HIV实验室风险评估

HIV抗体初筛实验室风险评估报告量血液标本，因此他们面临着严峻的HIV职业暴露危险，保护临床检验人动中根据HIV可能对个体或群体或实验环境造成危害的高低来制定相应措施的安全防范制度和操作程序，选择相应等级的生物实验室及设备配置，2.1病原微生物实验室生物安全管理条例2.2实验室生物安全通用要求GB19489-20082.3人间传染的病原微生物名录2.5艾滋病防治条例2.6中华人民共和国传染病防治法2.8全国艾滋病检测技术规范2009年修订版类病原微生物，属能引起人和灵长类动物发病逆转录病毒科的慢病毒属，但一般情况下对未与HIV无症状携带和艾滋病患者有性接触和血液传播的3.2不同实验操作生物安全实验室级别要求HIV抗体检测(包括筛查和确证实验)、抗原检测和相关的免疫学检测录》的规定，未经培养的感染材料的操作可在BSL-2实验室进行。可分为2型：HIV1型和HIV2型。在HIV1型内，根据编码包膜蛋白的env基因和编码壳蛋白的gag基因序列的同源性又进一步分为3个组：M组(主要组)、0组(外围组)和N组(新组或非M非O组),M组内又可分为AJ10个亚型。在HIV1型和HIV2型之间，其核苷酸序列有45%的同源被灭活，但在室温下可存活7天。经化学消毒剂0.5%次氯酸钠、10%漂白粉、50%乙醇、0.3%H2O2、5%来苏儿处理10min可被灭活。紫外线对该病蛋白env和调节基因nefc,根据env基因序列异同可将HIV-1型分为A、B、4.6易感性：免疫功能低下者、结核病患者、器官移植者、输血及用4.7潜伏期：是从HIV感染到出现艾滋病临床症状和体征的时间。平均潜伏期(50%的HIV感染者进展到艾滋病期的时间)为7年～8年。在感染后的一般需要2-12周，平均45天左右血液中才可检测到HIV抗体。从感染到机体产生抗体的这一段时间检测不到HIV抗体，医学称之为窗口期。在窗口期虽测不到HIV抗体，但若被感染，体内同样有HIV病毒，同样具4.8剂量-效应(反应)关系：4血液中HIV浓度达1.00×10拷贝/ml,被HIV污染环境的锐器剌伤而感染的比率为0.3%;象变化，其N端的融合肽片段插入宿主细胞膜，导致病毒包膜与细胞膜的然后是p24抗原，最后是抗体。在感染后的10～14d内，病毒RNA水平p24抗原水平随着病毒RNA水平的发展而发展，在急性感染期就可以出现，被认为是病毒复制的间接标志，但由于检测方法的灵敏度不够而使得其检出时间要比RNA晚。从HIV感染到能够检测出HIV抗体这一时期，被称作"窗口期"。在窗口期，能够通过病毒RNA、p24抗原和CD4淋巴细胞水平来确定HIV感染。CD4淋巴细胞水平随着感染的发展而逐渐下降，当其在血液中细胞下降到200个/mL时，就会发生严重的免疫缺陷，患者就被确诊为艾滋宿主范围：宿主范围较为广泛。5、流行病学、诊断、治疗和预防5.1流行病学自1981年美国首次报告艾滋病以来，被西方人成为“20世纪的瘟疫"。这种病以侵袭人体免疫细胞CD4为主，造成细胞免疫功能缺陷，并继发体液免疫功能缺陷。自1985年我国首次报道例以来艾滋病在我国的流行呈逐年上升的趋势，目前已进入快速增长期。随着艾滋病流行趋势的日益严重，临床就诊的患者也越来越多，患者和无症状病毒感染者是本病的传染源。病毒主要存在于感染者的血液、精液、子宫和阴道分子宫和阴道分泌物中的病毒滴度最高，而其他体液(唾液、尿液和眼泪)由于病毒滴度低而不足以构成传染。高危人群有静脉注射毒者、性病患者、暗娼、HIV感染者的婴儿、部分有偿供血者、多次输血和血制品者及血透者。HIV传播的先决条件为大量而完整的传染性病毒进入易感者的恰当门户，感染HIV的可能程度取决于接触患者体液的机会、接触次数、病毒量以及是否采取保护措施。5.2临床表现从感染艾滋病病毒到发病有一个完整的自然过程，临床上将这个过程分为四期：急性感染期、潜伏期、艾滋病前期、典型艾滋病期。不是每个感染者都会完整的出现四期表现，但每个疾病阶段的患者在临床上都可以窗口期也在这个时间。HIV侵袭人体后对机体的刺激所引起的反应。咽炎等。有的还出现急性无菌性脑膜炎，表现为头痛、神经性症状和脑膜刺激症。5.2.2潜伏期感染者可以没有任何临床症状，但潜伏期不是静止期，更不是安静期，病毒在持续繁殖，具有强烈的破坏作用。潜伏期指的是从感染HIV开始，到出现艾滋病临床症状和体征的时间。艾滋病的平均潜伏期，现在认为是2-10年。这对早期发现病人及预防都造成很大困难。5.2.3艾滋病前期潜伏期后开始出现与艾滋病有关的症状和体征，直至发展成典型的艾滋病的一段时间。主要的临床表现有：.淋巴结肿大此期最主要的临床表现之一；全身症状病人常有病毒性疾病的全身不适，肌肉疼痛等症状；各种感染此期除了上述的浅表淋巴结肿大和全身症状外，患者经常出现各种特殊性或复发性的非致命性感染。5.2.4典型的艾滋病期有的学者称其为致死性艾滋病，是艾滋病病毒感染的最终阶段。此期发生各种恶性肿瘤。艾滋病的终期，免疫功能全面崩溃，病人出现各种严重的综合病症，直至死亡5.3实验室诊断5.3.1HIV抗体检测检测HIV抗体是常规使用的HIV病原学诊断的方法。HIV抗体检测方法有初筛试验和确认试验组成。初筛试验结果阳性者再做确证试验以明确诊断。目前的HIV抗体检测都是使用新一代试剂，可同时检测HIV1型和HIV2型。初筛检测的方法有间接酶联免疫吸附试验(ELISA)、明胶颗粒凝集试验(PA)和金标法(SPOT),确认检测的方法为蛋白印迹史、吸毒、高危职业等结合临床体征对病人进行HIV检测。检测出HIV抗体的时间取决于HIV感染者的反应性和HIV病毒的特性，一般在感染后1—3个月出现HIV抗体。HIV抗体初筛结果阴性者或可疑者，半年后可进行第二次检测，但不需要多次检测。HIV抗体初筛结果阳性者，须进一步做确证试验。确证试验报告HIV抗体可疑的病人，应在3个月后进行复查。确证结果阳性者都具有HIV特异的带型，确认结果是可靠的。5.3.2P24抗原检测P24抗原检测是诊断早期HIV感染的一种方法。HIV感染者多数在感染1—3个月才出现HIV抗体，抗体出现之前的这个时期称为"感染后窗口期"。在窗口期，HIV抗体是检测不到的。P24抗原的检测有助于多数急性感染者血清HIV抗体阳转之前的诊断，大约可以使抗体窗口期缩短1周，因为估计检测P24抗原到检出P24抗体间隔只有1周时间。但由于不是所有新近感染的人都可以检出P24抗原，加上该项检测费用较高，所以一般不作为常规诊断项目。5.3.3白细胞和淋巴细胞检测医生对HIV抗体确认为阳性者进行临床分期或治疗时，才需要做一些辅助性实验室检查，如白细胞和淋巴细胞检测。AIDS病人周围白细胞及淋巴细胞总数是下降状态，淋巴细胞的变化可用于评价机体免疫系统损害的程度，CD4值对于评价HIV感染的病期及预后极为重要，特别是病程后期更为重要。(2)CD4T淋巴细胞总数下降，<200/mm3,或为200~500/mm3。(3)CD4/CD8比值<1(正常时，CD4/CD8比值>1)。(4)测定β2微球蛋白，AIDS病人明显增高。5.3.4PCR检测HIV核酸聚合酶链反应(PCR)是检测特定的DNA和RNA片段的非常敏感的方法。定量PCR技术是测定HIV载量、预测疾病进程的主要方法。尽管HIV和PCR检测有上述一些用途，但是它不能作为HIV感染的常规诊断方法，只能用于特殊情况下的早期HIV感染、判断婴儿HIV感染，以及血清学不确定结果的验证和补充。在HIV的基础研究如测定HIV载量、分析HIV基因的亚型和变异等方面，PCR方法具有重要的用途。5.3.5病毒分离培养及分离HIV需要在特定的P3实验室进行，且HIV的分离率在30%~60%,这项试验仅用于HIV株的保存和科学研究。艾滋病和HIV感染是因感染HIV引起人体产生以免疫缺陷为主要特征滋病病人。(1)近期内(3-6个月)体重减轻10%以上，且持续发热达(2)近期内(3-6个月)体重减轻10%以上，且持续腹泻(每日达3-5次)一个月以上。(3)卡氏肺囊虫肺炎(PCR)(4)卡波济肉瘤KS.(5)明显的霉菌或其他条件致病感染。5.5.2若抗体阳性者体重减轻、发热、腹泻症状接近上述第1项时，可(1)CD4/CD8(辅助/抑制)淋巴细胞计数比值<1,CD4细胞计数(3)明显的中枢神经系统占位性病变的症状和体征，出现痴呆，辩5.6治疗：应用核苷类逆转录酶抑制剂药物：叠ACT制剂药物：德拉维丁、耐维拉平、赛科纳瓦、瑞托纳瓦、英迪纳瓦还有鸡布的《人间传染的病原微生物名录》中将此病毒列为第二类病原微生物，属能引起人和灵长类动物发病逆转录病毒科的慢病毒属，根据《名录》的规定，未经培养的感染材料的操作可在BSL-2实验室进行。本实验室是按二级生物建设和装备的HIV抗体初筛实验室，应用ELISA方法进行血清HIV抗体筛查。本次评估是从HIV病毒生物因子的特性开始，并对实验室常规活动和非常规活动存在的风险和潜在的风险进行评估，并对所能产生的风险制定了相应的消除、减少或控制风险的管理措施和技术措施，并对所涉及的设施、设备、人员进行了评估，制定了一系列相应文件，已经将可知和未知的风险降到了可接受程度，实验室具备开展HIV抗体初筛的能力。9.1倪语星，尚红.主编临床微生物学与检验.人民卫生出版社，20089.2叶应妩，王毓三主编.全国临床检验操作规程.南京东南大学出版社，9.3贾文祥主编.医学微生物学.人民卫生出版社，20019.4耿贯一主编.流行病学(第四版).人民卫生出