艺为:药材过24目筛,12倍量70%的乙醇浸润0.5h,回流提取2次,每次3h。本实验采用蜘蛛香中缬草素类成分降解产物缬草醚醛为指标性成分进行正交试验分析,蜘蛛香药材中缬草醚醛