从痰论治复方和从肝论治复方抗癫痫的比较研究

从痰论治复方和从肝论治复方抗癫痫的比较研究

癫痫是由反复发作和神经异常放电引起的神经退行性疾病引起的神经退行性疾病。我国癫痫的发病率约23/(10万·年)左右,而患病率为3.5‰-4.8‰。相较于抗癫痫西药的众多毒副作用及不良反应,传统中医中药在治疗癫痫过程中发挥着不可替代的作用。针对其病因病机,中医治疗癫痫主要体现在从痰论治(代表方:定痫丸)和从肝论治(代表方:柴胡疏肝汤)。在临床实践中,两种不同治法均取得了较好的疗效。本实验观察与比较柴胡疏肝汤及定痫丸对3种不同的急性癫痫动物模型(PTZ急性癫痫大鼠模型,MES小鼠惊厥模型,士的宁惊厥小鼠模型)的药效,为探讨中医同病异治法治疗癫痫提供现代实验依据,并为进一步研究中医药同病异治癫痫的机制打下基础。1材料和方法1.1材料表面1.2方法1.2.1胡疏肝汤1d,2,4不同的制备方法PTZ、士的宁使用前用生理盐水分别配置成为10mg/mL、1mg/mL的溶液,4℃冷藏;柴胡疏肝汤加8倍量水,煎煮2次,1h/次,合并煎液后浓缩为2g/mL(即每毫升含生药量为2g);定痫丸煎煮方法同上,浓缩为1g/mL(即每毫升含生药量为1g);VPA用生理盐水配置成为10mg/mL的混悬液,用前配置并摇匀使用。1.2.2灌胃给予定癫痫丸60只wistar大鼠,随机分为6组,每组10只,各组大鼠均在造模前灌胃给药,A组给予等容积生理盐水,B组按200mg/(kg·d)给予VPA混悬液,C、D、E组分别按照2.5、5、10g/(kg·d)灌胃给予柴胡疏肝汤,F组按照12g/(kg·d)灌胃给予定痫丸。连续给药7d,早晚各1次。末次给药1.5h后腹腔注射PTZ溶液(50mg/kg),立即观察大鼠的行为学变化30min,记录发作性阵挛的潜伏期(即Racine标准中3级发作的潜伏期)以及大鼠发作级别的例数。1.2.3癫痫发作分类1.2.4消极主观模型vpa利用YSD-4GA药理生理实验多用仪筛选符合要求的小鼠,齿状夹以生理盐水浸湿后,夹住小鼠两耳尖部,进行交流电刺激,参数设定为100V,0.25s,单次刺激,以后肢强直性伸直为惊厥指标,筛选符合条件的小鼠60只,随机分为6组,分组同前,A组给予等容积生理盐水,B组按400mg/(kg·d)灌胃给予VPA溶液,C、D、E组分别按照3.75、7.5、15g/(kg·d)灌胃给予柴胡疏肝汤,F组按照20g/(kg·d)灌胃给予定痫丸。连续给药7天,早晚各一次。在末次给药1.5h后再行上述电刺激,记录其惊厥数,计算惊厥率。1.2.5小鼠经口给予不同的药物对es惊厥小鼠的成立率和死亡率的影响选取SPF级昆明小鼠60只,分组及给药方法同MES惊厥小鼠,在末次给药1.5h后,各组给予士的宁1.5mg/kg腹腔注射,记录小鼠发生强直性惊厥和死亡的例数,计算其惊厥率和死亡率。1.3统计方法发作性阵挛的潜伏期比较用方差分析,各组痫性发作级别的比较用多个独立样本的非参数检验。惊厥率和死亡率的比较用卡方检验。2结果2.1组患者不同量效关系表4B、C、D、E、F组均能延长PTZ急性惊厥大鼠三级发作潜伏期(F=5.145,P<0.05),但是C、D、E组之间三级潜伏期差异无统计学意义,它们与F组的三级潜伏期相比差异无统计学意义。6组之间的痫性发作级差异有统计学意义(χ2=16.965,P<0.01)。柴胡疏肝汤高、中、低剂量组的发作性阵挛潜伏期和痫性发作级别呈现一定的量效关系。(见表1-2)2.2组不同量效关系6组之间的惊厥率差异有统计学意义(χ2=24,P<0.001),B、C、D、E和F组较A组的惊厥率低,B组的惊厥率最低,D、E组惊厥率较F组低。并且C、D、E组呈现明显的量效关系。(见表3)2.3对b、d、e和f小鼠惊厥率和死亡率的影响6组之间的惊厥率和死亡率有统计学差异(χ2值分别为15.173和15.25,P<0.05),B、D、E和F组小鼠的惊厥率和死亡率较A组低,C、D、E的惊厥率和死亡率呈现量效关系,其中E组的惊厥率和死亡率最低。(见表4)3发展中应用胡疏肝汤抗癫痫作用的研究癫痫是神经系统常见的慢性疾病,根据癫痫的病因病机,各医家在治疗癫痫的临床实践中,逐渐总结出两大主要治法:从肝论治和从痰论治。古人称“无痰不作痫”。《丹溪心法·痫》云“无非痰涎壅滞,迷闷心窍”,指出了痰与癫痫的发生密切相关。痰浊为患,蒙闭心窍,窜走经络,是造成癫痫发作的直接因素,因此主张癫痫应从痰论治。“从痰论治”癫痫多以化痰祛浊药组方加减为主,此类方多以定痫丸化裁而来。《黄帝内经》曰:“木发之郁,太虚埃昏,云物以扰,大风乃至……目不识人,善暴僵仆”,“诸风掉眩,皆属于肝”,肝藏血,主疏泄,在体主筋,其体阴用阳,调和全身气血津液的运行,故肝之升发太过与不及,均可导致阳升风动,风动痰升和虚风内动,风动痰升,壅滞经络,闭塞清窍,从而出现抽搐、神昏、口吐涎抹等癫痫常见症状。故治肝是治疗癫痫的关键所在,治肝为本,治痰为标。在此理论基础之上,本课题组主张治疗癫痫应从肝论治,“从肝论治”癫痫多用《伤寒论》诸柴胡方加减,本课题组自拟中药复方柴胡疏肝汤,在临床上取得了满意的治疗效果。柴胡疏肝汤以柴胡桂枝汤为底方,配以四物汤,加用生龙牡、钩藤,组成柴胡疏肝汤,诸药合用,达到疏肝养肝、柔肝平肝、镇肝潜阳之效。柴胡疏肝汤和定痫丸在临床上治疗癫痫都能取得较满意的效果,但是二者的实验抗癫痫疗效是否相同,有何不同,目前还缺少此方面的研究,因此,本课题组从二者的药效入手,比较二者的抗癫痫作用。本次研究结果显示,柴胡疏肝汤中、高剂量组、定痫丸组和丙戊酸钠组均可显著延长急性PTZ致痫大鼠的发作性阵挛潜伏期(P<0.05),并且可以改善其痫性发作级别(P<0.01),而柴胡疏肝汤中剂量组、柴胡疏肝汤高剂量组、定痫丸组及丙戊酸钠组对急性PTZ致痫大鼠的发作性阵挛潜伏期的影响差异无统计学意义,但是柴胡疏肝汤高、中剂量组的发作性阵挛潜伏期高于定痫丸组。在MES小鼠模型中,6个处理组间差异有统计学意义,丙戊酸钠组、柴胡疏肝汤高、中剂量组和定痫丸组均可显著降低小鼠的惊厥率,柴胡疏肝汤中、高剂量组的惊厥率低于定痫丸。柴胡疏肝汤高、中、低剂量组具有一定的量效关系。在士的宁惊厥小鼠模型中,6个处理组间差异有统计学意义,丙戊酸钠组、柴胡疏肝汤高、中剂量组和定痫丸组均可显著降低小鼠的惊厥率和死亡率,定痫丸组的惊厥率和死亡率介于柴胡疏肝汤中、高剂量组之间。柴胡疏肝汤高、中、低剂量组具有一定的量效关系。据此,我们可以推断,癫痫无论是从痰论治,还是从肝论治,都能取得显著的实验室疗效,甚至在某些方面,柴胡疏肝汤的抗癫痫作用可能强于定痫丸。近年来有关定痫丸的文献报道较多,在此我们研究重点主要在于柴胡疏肝汤。柴胡为柴胡疏肝汤中的君药,以往有报道,柴胡加龙骨牡蛎汤能治疗癫痫。柴胡注射液能明显抑制癫痫模型电活动,提示柴胡具有抗痫作用。柴胡皂苷部分、挥发油部分可能有抗癫痫的强直阵挛发作作用,水溶性部分可能对失神发作起拮抗作用。本课题组前期实验发现,柴胡总皂苷对青霉素和PTZ慢性致痫大鼠脑电图及痫性发作有一定的改善作用,柴胡总皂苷和柴胡皂苷a具有抗小鼠MES惊厥作用,腹腔注射柴胡皂苷a对小鼠的强直性惊厥发生有较好的保护作用,并且存在量效关系的趋势,柴胡皂苷a对PTZ诱导小鼠的痫性发作在120min内以60min、90min药效作用较强。综上所述,从肝论治癫痫的代表方柴胡疏肝汤及从痰论治癫痫的代表方定痫丸都具有显著地抗惊厥、抗癫痫作用。那么二者的抗癫痫机制是否存在差异,在哪些方面存在差异,本课题组将进一步研究,探讨二者抗癫痫机制的差别。1.1.1实验动物SPF级雄性wistar大鼠60只,体重(200±20)g(动物合格证号:SCXK粤2006-0015);筛选符合MES模型条件的SPF级雄性昆明小鼠60只,体重(20±2)g(动物合格证号:SCXK粤2006-0015);另选SPF级雄性昆明小鼠60只(士的宁惊厥模型用),体重(20±2)g(动物合格证号:SCXK粤2006-0015),所有动物均购自南方医科大学实验动物中心。1.1.2药品、药品与仪器自拟中药复方柴胡疏肝汤(柴胡、黄芩、半夏、党参、桂枝、白芍、龙骨、牡蛎、当归、川芎、钩藤等)与定痫丸(天麻、川贝母、半夏、茯苓、茯神、胆南星、石菖蒲、全蝎、僵蚕、琥珀、陈皮等),以上药材均购自广州市宝芝林药业有限公司;丙戊酸钠片为湖南湘中制药有限公司生产,批号:081156;戊四唑(PT