溶血实验报告鸡血细胞

溶血实验实验目的1、学习引发红细胞溶解的多个办法，观察溶血现象。2、理解细胞膜的渗入性及各类物质进入细胞的速度。实验原理将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内使细胞涨破，血红蛋白释放到介质当中，介质由不透明的细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液（此时的细胞膜收缩，会略有不溶性内容物），这种现象称为溶血。红细胞在等渗盐溶液中短时间之内不会发生溶血，但是由于红细胞的细胞膜对不同物质的通透性不同，时间久了，膜两侧的渗入压平衡会被打破，也会发生溶血。由于多个溶质透过细胞膜的速度不同，因此发生溶血的时间也不相似。发生溶血现象所需的时间，能够作为测量某种物质进入红细胞速度的指标。即溶血时间对应着穿膜速度实验材料和试剂鸡血、试管若干、移液管若干、洗耳球、0.85%NaCl溶液、0.085%NaCl溶液、0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）甲醇溶液、0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）丙三醇溶液、6%（5%等渗）葡萄糖溶液、2%（1.5%等渗）TritonX-100实验环节1,取鸡血7ml，加入0.85%的NaCl溶液3mL，在1000r/min条件下离心5分钟。（RBC压积量不少于0.6mL）2,剩余沉淀量1ml左右，将上述离心后的剩余红细胞按照沉淀量配成50%浓度（总体积应不少于1.2mL）每组取6支试管，分别加入以下溶液3mL（1）0.85%NaCl溶液（2）0.085%NaCl溶液（3）0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）甲醇溶液（4）0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）丙三醇溶液（5）6%（5%等渗）葡萄糖溶液（6）2%（1.5%等渗）TritonX-1004,向上述6支试管中分别加入50%红细胞悬液3滴，轻轻摇匀，（4）（5）号试管在加入红细胞悬液后，立刻混匀，制片。观察0min时的微观状况。并且之后（4）号试管每10分钟观察统计一次微观状况。（5）号试管每20min观察统计一次微观状况。观察试管中与否有溶血现象发生，统计溶血时间，并于显微镜下观察各溶液中的细胞。五，实验成果各组和对照组对比（左为对照组）0.085%NaCl溶液0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）甲醇溶液图片宏观现象0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）丙三醇溶液6%（5%等渗）葡萄糖溶液2%（1.5%等渗）TritonX-100微观现象：0.85%NaCl溶液（10×40）：0.085%NaCl溶液（10×40）：0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）甲醇溶液（10×40）：0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）丙三醇溶液（10×40）：时间图片（10×40）0min10min20min30min40min50min60min6%（5%等渗）葡萄糖溶液（10×40）:时间图片（10×40）0min20min40min60min2%（1.5%等渗）TritonX-100：实验现象宏观微观0.85%NaCl溶液细胞完整，形态扁平，呈凹陷圆盘状。0.085%NaCl溶液滴入鸡血红细胞后约4~6秒观察到试管颜色透亮统计为0.085%NaCl溶液细胞溶血时间为：5秒。若干细胞处在膨胀状态，形态变为圆球状。制片镜检观察，细胞已经涨破，形态不再完整。0.8mol/L（0.3mol/L等渗）甲醇溶液：滴入鸡血红细胞后约3~4秒观察到试管颜色开始透亮，30s后完全透亮统计为0.8mol/L甲醇溶液细胞开始溶血时间为：3秒；完全溶血时间为：30秒。，细胞若干已皱缩变形，体积变小，若干细胞体积膨胀，形态变为圆球状。0.8mol/L（0.3mol/L等渗）丙三醇溶液：滴入鸡血红细胞后约30分钟秒观察到试管颜色开始出现变化，统计为0.8mol/L丙三醇溶液细胞出现部分溶血时间为：30min。上宏观图为1h后与0.85%NaCl溶液对照比色状况，可见细胞完全溶血。由0~60min间隔10min的镜检观察发现，细胞无破裂现象，若干细胞膜下出现亮点。阐明丙三醇已进入细胞。20min时观察到部分细胞以皱破。部分细胞体积变小，但没有破裂，半数分细胞形态完整，30min，半数细胞已皱破，尚有大量的皱缩细胞，少量完整细胞40min，大量细胞以皱破，仅尚有个别完整细胞50min,已无完整细胞，全是破裂细胞和皱缩即将破裂细胞大量血影。60min，已全部是血影，细胞全部皱缩破裂。完全溶血6%（5%等渗）葡萄糖溶液滴入鸡血红细胞后约40分钟秒观察到试管颜色开始出现变化，统计为6%葡萄糖溶液细胞出现部分溶血时间为：40min。上图为1h后与0.85%NaCl溶液对照比色状况，右管仍不够透亮，可见细胞虽有溶血现象发生，但并未完全溶血。由0~60min间隔20min，大量细胞皱缩变形，且因葡萄糖的粘性存在聚集现象。40min，细胞已大量破裂，尚有个别完整细胞60min，全部细胞破裂或皱缩变形，但没有全部破裂，溶血不完全2%（1.5％等渗）TritonX-100滴入鸡血红细胞后约10~13秒观察到试管颜色开始透亮，完全透亮时间约在45~50秒，统计为2%TritonX-100l溶液细胞开始溶血时间为：11秒；完全溶血时间为：45秒。观察到溶血现象后，立刻制片镜检观察，发现此时细胞全部皱缩破裂。但尚未出现血影。细胞完全溶血六成果与讨论1号溶液和鸡血等渗，在短时间内不发生溶血（时间若过长，膜两侧的渗入压平衡会被打破，也会发生溶血），因此本次实验中控制溶血观察时间在lh内；2号溶液为低渗溶液，发生完全溶血，因此可将1号、2号溶液作为对照和另四种溶液进行比对；3号甲醇溶液中的鸡血红细胞溶血速度很快，在几秒内就已完全溶血，因甲醇的脂溶性高、分子量小，进入细胞的速度很快，因此在操作过程中规定速度快；4号丙三醇溶液即使脂溶性较高，但分子量较大，因此进入细胞的速度慢，溶血过程缓慢，在10min左右发现细胞内有亮点是由于丙三醇进入细胞，且其对光的折射率很高，使细胞看上去有亮点。5号葡萄糖溶液，因其分子量过大，进入细胞的速度很慢，在1小时的观察中，未发现太多明显溶血现象；.6号溶液中添加了表面活性剂，能够将膜蛋白抽提出来，使细胞膜的通透性增大，快速发生溶血现象，同时由于有大量膜蛋白被抽提，细胞