不同包煎方法对肺心宁胶囊中南葶子的煎出影响

不同包煎方法对肺心宁胶囊中南葶子的煎出影响

南蝗子是十字花科植物播种的艾蒿（l.）webbexpratl的干燥成熟种子。由于该药物小，即使在水中浸泡也很难过滤，因此通常使用泡沫。梁兆昌等曾对葶苈子包煎提出质疑,发现少量提取时不包煎的葶苈子浸出物明显高于包煎者,且过滤速度无明显差异。但大量提取并非如此。由于南葶苈子较北葶苈子膨胀度大,煎煮时会有大量黏性物质煎出,若大规模提取时不包煎,则会影响效率与质量。目前,对于必须包煎的药材,大生产过程中一般采用收口布袋包煎,此方法用于南葶苈子包煎,浸提效果差。耿花娥等研究还发现药材包煎时装样量不同,其效果也不同。肺心宁胶囊为治疗肺心病的有效药物,由葶苈子和川芎两味药组成,为王左教授多年验方。为提高复方中包煎药物南葶苈子成分的煎出率,本研究对不同包煎及不同装样量进行试验比较,并优选南葶苈子包煎的最佳工艺条件。1材料表面1.1实验设备和设备高效液相色谱,1100型,美国Agilent公司;DK-S24型电热恒温水浴锅,上海精宏实验设备有限公司;SartoriusCP225D型分析天平,塞多利斯科学仪器有限公司;ACS-JS型电子计数秤,梅特勒-托利多称重设备系统有限公司。1.2-d-龙双糖苷、基肥、-玉森药肺心宁组方:南葶苈子与川芎比例为2∶1。南葶苈子(批号为111121,产地为安徽,槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷含量0.08%)、川芎(批号为110708,产地为四川)均由苏州玉森新药开发有限公司鉴定;布袋(自制);甲醇(色谱纯,批号为20110406)、甲醇(分析纯,批号为T20110822)均购于国药集团化学试剂有限公司;槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷对照品(含量89%,批号为111854-201001),购于中国药品生物制品检定所。2方法和结果2.1重量测定2.1.1流动相梯度洗脱相为甲醇-水法水相,uSP-120-5-C18-BP色谱柱(4.6mmID250mm);流动相为甲醇-水(梯度洗脱),0～10min水相为90%～70%,10～30min水相为70%;流速1.0ml/min;柱温30℃;进样量10μl;检测波长254nm。2.1.2对照贮备液的制备精密称取槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷对照品22.31mg,置50ml棕色容量瓶中,用30%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照贮备液。取1ml贮备液至10ml容量瓶中,加30%甲醇定容至刻度,摇匀。标准品色谱图见图1。2.1.3供试品溶液制备取各样品溶液适量,挥干,用适量30%甲醇溶解,置10ml容量瓶中加30%甲醇定容至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。样品色谱图及阴性对照色谱图见图2、图3。2.1.4样品测定精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl,进行测定。2.2南瞳子指标成分检测按处方比例称取200g南葶苈子,100g川芎,共4份。将南葶苈子分别装于25cm×36cm的普通棉布袋、无纺布袋、双层纱布袋(医用)、单层纱布袋(医用)内。与川芎一起置于5L提取锅中加8倍量水煎煮3次,每次2h,过滤合并提取液。按2.1项下内容进行南葶苈子槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷(指标成分)含量测定,并取20ml置于蒸发皿中蒸发、干燥,称重得干膏重量M,计算出膏率。提取率与出膏率公式如下:指标成分提取率%=提取液中指标成分含量mg南葶苈子药材中指标成分含量%×南葶苈子投药量g×1000×100%指标成分提取率%=提取液中指标成分含量mg南葶苈子药材中指标成分含量%×南葶苈子投药量g×1000×100%出膏率%=Μ×提取液体积ml复方药材投药量×20ml×100%结果见表1。结果表明,各包煎袋吸水量无明显差异;不同包煎袋对复方中南葶苈子指标成分提取影响很大,其出膏率与指标成分提取率呈递增趋势。包煎袋的厚度及孔径均影响相关成分的煎出,其中以单层纱布袋包煎提取效果最佳,且孔径适合。2.3提取液的制备称取300g、500g、700g、900g、1100g南葶苈子分别装于25cmx36cm的纱布袋内,加入相应比例的川芎提取。加8倍量水煎煮3次,每次2h,过滤合并提取液。按2.1项下内容进行南葶苈子槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷指标成分含量测定,结果见图4。图4显示,南葶苈子装样量在一定范围内指标成分提取率较为稳定,约80%左右;到达一定程度后,装样越多越不利于该药指标成分的煎出,故大生产上应考虑确定最大装量范围。以25cmx36cm的单层纱布袋为例,该药装样量应在500～600g范围内为佳,约为1/4装量。2.4信度、效度分析等量称取南葶苈子分别装于相同大小的单层纱布袋内,使药物达到1/4装样量,置于提取锅内加入相应比例的川芎,共9份。采用L9(34)正交表,选择影响南葶苈子包煎提取的主要因素为:提取时间(A),提取次数(B),加水量(C)。各试验组取提取液按2.1项下内容进行含量测定,计算南葶苈子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的提取率。数据采用SPSS15.0软件及综合评分法进行分析。因素水平表见表2,结果见表3、表4。以槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的提取率为指标,由表3的结果进行直观分析,影响提取因素的主次顺序为B、A、C,且提取时间、提取次数、加水量的优水平均为3,即A3B3C3。而由方差分析结果看,因素B对提取率具有显著影响,因素A、C则均无显著性差异。进而通过SPSS15.0软件对A、C各水平间进行两两比较,发现因素A的水平3与水平1、2之间有显著性差异,故选水平3为优;因素C各水平间均无显著性差异,考虑到实际生产及南葶苈子的吸水率,最终确定的优选方案为A3B3C2,即加8倍量水,提取3次,每次2h。为检验正交实验结果的可靠性,选取优化方案重复实验3次。结果提取液中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的平均含量为80.1%,与正交实验9相符。表明此优化方案具有较高的可靠性及合理性。2.5不同部位槲皮素的提取率由于提取次数显著影响南葶苈子指标成分提取,进一步对提取次数进行考察,以验证提取3次的合理性。将药材提取4次,每次加8倍量水提取2h。取4次滤液按2.1项下内容测定槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的含量,计算提取率。结果显示,4次提取率分别为55.34%、17.02%、6.82%、0.58%。其中第3次提取的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷含量占总提取液含量的8.6%,第4次仅为0.7%。由此可见第3次提取液中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷含量仍较高;而第4次提取液中含量极低,可忽略不计。因此,确定南葶苈子包煎提取3次具合理性。3包中南瞳子指标成分的包可能出现在肺心宁复方本研究选取的主要评价指标为南葶苈子中特征性成分槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷。前期实验为排除肺心宁中川芎对南葶苈子指标成分的干扰,已对含量测定方法进行相应考察。最终采用的含量测定方法,分离效果好,且无干扰。实验对肺心宁复方中南葶苈子分别选用不同