温脾汤颗粒剂质量标准研究

温脾汤颗粒剂质量标准研究

温脾汤是在《急千金要领》中保存的。它由大黄、当归、干姜、人参、附子、芒硝和甘草制成。温脾汤功能温补脾阳,攻下冷积,该方温通、泻下和补益兼备,具有温阳祛寒,攻下不伤正的特点,为泻下剂类攻补兼施的代表方。温脾汤颗粒是在汤剂的基础上按照本方传统制法制成,目前,温脾汤更改剂型后质量标准方面的文献尚未报道。颗粒剂具有易于保存,方便服用等优势,市场前景良好。为了有效的控制药品质量,本实验采用薄层色谱法对处方中大黄、当归、人参进行定性鉴别;大黄为本方的君药,大黄素、大黄酚为其主要有效成分,故采用HPLC法,以大黄素、大黄酚作为控制本品质量的定量指标,建立处方中二者的测定方法。此方法准确、重现性好,可用于温脾汤颗粒剂的质量控制。1药品、试剂与仪器高效液相色谱仪Waterse2695/2489系列Empower工作站;XP-6百万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);LA204十万分之一分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);DZG-6050型真空干燥箱(上海森信实验仪器有限公司);B-290型喷雾干燥仪(瑞士步琦公司);RE-5205型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);HA221-40-11型超临界萃取装置(江苏南通华安超临界萃取有限公司);KQ-300VDB型双频数控超声清洗仪(昆山市超声仪器有限公司),10cm×10cm薄层硅胶G板(青岛海洋化工厂)。大黄对照药材:批号为110715-200212;当归对照药材:批号为120927-201014;人参对照药材:批号为120917-201110;甘草对照药材:批号为120904-200511;大黄素:批号为110756-200110;大黄酚:批号为110796-201017,以上对照药材与对照品均购于中国药品生物制品检定所。温脾汤配方颗粒6批(批号:130101、130102、130103、130104、130105、130106)及缺大黄、人参、当归、甘草的阴性对照样品均由康美药业股份有限公司自制。HPLC用甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。2方法和结果2.1膜层析成像2.1.1鉴别环己烷—大黄鉴别取本品0.25g,研细,加甲醇5mL,超声处理5min,滤过,滤液作为供试品溶液;同法制成缺大黄的阴性对照样品溶液。另取大黄对照药材0.2g,加甲醇5mL,超声处理5min,取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验,吸取上述两种溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷—乙酸乙酯—甲酸(12∶3∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的橙黄色荧光斑点,用氨蒸气熏后,斑点变为红色。缺大黄阴性对照样品均无相应的斑点。结果见图1。2.1.2对照药材试验取本品1.2g,加三氯甲烷40mL,加热回流1h,弃去三氯甲烷溶液,药渣挥干溶剂,加水0.5mL搅拌湿润,加水饱和的正丁醇10mL,超声处理30min,吸取上清液加3倍量氨试液,摇匀,放置分层,取上层液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为人参的供试品溶液。同法制成缺人参的阴性对照样品溶液。另取人参对照药材各1g,按照供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验,吸取上述四种溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置日光灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的紫色斑点。缺人参阴性对照样品均无相应的斑点。结果见图2。2.1.3阴性对照样品的检测取本品5g,用15mL水捏容,加乙醚振摇萃取3次,每次20mL,水液备用,合并乙醚液,挥干,残渣加乙酸乙酯1mL使溶解,作为供试品溶液。同法制成缺当归的阴性对照样品溶液。另取当归对照药材0.5g,加乙醚15mL,超声处理5min,滤过,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯1mL使溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验,吸取上述两种溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正己烷—乙酸乙酯(9∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点。缺当归阴性对照样品均无相应的斑点。结果见图3。2.2黄素和大黄酚的含量测定2.2.1流动相、检测波长色谱柱为SunfireTMC18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇—0.1%磷酸溶液(85∶15);检测波长:254nm;柱温:30℃;流量:1.0mL·min-1;理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。2.2.2大黄素溶液的制备取大黄素对照品、大黄酚对照品适量,精密称定,分别加甲醇制成每1mL含大黄素10.48μg的溶液和每1mL含大黄酚20.13μg的溶液,即得。2.2.3超声处理法取本品1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,称定重量,超声处理10min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。2.2.4阴性对照溶液的制备按处方配比,取除大黄外的其他药味,按供试品溶液的制备项下方法制备,即得。2.2.5液进样分析取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液进样分析,结果见图4。阴性对照溶液在与大黄素、大黄酚相应保留时间处未见色谱峰,结果表明阴性样品对检测无干扰。2.2.6大黄素回归方程结果精密吸取上述大黄素对照液和大黄酚对照液各1、2、4、6、10μL,按上述色谱条件测定峰面积,以各自峰面积积分值分别对大黄素和大黄酚对进样量进行回归处理得出大黄素的回归方程为Y=3443.6×103X-6.4748×103,r=1.0000,结果表明大黄素进样量在0.0105~0.1048μg与峰面积线性关系良好;大黄酚的回归方程为Y=5301.4×103X-15.897×103,r=1.0000,结果表明大黄素进样量在0.0201~0.2013μg与峰面积线性关系良好。2.2.7大黄素明目酚与天麻酚3.2.3%的量测精密吸取供试品(批号:130101)溶液,重复进样6次,测定大黄素、大黄酚的面积,计算大黄素与大黄酚的RSD分别为2.73%、2.63%。2.2.816、18、24日精密吸取供试品(批号:130101)溶液,按上述色谱条件分别于第0、4、8、16、18、24小时吸取10μL测定。结果表明,供试品溶液中大黄素、大黄酚在24h内峰面积值基本一致,计算得其RSD分别为0.47%、1.88%,表明供试品溶液在24h内稳定。2.2.9大黄素、突出突出充填品溶液的测定取同一批次(批号:130101)样品6份,分别制备供试品溶液,进样测定,结果大黄素、大黄酚的平均质量分数为0.0099、0.0059μg·g-1,RSD分别为1.42%、0.73%。2.2.1回收率的测定精密称取(批号:130101)温脾汤颗粒剂0.51g,共6份,精密加入含大黄素10.48mg·L-1,大黄酚20.13mg·L-1的对照品溶液5mL,再精密加入甲醇20mL,超声处理10min,放冷,用甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,进样测量,计算回收率,见表1。2.2.11.样品测定取3个批号的样品,分别制备供试品溶液,按拟定含量测定方法操作,测定结果见表2。3样品前处理条件考察本方为中药复方制剂,采用薄层色谱鉴别法对主要药味进行了鉴别,并进行了阴性对照试验,结果此方法简便且专属性强,能够有效控制本品的质量。在当归鉴别中,样品处理方法是先用一定量的水捏容,将样品分散在水溶液中,再用挥发性极强的乙醚萃取,实现液—液萃取,使得鉴别成分能良好的分散在乙醚萃取液中。在温脾汤颗粒的含量测定中,对供试品溶液制备条件考察,分别采取超