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文档简介

实验二革兰染色法

了解革兰染色法的原理掌握革兰染色的方法以及意义实验目的要求【医学】革兰染色法细菌形态检查方法不染色标本检查

常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野映光法应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式染色标本的检查

常用方法：革兰染色法、抗酸染色法、特殊结构染色法

应用：观察细菌大小、形态、排列、染色性、特殊结构，鉴别细菌【医学】革兰染色法细菌染色的方法单染法:采用一种染料染色,只能观察细菌的形态和排列特征，不能观察细菌的染色特性和进行鉴别。复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。【医学】革兰染色法革兰染色法该染色法是用于细菌分类、鉴别最常用最重要的染色法。是丹麦细菌学家革兰于1884年创建的,至今仍广泛应用。【医学】革兰染色法革兰染色法的原理★渗透学说：与肽聚糖结构有关革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量高，酒精不易渗透，而革兰阴性菌细胞壁中肽聚糖含量少，脂类含量高，酒精易渗透进入细胞内，将结合的结晶紫碘复合物脱出。★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫-碘结合形成更大的复合物，不易被酒精脱出。★等电点学说：与细菌所带电荷有关

革兰阳性菌等电点低（pI）为2~3，在中性或碱性环境中所带负电荷多；革兰阴性菌pI为4~5，所带负电荷少，影响结合染色的多少【医学】革兰染色法实验材料与方法材料:

菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌培养物

试剂：结晶紫染液、卢戈碘液

95%酒精、稀释复红

其他：玻片、接种环、酒精灯无菌生理盐水、显微镜等方法：

细菌涂片的制作：涂片、干燥、固定

革兰染色：初染、媒染、脱色、复染

油镜使用：观察染色结果并记录【医学】革兰染色法染色标本检查基本程序涂片干燥固定染色镜检【医学】革兰染色法染色标本检查的基本程序涂片－→干燥－→固定－→染色－→镜检★涂片：接种环灭菌、平板取材、细菌涂布★干燥：自然干燥、热空气干燥★固定：通过火焰外焰三次杀死细菌，固定菌膜于玻片上★染色：初染、媒染、脱色、复染★镜检：显微镜油镜使用【医学】革兰染色法革兰染色法（Gram染色）染液组成：结晶紫染液、卢戈碘液

95％乙醇、稀释复红染色方法：结晶紫初染卢戈碘液媒染95％乙醇脱色稀释复红复染1分钟30S～1min1分钟影响革兰染色的关键步骤是脱色水洗水洗水洗水洗干燥1min【医学】革兰染色法ProceduresofGramStaining初染媒染脱色复染结晶紫1分钟卢戈氏碘液1分钟95%酒精30秒稀释复红1分钟【医学】革兰染色法革兰染色结果紫色－－革兰阳性菌红色－－革兰阴性菌【医学】革兰染色法染色结果【医学】革兰染色法革兰染色意义★有助于鉴别细菌★有助于选择用药★有助于了解细菌的致病性【医学】革兰染色法影响革兰染色的因素操作因素★涂片的厚薄★脱色时间的长短染液因素★卢戈碘液放置时间过长★

95％乙醇挥发

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