锁阳化学成分研究

锁阳化学成分研究

cyykorrizan是锁定阳科的锁阳植物。这是多年生的半生植物。它的肉是棕色的，通常与小麦科的白刺科（nitroll）一起生长。具有抗旱性、耐盐碱性、耐寒性。主要分布在新疆和内蒙古西北部的沙漠地区。古代中医用锁阳的干燥茎治疗阳痿精虚、阴衰血竭、老年气弱阴虚等症,近年研究表明锁阳在防癌、免疫调节、延缓衰老、防治心血管疾病、治疗白细胞减少等方面也具有重要医疗价值。锁阳化学成分研究报道:张倩等从新疆锁阳花序的乙醇提取物张倩等从新疆锁阳花序的乙醇提取物中分离鉴定得到4个黄酮类化合物。柴田浩树从锁阳的正丁醇提取物中提取分离得到没食子酸、原儿茶酸、棕榈酸。张思巨等从锁阳中分离得到柑桔素、异槲皮苷、儿茶素、表儿茶素、熊果酸、乙酰熊果酸、β-谷甾醇和胡萝卜苷等,又用薄层色谱-气质联用方法,分离鉴定出23种挥发性成分。本文作者从锁阳95%(φ)乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分分离得到5个化合物,经现代波谱手段并参考相关文献分别鉴定为:4-甲基邻苯二酚(4-methylcatechol,1)、3、4-二羟基苯甲酸乙酯(3,4-dihydroxybenzoicacidethylester,2)、epiphyllocoumarin(3)、(-)-落叶脂素[(-)-lariciresinol,4]、dihydroapigenin(5),其中化合物1-4为首次从锁阳科植物中分离得到,化合物5为首次从锁阳植物中得到。1药品、试剂与仪器BRUKER-APX-400型核磁共振光谱仪(TMS作内标,瑞士Bruker公司)。柱色谱硅胶(45～75μm,青岛海洋化工有限公司),薄层色谱硅胶为GF254(青岛海洋化工有限公司),石油醚(沸程60～90°C)、丙酮、乙酸乙酯等均为分析纯试剂。锁阳药材购自于内蒙古,经石河子大学药学院谭勇副教授鉴定为锁阳科锁阳属植物锁阳(CynomoriumsongaricumRupr.)的干燥肉质茎。标本号为No.20090715,保存在石河子大学药学院。2化合物219.8m的合成锁阳药材12.0kg,粉碎后依次用10倍、10倍、8倍量体积分数为95%的乙醇溶液回流提取3h,减压回收溶剂得浸膏2.0kg,依次采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。氯仿(13.8g)和乙酸乙酯(27.8g)萃取部分合并后用硅胶柱色谱分离,经石油醚-乙酸乙酯溶剂系统梯度洗脱(体积比为100∶0-0∶100)。石油醚-乙酸乙酯(体积比为100∶5)洗脱的流份(163.9mg),进一步用SephadexLH-20纯化(60.0mg),再经制备液相(体积分数为10%的乙腈溶液)纯化得到化合物1(5.4mg)。石油醚-乙酸乙酯(体积比为100∶10)洗脱的流份(266.9mg),经硅胶柱进一步纯化,在石油醚-乙酸乙酯-丙酮(体积比100∶4∶4)的洗脱流份(64.9mg),经开放ODS进一步纯化,体积分数为20%的甲醇溶液洗脱得到化合物2(19.8mg)。石油醚-乙酸乙酯(体积比为100∶70)洗脱的流份1.6g,经氯仿-甲醇(体积比为100∶4)洗脱的流份(71.0mg),经开放ODS进一步纯化,体积分数为30%的甲醇溶液洗脱得化合物3(12.7mg)。氯仿-甲醇(体积比为100∶2)洗脱的流份(76.4mg),经开放ODS进一步纯化,体积分数为30%的甲醇溶液洗脱得化合物4(13.0mg)。石油醚-乙酸乙酯(体积比为100∶20)的洗脱流份(2.2g),经硅胶柱纯化,在石油醚-乙酸乙酯-丙酮(体积比为100∶6∶6)的流份(102.6mg),经硅胶柱进一步纯化,在石油醚-乙酸乙酯-丙酮(体积比100∶8∶8)的流份(63.4mg),经开放ODS进一步纯化,体积分数为40%的甲醇溶液洗脱得化合物5(8.0mg)。3化合物35的合成化合物1:白色粉末(MeOH),mp:64～66℃。1H-NMR(400MHz,CD3OD)谱中,δ:6.59(H,d,J=8.4Hz,H-5)、6.56(1H,s,H-3)、6.43(H,d,J=7.6Hz,H-6)为苯环上的3个氢信号,δ2.14(3H,s,-CH3)为甲基质子信号。13C-NMR(100MHz,CD3OD)谱中7个碳信号分别为δ:146.2(C-2)、144.0(C-1)、130.5(C-4)、121.3(C-5)、117.3(C-3)、116.3(C-6)、20.9(-CH3)。经与文献的波谱数据比较,鉴定化合物1为:4-甲基邻苯二酚(4-methylcatechol)。化合物2:白色粉末(MeOH),mp:132～135℃。1H-NMR(400MHz,CD3OD)谱中,δ:7.32(1H,s,H-2)、7.30(1H,d,J=8.0Hz,H-6)、6.68(1H,d,J=8.0Hz,H-5)为苯环上的3个氢信号,δ:4.20(2H,q,J=7.2Hz,H-8)、1.23(3H,t,J=7.2Hz,H-9)为乙氧基信号。13C-NMR(100MHz,CD3OD)对谱中给出了δ168.5(C-7)的羰基信号,δ:151.7(C-4)、146.3(C-3)、123.7(C-1)、123.0(C-6)、117.5(C-5)、116.0(C-2)为苯环上的6个碳信号,δ61.8(C-8)为1个连氧乙基碳信号,δ14.8(-CH3)为甲基碳信号。经与文献的波谱数据比较,鉴定化合物2为3,4-二羟基苯甲酸乙酯(3,4-dihydroxybenzoicacidethylester)。化合物3:黄色固体(MeOH)。1H-NMR(400MHz,CD3OD)谱中,δ7.99(1H,d,J=9.6Hz,H-11)和δ6.02(1H,d,J=9.6Hz,H-12)为1组顺式双键的2个质子信号,δ:6.78(1H,brs,H-2′)、6.73(1H,brd,J=8.4Hz,H-6′)、6.66(1H,d,J=8.4Hz,H-5′)提示为苯环的1、3、4位三取代,δ6.30(1H,s,H-6)为苯环上的单峰信号。13C-NMR(100MHz,CD3OD)谱中,δ:161.8(C-5)、156.3(C-7)、153.0(C-9)、提示为间苯三酚的结构片段,δ:146.7(C-3′)、146.6(C-4′)、131.4(C-1′)、119.8(C-6′)、116.4(C-5′)、114.9(C-2′)提示为黄酮类化合物B环的3′、4′位羟基取代的碳信号,δ:83.5(C-2)、67.9(C-3)、27.9(C-4)推测为黄烷醇的C环2、3、4位的碳信号。HMQC谱中,δ7.99(1H,d,J=9.6Hz,H-11)与δ141.2(C-11)相关,δ6.02(1H,d,J=9.6Hz,H-12)与δ110.2(C-12)相关,δ6.30(1H,s,H-6)与δ95.6(C-6)相关,HMBC谱中,δ7.99(1H,d,J=9.6Hz,H-11)与δ:164.4(C-13)、156.3(C-7)、153.0(C-9)存在远程相关,δ6.02(1H,d,J=9.6Hz,H-12)与δ164.4(C-13)和δ103.5(C-8)存在远程相关。在化合物的CD谱中,230nm处有负吸收([θ]230-19915.9)。与文献对照在相同的波长下效应一致。该化合物的NMR数据(表1)与文献报道的数据一致,故鉴定3为epiphyllocoumarin(结构见图1)。化合物4:无色结晶(MeOH)。[α]25DD25=-25.0(c=0.08,MeOH)、[α]23DD23=-25.0(c=0.08,MeOH)、[α]20DD20=-25.0(c=0.08,MeOH)。1H-NMR(400MHz,CD3OD)谱中,δ:6.90(1H,s,H-2)、6.79(1H,br.s,H-2′)、6.76(1H,br.d,J=7.8Hz,H-6)、6.74(1H,br.d,J=7.8Hz,H-6′)、6.71(1H,d,J=7.8Hz,H-5)、6.64(1H,d,J=7.8Hz,H-5′)上述6个氢信号提示为2个1、3、4取代的苯环。δ4.74(1H,d,J=7.2Hz,H-7)为连氧质子信号。13C-NMR(100MHz,CD3OD)谱中,δ:135.7(C-1)、110.5(C-2)、148.9(C-3)、147.0(C-4)、115.9(C-5)、119.7(C-6)、133.5(C-1′)、113.3(C-2′)、148.9(C-3′)、145.7(C-4′)、116.1(C-5′)、122.1(C-6′)为12个sp2杂化的碳信号,且取代位一致。δ:84.0(C-7)、54.0(C-8)、60.4(C-9)、33.4(C-7′)、43.8(C-8′)、73.5(C-9′)、55.5(2×OCH3)为sp3杂化的碳信号。化合物4的波谱数据(表1)与文献报道的数据一致,故鉴定4为(-)-落叶脂素[(-)-lariciresinol](结构见图1)。化合物5:淡黄色结晶(MeOH),mp:242～244℃。1H-NMR(400MHz,CD3OD)谱中,δ7.32(2H,d,J=8.8Hz,H-2′,6′)和δ6.80(2H,d,J=8.8Hz,H-3′,5′)提示为黄酮母核B环的AA′BB′偶合系统。δ5.87(2H,br.s,H-6,8)提示为黄酮母核A环上的6、8位氢信号,δ:5.32(1H,dd,J=2.8、12.8Hz,H-2)、3.10(1H,d,J=12.8、17.2Hz,H-3-trans)、2.66(1H,d,J=2.8,17.2Hz,H-3-cis)为二氢黄酮母核C环的2、3位氢信号。13C-NMR(100MHz,CD3OD)谱中,共给出15个碳信号,其中13个sp2杂化的碳信号,2个sp3杂化的碳信号。其中δ197.7(C-4)为羰基碳信号,δ:168.4(C-7)、165.4(C-9)、164.8(C-5)为黄酮母核A环的间苯三酚结构片段,δ:159.0(C-4′)、131.0(C-1′)、129.0(C-2′,6′)、116.3(C-3′,5′)提示为黄酮母核B环的对位取代,δ97.0(C-8)和δ96.1(C-6)提示为黄酮A环C-8、C-6的碳信号。δ80.4(C-2)和δ44.0(C-3)为二氢黄酮的2、3位碳信号。在化合物的CD谱中,289nm处有负吸收([θ]289.5-46239),与文献对照在相同的波长下效应一致。该化合物的NMR数据与文献报道的数据一致。故鉴定化合物5为dihydroapigenin。4主要化合物5-3-取代苯甲酸甲酯从锁阳95%(φ)乙