脾虚型肠易激综合征模型兔活体舌象和舌组织病理形态学的变化

脾虚型肠易激综合征模型兔活体舌象和舌组织病理形态学的变化

舌的变化与疾病密切相关。在中医的辨证论治中，苔藓观察是一个重要的客观依据。肠易激综合征(irritablebowelsyndrome,IBS)是以腹痛、腹部不适伴排便习惯改变为特征的慢性功能性胃肠病,研究表明腹泻型肠易激综合征患者舌苔存在菌群失调,而国内对脾虚型肠易激综合征模型舌象病理组织学的变化均未见报道。为此,本实验观察了脾虚型肠易激综合征模型whitehairandblackeyesrabbit(WHBE)兔的舌象病理组织学的变化,以期对脾虚型IBS模型舌象病理变化有全面的认识。1材料和方法1.1雄各半pqWHBE兔18只和日本大耳白兔18只,体重为1.8~2.1kg,普通级,雌雄各半,由上虞市星火兔业养殖场提供[SCXK(浙)2005-0022]。将WHBE兔和日本大耳白兔随机分成2组,其中正常对照组6只,脾虚型肠易激综合征模型复制组(造模组,12只),模型复制成功后,处理6只,剩下6只自然恢复10d。1.2模型对照组饲养实验兔进入本中心后,预养3d,期间观察兔的一般情况,若有拉稀、肛温不正常者剔除。观察期间第2~3d,给每只兔子称重,测温2次,并观察记录各兔子的饮水量和饮食量。观察期结束后,确定合格的兔子,进入实验。将WHBE兔和日本大耳白兔各随机分成2组,即正常对照组6只,模型对照组12只。将正常对照WHBE兔和日本大耳白兔组放入另一个房间中正常饲养。模型对照组WHBE兔和日本大耳白兔在同一环境中饲养。除正常对照组外,其余各组实验兔上午8:30开始在温度37℃~39℃,相对湿度为100%的环境下湿热应激连续7d,每天湿热处理4h,作为预处理,然后第7天下午开始给模型对照组和自然恢复组灌胃给予番泻叶3g/kg,灌胃量为10mL/kg,连续灌胃番泻叶7d,期间正常对照组每天灌胃给予生理盐水10mL/kg。造模期间模型对照组饲喂减半,但不限水。连续灌胃番泻叶7d后,处理模型对照组实验兔6只,留6只模型对照组使其自然恢复10d,正常饲养,并于恢复10d后,处理正常对照组和自然恢复组实验兔。1.3观察指标1.3.1生长模拟观察,初心部分配合用拇指和食指捏住实验兔两颌颊,单手法固定,另手持开口器撑开下颌,在自然光下先用肉眼观察大体舌象,观察内容参照中医临床要求,舌色分淡、微红,淡红(正常)、红、绛五级。1.3.2舌下组织密度检测实验结束后处死实验兔,从舌根部剪下舌,中性甲醛液固定,避开舌中沟,纵向取材,经徕卡病理组织处理机脱水、石蜡包埋,切成3μm薄片,捞片、烤片、脱蜡至水、按常规HE染色方法进行染色,光镜观察其舌背黏膜上皮层。以100倍或400倍视野为单位,对舌背隆起前、后固有层乳头密度,舌背隆起前基底层细胞核分裂相频数,舌背隆起前菌状乳头密度进行全程计数。用测微尺测量舌下上皮层和角质层厚度。光镜观察,测微尺计量有关指标。1.4统计方法所有数据均采用x¯±sx¯±s表示,并用SPSS12.0软件进行统计,采用方差分析,确定差异显著性。2结果2.1平均兔舌色及苔藓、皮的生长正常对照组WHBE兔和日本大耳白兔舌色淡红或红,全舌有明显白苔,舌上湿润;脾虚型IBS模型对照组实验兔舌色微红或淡,苔少,苔水滑,舌质嫩;自然恢复10d后,自然恢复组实验兔的舌色均有不同程度的恢复,呈舌色呈微红或淡红色,但与正常对照组比舌色稍差。2.2固有层新生儿密度100倍下观察每视野背隆起前、后固有层乳头密度,结果见表1。由表1结果可见,与正常对照组比较,脾虚型IBS模型兔背隆起前后固有层乳头密度均显著降低(P<0.01);自然恢复10d后,自然恢复组实验兔背隆起前后固有层乳头密度仍显著低于正常对照组(P<0.01);且WHBE兔和日本大耳白兔品种间比差异不显著(P>0.05)。2.3模型大鼠血清中whbe兔菌状区域分布400倍下观察每视野核分裂相频数,100倍下观察每视野菌状乳头密度,结果见表2。由表2可见,模型对照组实验兔背隆起前基底层核分裂相频数显著低于正常对照组(P<0.01),自然恢复10d后,自然恢复组实验兔仍低于正常对照组(P<0.01)。与正常对照组比,模型对照组实验兔菌状乳头密度均呈不同程度的下降趋势,其中WHBE兔下降显著(P<0.05),自然恢复10d后,实验兔的菌状乳头密度与正常对照组比差异不显著(P>0.05);WHBE兔和日本大耳白兔品种间比差异不显著(P>0.05)。2.4两品种全血药浓度对whbe兔角质层、上角质层和上角质层厚度的影响100倍下测舌下上皮层、角质层厚度,结果见表3。由表3结果可见,模型对照组实验兔舌角质层、上皮层厚度以及角质层/上皮层比值均显著大于正常对照组(P<0.01),且自然恢复10d后,自然恢复组实验兔舌角质层、上皮层厚度和角质层/上皮层比值虽有所减少,但实验兔舌角质层均仍显著大于正常对照组(P<0.05),且WHBE兔的上皮层显著高于正常对照组(P<0.05),日本大耳白兔角质层/上皮层比值显著高于正常对照组(P<0.05),WHBE兔和日本大耳白兔品种间比差异不显著(P>0.05)。2.5胞层核酸染色由图1~6(见彩插1)可见,脾虚型IBS模型WHBE兔和日本大耳白兔与正常对照组比,棘细胞层细胞核小,胞体膨大,胞核及胞浆染色淡,核膜及胞膜较明显,有明显空泡变性、空泡变性岛及核空泡变,角质颗粒染色嗜伊红性强,层次性明显,角质层也明显疏松,角质层和上皮层均明显增厚;自然恢复组与正常对照组比,WHBE兔舌组织病理恢复的较为缓慢,而日本大耳白兔恢复较快。3颗粒、格局的变化从本实验结果显示,脾虚型IBS模型实验兔舌背黏膜从舌尖部到舌根部有逐渐变化的,且又有明显的组织学差异,其病理特点如下:背隆起前后固有层乳头密度明显降低,基底层核分裂相频数减少,菌状乳头密度降低,表明基底层细胞增殖减慢,细胞排列疏松;且出现舌角质层和上皮层厚度均明显增厚,这可能由于合成阶段所形成的水解酶、微丝、角质颗粒、膜被颗粒的不足,使降解阶段也出现不完全的特征。水解酶的不足,使胞核和细胞器消化不完全,微丝和角质颗粒的不足,使角化进程缓慢,从而使胞核固缩、胞质膨大、核膜和胞膜增厚的不完全角化细胞长期滞留于棘细胞层中或形成岛状,而使基底至颗粒层增厚。细胞消化的不足,使角质层细胞残余物增多而增厚;膜被颗粒的不足使角化层结构疏松;丝状乳头则与真皮乳头同步减少。除背隆起前固有层乳头密度变化有不一致外,均与陈小野所报道的关于脾虚大鼠舌象病理组织变化相一致,这可能与本模型增加了湿热应激的因素有关。既往的研究表明,舌