中药软肝纤消汤预防及治疗肝纤维化的实验研究

中药软肝纤消汤预防及治疗肝纤维化的实验研究

肝实质是由多种因素引起的肝组织异常增生和虚细胞外基质（ecm）过度积聚引起的疾病。这是慢性肝炎发展到肝硬化和必要阶段的第一阶段。慢性肝病是因肝病既久,乘脾犯胃及肾,致肝、脾、肾俱损,气、血、水博结,其关键在于气滞血淤,因此治则要以活血化淤、软坚散结为主。我们用自制的中药软肝纤消汤是中药复方合剂,具有舒肝理气活血化淤的作用。为了进一步探讨其预防和治疗肝纤维化的作用,我们用自制的中药软肝纤消汤给药,经四氯化碳造大鼠肝纤维化模型进行实验研究观察其血清学和病理学的变化1材料和方法1.1研究适用的药材中药软肝纤消汤(柴胡10g黄芩10g、半夏10g、当归10g、枸杞子10g、香附10g泽泻10g、穿山甲3g、鳖甲3g、丹参20g、白芍10g、甘草10g、党参15g、白术10g、桃仁10g),由承德中药材公司提供合格药材,经承德医学院中药研究所煎煮制备;四氯化碳为北京化学试剂厂产品(分析纯);护肝片,国药准字号黑龙江葵花药业股份有限公司生产1.3实验动物Wistar大鼠,体重160～180g,雌雄各半由延边大学实验动物中心提供合格证号吉动设字10-1011号。1.4病理分类方法1.4.1空泡和球加多的脏器(-)肝细胞内未见空泡变性;(+)部分肝细胞(<25%)内出现空泡;(++)较多的肝细胞(25%～50%)内出现空泡;(+++)大量肝细胞(>50%)内出现空泡。1.4.2点、灶状死(-)肝细胞未见坏死;(+)肝细胞呈点、灶状坏死,散在分布;(++)肝细胞呈点、灶状坏死,分布范围较广;(+++)肝细胞呈大片状或桥接坏死、弥散分布。1.4.3隔肝治疗组织细度++胶原纤维表土(-)肝组织正常;(+)胶原纤维含量增加,很少形成条索分隔肝小叶,可见汇管区扩大,纤维化;(++)胶原纤维呈细条索状分隔肝小叶、散在分布,表现为不完全分隔假小叶;(+++)胶原纤维呈较宽的条索状分隔肝小叶,表现为完全分隔成假小叶。1.5预防护肝片和治疗模型将Wistar大鼠60只,随机分为预防组和治疗组,预防组又分为预防中药软肝纤消汤组、预防护肝片组和预防模型组,治疗组又分为治疗中药软肝纤消汤组、治疗护肝片组和治疗模型。造模采用四氯化碳皮下注射法,首次皮下注射四氯化碳原液(0.5ml/100g),以后每周皮下注射40%四氯化碳2次(0.3ml/100g),进行反复强化刺激,共持续7周。1.5.1评估肝、脾指标预防中药软肝纤消汤组在造模的同时给中药软肝纤消汤,给药途径采用灌胃给药法(2ml/100g,1次/d),剂量为临床成人用药量的10倍;预防护肝片组在造模的同时给用生理盐水制成的护肝片混悬液(0.9ml/100g,1次/d);预防模型组在造模的同时给常水。均为7周,然后在第8周左心室取血离心取血清测生化指标;处死后称体重及肝、脾重量并计算肝、脾指数;剖腹取肝组织,肝组织固定在10%的中性甲醛液中,用于病理学的HE染色和天狼猩红染色,HE染色用于观察肝细胞脂肪变性和肝细胞坏死情况,天狼猩红染色用于观察肝纤维组织增生情况。1.6统计方法2结果2.1预防小组2.1.1肝功能损害总生化指标检测结果预防组中中药软肝纤消汤组、护肝片组和预防模型组大鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、谷氨酰转移酶(GGP)、血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、白/球比(A/G)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)肝功能系列生化指标检测结果见表1。预防中药软肝纤消汤组、预防护肝片组与预防模型组ALT和GGP活力相比较,差异有统计学意义(P<0.05),而软肝纤消汤组与预防护肝片组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。软肝纤消汤组、预防护肝片组与预防模型组A/G、TP相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。软肝纤消汤组与预防护肝片组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。软肝纤消汤组、预防护肝片组与预防模型组LDH活力相比较,差异也有统计学意义(P<0.05);而软肝纤消汤组与预防护肝片组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2.1.2防模型组与防模型组比较软肝纤消汤组、预防护肝片组肝、脾指数与预防模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而软肝纤消汤组与预防护肝片组肝、脾指数差异均无统计学意义(P>0.05)。2.1.3各组大鼠肝脏脂肪变性,肝纤维组织增生率比较预防组大鼠肝脏的病理学变化。见表3。预防组中中药软肝纤消汤组、护肝片组肝细胞脂肪变性,肝细胞坏死,肝纤维组织增生与预防模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);而软肝纤消汤组与护肝片组肝细胞脂肪变性,肝细胞坏死,肝纤维组织增生相比,差异无统计学意义(P>0.05)。2.2治疗组2.2.1各组ast活力、bun含量治疗组中中药软肝纤消汤组、护肝片组和预防模型组大鼠血清肝功能系列生化指标检测结果见表4。治疗中药软肝纤消汤组、治疗护肝片组AST活力、BUN含量与治疗模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而治疗中药软肝纤消汤组与治疗护肝片组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。2.2.2组脾指数的比较治疗中药软肝纤消汤组和治疗护肝片组大鼠的肝、脾指数见表5。治疗中药软肝纤消汤组和治疗护肝片组与治疗模型组脾指数相比,差异有统计学意义(P<0.05);而治疗中药软肝纤消汤组与治疗护肝片组脾指数相比,差异无统计学意义(P>0.05)。2.2.3组大鼠肝功能指标及模型的比较治疗组中中药软肝纤消汤组、护肝片组和治疗模型组肝脏的病理学变化见表6。治疗中药软肝纤消汤组与护肝片组肝细胞脂肪变性、肝细胞坏死、肝纤维组织增生与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);而治疗中药软肝纤消汤组和护肝片组肝细胞脂肪变性、肝细胞坏死、肝纤维组织增生相比,差异无统计学意义(P>0.05)。3中药软肝纤消汤对大鼠肝纤维化中alt和gpp活性的影响肝纤维化是多种慢性肝病在疾病发展过程中共同的病理基础,是ECM合成与降解失衡从而导致其过度沉积的结果。肝星状细胞(hepaticstellatecell,HSC)在肝纤维化病理生理过程中起着十分关键的作用,当肝细胞发生损伤后HSC活化、增生、分化为肌成纤维细胞(myofibroblast),可合成多种与肝纤维化有关的ECM。肝纤维化是许多肝脏疾病的一个中间环节,其病变有一定的可逆性,因此,积极的防治肝纤维化是防止病情进展为肝硬化的关键。肝纤维化的病机为“因肝病既久,乘脾犯胃及肾,致肝、脾、肾俱损,气、血、水博结”,其关键在于气滞血淤,因此治则要以活血化淤、软坚散结为主,中药软肝纤消汤中丹参、柴胡、香附、木香、甘草具有舒肝理气、活血化瘀功效,党参、枸杞子、当归、白芍具有益气养血养阴功效,山甲软坚散结,黄芩清泻少阳之热,半夏有降逆止呕,泽泻利水渗湿泄热的作用。实验结果发现,服用中药软肝纤消汤和护肝片后大鼠血清中ALT、GPP的活性降低;经血清学检测LDH及TP和A/G明显高于模型组(P<0.05);中药软肝纤消汤能促进肝细胞脱氧核糖核酸(DNA)合成,减轻肝细胞变性坏死保护了肝细胞的稳定性进而促进肝细胞的增殖病理学观察显示,服用中药软肝纤消汤组与护肝片组一样还可使肝脏重量相对增加,明显抑制脾脏的增生,软肝纤消汤对肝细胞坏死及肝纤维化也有一定的抑制作用,从而也抑制了大鼠肝硬化的发展;中药软肝纤消汤与护肝片组一样还可以降低大鼠血清中AST及BUN,ALT也有降低趋势,但无统计学意义。本实验证明中药软肝纤消汤有保护肝细胞、恢复肝功能和抑制肝纤维化的作用,中药软肝纤消汤与护肝片一样对预防和治疗肝纤维化有一定的作用。近年来,实验与临床表明丹参具有明显的降低急慢性肝损伤、动物血清中转氨酶活力,促进肝细胞再生、抑制胶原纤维增生、促进已形成的胶原纤维降解和肝纤维的重吸收的作用,故在中药软肝纤消汤配方中重用了丹参。总之,中药软肝纤消汤对肝纤维化有一定的预防和治疗作用。1.2全自动生化分析方法GB204型精密电子秤由瑞士梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司生产;7150型全自动生化分析仪由日本国日立公司生产;380-2型离心沉淀器由上海手术器械厂生产(离心力4390kg),CMIAS真彩色病理图象分析系统由北京航空航天大学研