益智健脑颗粒联合针灸对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的影响

益智健脑颗粒联合针灸对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的影响

轮换疾病（ad）是一种以维持性神经退行性疾病，具有维持性记忆力低下、认知障碍和异常行为为特征的神经退行性疾病。目前许多临床和实验研究结果表明:中医学,特别是针灸和中药在防治AD方面临床疗效令人满意。本实验通过益智健脑颗粒联合针灸对AD大鼠学习记忆的影响,试图明确该方法对AD的疗效,为AD的临床应用提供科学的实验依据,现将实验方法及结果报道如下。1材料和方法1.1材料表面1.1.1动物房温湿度控制健康SD雄性大鼠40只,清洁级,体质量250～300g,由湖南农业大学动物实验部提供,合格证号sck(湘)2003-0003,动物房室温控制在(22±2)℃,相对湿度50%～70%,12h光照/黑暗周期,动物自由饮水、进食。1.1.2特效药益智健脑颗粒由淫羊藿、锁阳、川断等中药组成,其水提浓缩液每毫升含生药3g(湖南德康制药有限公司生产,批号97056)。1.1.3认识层面”:系数、table,siga大鼠脑立体定位仪、Morris水迷宫(由中南大学人体解剖学与神经病理学教研室提供),Beta-Amyloid25-35(Sigma)。1.2方法1.2.1动物组将大鼠随机分为4组:假手术组(A组)、模型组(B组)、针灸组(C组)、益智+针灸组(D组)各10只。1.2.2a组与b组的注射量以25-35,a组a组b、c、d组a、d组b、d组b、d、d组前2参照《大鼠脑立体定位图谱》选大鼠双侧海马CA1区为注射靶区,定位坐标:前囟为原点,前囟后3.0mm,中线旁开2.2mm,微量进样器缓慢垂直进针2.8mm,B、C、D组均以1μLAβ25-35注入(同时A组注射等量双蒸水),注射5min,留针5min,缓慢撤针,切口处撒青霉素粉后缝合。1.2.3“内关”穴,艾条悬充C、D组均参考《中国兽医针灸学》并结合人体穴位而定位,于大鼠头部正中两耳间取“百会”,鼻唇沟上1/3取“水沟”,前肢内侧,距腕关节约3mm的尺桡骨间取“内关”,采用30号、0.5寸不锈钢毫针。“百会”平刺1~2mm;“水沟”向鼻端斜刺1~2mm,行捻转法,角度360°左右,频率150次/min,行针1min;“内关”直刺1mm,行提插捻转平补平泻法;“内关”穴以艾条悬灸,距穴位3cm,以有温热感而动物不烦躁为度,每次3min,余穴位不行艾灸。D组以益智健脑颗粒按10g/(kg·d)灌胃,余各组以等量双蒸水灌胃,每日给药1次,连续给药10d为1个疗程,共2个疗程。1.2.4水池的分组、生长包括定位航行试验和空间探索试验两部分。Morris水迷宫由圆形水池、平台两部分组成,水池直径132cm,高60cm,池壁漆成白色,池内水深42cm,水面覆白色泡沫塑料屑使平台不可见,水温为21~25℃,在池壁等距离依次标E、S、W、N(东、南、西、北)4个方向,据此将水池分为NW、WS、SE、EN4个象限,直径为9cm的平台置于任一象限中央,淹没于水下2cm。测试时平台置于EN象限,鼠分别从E、S、W、N4个位置面对池壁放入水池,描绘其入水后的游泳轨迹,设定每次60s为最长逃避潜伏期(动物自入水到找到站台后四肢爬上站台时所需的时间),在60s内鼠爬上站台后,让鼠在台上站20s,若鼠入水后60s内未找到站台,则以60s记,并引导其上台,亦在台上站立20s,结束1次测试后用电吹风机将鼠吹干,休息4min再行下一象限的测试。测完4个入水点的潜伏期为1个单元,每天上、下午各测1个单元,连续5d。第6天,撤除平台,将大鼠任选1个入水点放入水中,使鼠在无平台情况下寻找记忆中的平台,记录每只大鼠第1次经过原平台的时间,在1min内至各象限跨越原平台的次数、游过的总距离以及在原平台所在象限及其它3个象限内逗留的时间、距离。测试中尽量减少干扰。1.3方差齐性检验以SPSS13.0统计软件分析,计量资料以“”表示,实验数据先作方差齐性检验,方差齐者两组样本均数间比较用q检验,方差不齐者作数据转换变为方差齐再行上述检验。2结果2.1海马注射a25-35对大鼠学习记忆能力的影响各组大鼠随着训练天数的增加,逃避潜伏期越来越短,表明寻找平台的能力在训练中得到提高。B组与A组同时间段比较,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),说明海马注射Aβ25-35对大鼠学习记忆能力的损害明显,符合阿尔海默病表现。与B组同时间段比较,C组、D组的逃避潜伏期均明显缩短,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与C组比较,D组的治疗效果更为明显,差异具有统计学意义(P<0.05),结果见表1。2.2探索能力下降与A组比较,B组潜伏期延长,过台次数减少,差异具有统计学意义(P<0.05),表示B组空间探索能力下降,AD模型制备成功;与B组比较,C组、D组的潜伏期明显缩短,过台次数增多,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与C组比较,D组的潜伏期缩短,过台次数增多,差异具有统计学意义(P<0.05),表明益智健脑颗粒联合针灸较单用针灸效果显著,结果见表2。2.3n下限停留时间长与B组比较,C组、D组在离平台距离远的WS象限停留时间短,而在平台所在的EN象限停留时间长,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与C组比较,D组在WS象限停留时间短,在EN象限停留时间长,差异具有统计学意义(P<0.05),表明益智健脑颗粒联合针灸提高大鼠记忆能力的作用更强,结果见表3。3针刺补泻、养脑康复阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)是一种神经退行性疾病。其特征性病理变化为:淀粉样蛋白沉积、神经元纤维缠结、基底前脑和海马区的神经元数目减少,并以海马区受累最为严重。Morris水迷宫是测试大鼠学习和记忆非常理想而有效的测试方法,得到国际上公认。其中,空间探索试验中的潜伏期和过台次数指标与视觉为基础的空间定向记忆和空间定位记忆的保持、损伤后的恢复等有密切关系。脑部经络受损,气血无以灌注,脑失所养而致痴呆。AD患者神经系统损伤,神经细胞间信号转导异常,与经络的运行和气血传达脑神经之功能失常极为密切相关,突出了调整经络功能对痴呆病人的重要性。百会隶属于督脉,位于巅顶,故取穴百会,起到振奋诸阳、激发经气、调节内脏、疏通腑气、醒脑开窍的功效,为治脑病要穴,针刺百会能协调NF和5H-T的关系。内关为心包经络穴,针刺内关引起的额、颞叶不同变化,可能与心包经的功能有关。水沟为“十三鬼穴”之一,具有醒脑开窍之用,针刺水沟不仅可以舒张微血管,而且还对脑神经元的活动有直接影响。故针刺此三穴能疏通经气,通调督脉,醒脑开窍,益智复聪。益智健脑颗粒中淫羊藿补肾填精,为君药;锁阳、水蛭补肾活血,为臣药;田七、川断加