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文档简介
细胞传代培养2023/10/271材料1．Hela细胞2．Hanks液，0.25％胰酶，0.02%EDTA，培养基，青、链霉素，5.6%碳酸氢钠、0.4%w/vtrypanblue、75%乙醇、0.85％生理盐水2023/10/272材料3．小三角烧瓶，培养瓶，无菌吸液管（5ml及1m1)，废液缸、载玻片、盖玻片。4.倒置显微镜、计数器、血球计数板、离心机、恒温水浴锅、C02培养箱、超净台、离心管。2023/10/273操作过程2023/10/2741．选生长良好的Hela细胞一瓶，轻摇培养瓶数次，悬浮起附着在细胞表面的上的碎片，连同生长液一起吸出。2023/10/275加入Hank’s液,洗一次;吸去Hank’s液。2023/10/276Hanks2023/10/277胰蛋白酶从无细胞面侧加入0.25％胰蛋白酶液4-5m1，翻转培养瓶，使消化液浸没细胞1min左右。
翻转培养瓶，37℃放置5～10min。2023/10/278肉眼观察细胞面出现布纹状倒出消化液，沿细胞面加入适量新配制的培养基（含血清），洗下细胞，并用吸管吹打，使细胞分散。DMEM2023/10/279按1:2或1:3分配传代培养2023/10/271037℃，5%CO2培养接种30min左右贴壁2023/10/2711DMEM48小时换生长液，3-4天可形成单层。2023/10/2712细胞长成单层后即可传代2023/10/2713注意事项掌握细胞消化时机，防止细胞损伤。注意防止污染。注意消化液
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