高效液相色谱法测定玉龙美腮口服液中2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-o-b-d-葡萄糖苷

高效液相色谱法测定玉龙美腮口服液中2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-o-b-d-葡萄糖苷

七宝美赞口服由三七、当归、补骨脂（炒苦艾酒）、枸杞（酒蒸发）、兔蚕丝籽（炒苦艾酒）、椰子（酒蒸发）。有滋补肝肾、补血益精的功效,主要用于治疗肝肾两虚,须发早白,盗汗,腰酸带下,筋骨萎弱,腰腿酸软,带下清稀。现代药理研究表明,何首乌所含的2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄糖苷(以下简称为二苯乙烯苷),具有抗衰老、降低胆固醇、保肝、提高免疫力等功能,故该成分是七宝美髯口服液的活性成分之一。因此,为了控制七宝美髯口服液的质量,保证其临床药效,本文采用高效液相色谱法测定其主要有效成分二苯乙烯苷的含量,建立其含量测定方法。1仪器和试剂盒1.1高效液相色谱法Waters高效液相色谱仪,包括WatersE2695泵,2489紫外检测器,Waters柱温箱,液相色谱工作站(美国Waters公司),XS105DU分析天平(美国METTLERTOLEDO公司)。1.2药品、试剂与对照品样品:七宝美髯口服液(新乡佐今明制药股份有限公司,批号20120809,20120811,20120812);对照品:二苯乙烯苷对照品(中国食品药品检定研究院,批号0844-200003)。试剂:乙腈(色谱纯,美国Fisher公司),水为重蒸馏水(自制),其它试剂均为分析纯。2方法和结果2.1流动相、检测波长色谱柱:AglentZorbaxSB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-水(20∶80);流速:1.0mL/min;检测波长:320nm;柱温:30℃。理论塔板数按二苯乙烯苷峰计算,不得低于2000。2.2溶液制备2.2.1试验溶液的制备精密量取本品1mL,转移至10mL的容量瓶中,加50%乙醇定容至刻度,摇匀,作为供试品溶液。2.2.2对照溶液的制备精密称取二苯乙烯苷对照品适量,加50%乙醇定容于棕色容量瓶中,制成每1mL含0.485mg的对照品储备液。2.2.3阴性对照溶液的制备取处方中的药材用量,除去何首乌,按照生产工艺制成阴性制剂,按照供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液。2.3方法研究2.3.1样品的干扰试验分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性溶液各10μL,注入液相色谱仪,按上述条件进行测定,对比色谱图(见图1A、B、C),在对照品出峰的保留时间处,阴性样品无此峰,表明阴性样品不干扰二苯乙烯苷的测定。2.3.2标准曲线的绘制精密吸取对照品储备液0.2、0.8、1.0、1.2、1.6mL,置同一10mL容量瓶中,用50%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得系列浓度对照溶液,分别精密吸取20μL,按上述液相条件,进样分析。以对照溶液进样浓度(X)对峰面积积分值(Y)作图,绘制标准曲线,得回归方程为Y=3.94×103X+2.75×103,r=0.9997,n=5。表明二苯乙烯苷在9.7~77.6μg/mL范围内与峰面积间呈良好的线性关系。2.3.3进样稳定性精密吸取二苯乙烯苷对照品溶液10μL,按上述色谱条件,连续进样6次,测定峰面积值,计算出RSD=0.62%,n=6。结果表明该条件下,仪器精密度良好。2.3.4加样检测二苯乙烯苷的峰面积取供试品溶液,分别于0、2、4、6、8h进样,每次10μL,测定二苯乙烯苷的峰面积,计算含量,结果:RSD=0.74%,n=5。表明供试品溶液在配制后8h内稳定性良好。2.3.5重复试验依次精密量取同一批次样品6份,按供试品溶液方法制备,依法测定,其RSD=1.16%,n=6。表明该方法重现性良好。2.3.6加样回收率试验取已知含量的样品(批号:20120812,二苯乙烯苷含量为2.542mg/mL)6份,每份精密量取本品0.5mL,分别精密加入一定量的二苯乙烯苷对照品储备液2.5mL,按供试品溶液的制备方法制备并测定含量,回收率结果见表1。2.4样品含量的测量分别取不同批号的样品,按本方法的测定条件,分别测定各样品中二苯乙烯苷的含量,测定结果见表2。3苯乙烯苷的含量测定含何首乌的制剂多以大黄素、大黄酚等成分为指标进行含量测定,但其并非何首乌的专属性成分,2010版《中国药典》一部制何首乌和七宝美髯颗粒的质量标准中,也都将二苯乙烯苷作为含量测定的对象。2,3,5,4-四