福建省木霉种类及分布特征

福建省木霉种类及分布特征

广泛存在于土壤、空气和植物体表面等生态环境中。一些植物对植物原生动物的细菌有寄生虫和抵抗作用。有些是重要的细菌和真菌培养过程中的重要污染。例如，可以预防和处理由立枯草半菌、镰刀菌和小核菌引起的植物疾病，并具有重要的抗生性。据报道，目前50多种国际木霉菌的不同制剂已被用作生物工具或生物肥料。为了加速福建省生物农药产业的发展，本文对福建省的木菌资源进行了研究，并从感染木霉的细菌、子实体、植物线虫体和植物根之间的土壤中分离并获得了木菌植株。木霉菌的分类经历了一个长期的演变过程.1969年Rifai首次提出了木霉属的分类系统,将木霉属分为9个集合种(speciesaggregates);20世纪80年代中后期到90年代初,Bissett提出了一个新的分类系统,引进了组(section)的概念,将木霉属分成了5个组,即长枝组(Longibrachiatum)、土星孢组(Saturnisporum)、木霉组(Trichoderma)、厚基组(Pachybasium)和肉座组(Hypocreaum).木霉属的形态学分种依据主要是产孢区的形状,分生孢子梗的分枝方式及大小,瓶梗的着生方式、形状、大小和数量,分生孢子的形状、大小、长宽比和表面纹饰的有无等形态性状和培养特征.本研究根据Rifai和Bissett的分类系统,对从福建省3种基质上分离的木霉菌株进行种类鉴定.1材料和方法1.1木霉病体及回复突变体木霉菌株从福建省古田、福州、漳州、龙岩、莆田、顺昌和诏安等地的食用菌木霉病菌丝体和子实体、培养基质、作物根际土壤、根结线虫卵囊及肾形线虫雌虫虫体等样本中分离.1.2等间距1.2.1木霉的分离从发病的食用菌栽培料或子实体上挑取木霉孢子于PSA平板上,于28℃恒温培养箱中倒置培养,菌落形成后立即纯化.1.2.2悬浮液稀释、培育、纯化把采集的土样自然晾干后辗碎,过筛.称取10g土样置于盛有90mL无菌水的烧瓶中,用涡旋仪充分振荡.吸取10mL悬浮液于90mL无菌水中稀释,再从稀释的悬浮液中吸取10mL于90mL无菌水中稀释,如此类推,稀释至体积分数为10-3、10-4、10-5.用微量移液枪从各含量的土壤悬浮液中吸取0.1mL悬浮液分散滴于马丁氏—孟加拉红平板上,再用灭菌的三角玻璃棒涂匀,静置20min后于28℃的恒温培养箱中倒置培养,菌落形成后立即纯化.1.2.3红树莓菌的分离纯化用质量分数为1.0%的NaClO溶液对供分离的根结线虫卵囊和肾形线虫雌虫表面消毒3min,用无菌水对消过毒的卵囊和雌虫虫体漂洗3次,将消毒过的卵囊和雌虫表面余水用无菌吸水纸吸去,单个移入含有抗生素的PSA平板上,于28℃恒温培养箱中倒置培养,菌落形成后立即纯化.1.3类型识别1.3.1测定菌落纯化的木霉菌在PSA平板上培养4d,用直径为0.5㎝的打孔器打取菌碟,置于PSA平板上,于28℃、黑暗条件下培养5d,逐日测量菌落直径并观察菌落形状和颜色等.1.3.2木霉菌的形态鉴定在显微镜下观察木霉菌分生孢子梗的分枝情况和分生孢子的形态,计测孢子大小和孢子梗长度,结合培养性状并参考Rifai和Bissett的木霉菌种群分类系统进行种类鉴定.2结果与分析2.1类型识别2.1.1瓶梗和分生孢子在PSA平板上,菌落呈暗绿色,中部为密实产孢区,外缘也产孢,菌丝较少.分生孢子梗丛束疏松,环状排列,主分枝呈树状,其上有众多次级分枝,常2-3个一组,直角伸出.瓶梗短,基部变细,中间膨大,以大角度伸出,终极瓶梗长而细,5个以内的瓶梗近似轮枝排列,产孢细胞大小为(7.50-12.50)μm×(2.00-3.75)μm.分生孢子呈球形、倒卵圆形,大小为(2.50-3.75)μm×(2.50-3.00)μm(图1A至1C).来源:银耳(Tremellafuciformis)子实体、茶薪菇(Agrocybecylindracea)菌丝体、香蕉(MusaAAA)和柑橘(Citrussp.)根际土壤.采集地:古田、漳州、龙岩.研究菌株:见表1.2.1.2银耳属genussp.1e银耳属-1f银耳属法制水理工艺染整菌株lanfinusedpoleurithista的分离和来源在PSA平板上,菌落初呈白色绒状,后期出现轮状的菌丝密实产孢区,颜色为绿色至深绿色.分生孢子梗呈环状排列,次级分枝单个或以2-3个为一组,大角度伸出,分枝弯曲或波状.瓶梗基部缢缩,中部较宽,从中部以上变窄形成长颈,产孢细胞大小为(8.0-12.0)μm×(2.5-3.0)μm.分生孢子呈球形,表面有刺,大小为2.5-4.8μm(图1D至1F).来源:银耳子实体,香菇(Lenfinusedodes)、灵芝(Ganodermalucidum)、平菇(Pleurotusostreatus)和毛木耳(Auriculariapolytricha)菌丝体,香蕉和柑橘根际土壤,根结线虫(Meloidogynespp.)卵囊.采集地:古田、福州、漳州、龙岩、顺昌、诏安.研究菌株:见表1.2.1.3采出工菌及菌株在PSA平板上,菌落初呈白色,后期在菌落中间有一圈明显的产孢区,颜色为绿色、浅绿或黄绿.分生孢子梗分枝多,主分枝上又以2-3个为一组长出次级分枝,分枝角度大,瓶梗上部变细,产孢细胞大小为(2.5-3.0)μm×(5.0-10.0)μm.分生孢子呈椭圆形、卵圆形或倒卵形,个别呈近长方形,大小为(2.5-5.0)μm×(2.0-2.5)μm(图1G至1I).来源:灵芝菌丝体、肾形线虫(Rotylenchulusreniformis)雌虫虫体.采集地:福州、漳州.研究菌株:见表1.2.1.4近充胶质瘤病原菌.在PSA平板上,菌落中间有一圈明显的浅绿色产孢区.分生孢子梗主分枝长,次级分枝直角伸出,瓶梗2-5个轮生、单生或间生,在近孢子梗顶部往往不规则伸出.瓶梗基部缢缩,中间膨大,顶部变细,终极瓶梗延长,基部不变细,产孢细胞大小为(3.00-7.50)μm×(1.25-2.00)μm.分生孢子呈短圆柱形,大小为(2.5-4.5)μm×(2.0-2.5)μm(图1J至1L).来源:灵芝菌丝体.采集地:古田、福州.研究菌株:见表1.2.1.5瓶梗密度、大小及菌株在PSA平板上,菌落初呈白色,后转为浅绿或深绿.分生孢子梗长而直,次级分枝直角伸出,或朝主枝弯曲,上部次级分枝短,基部次级分枝较长,常单个伸出或互生,很少再次分枝.瓶梗单生或2-7个轮生,呈圆柱状,顶部明显变细,终极瓶梗基部不缢缩,其下着生许多间生瓶梗,产孢细胞大小为(5.0-12.5)μm×(2.0-2.5)μm.分生孢子光滑,呈倒卵形、椭圆形,大小为(2.5-5.0)μm×(2.0-2.5)μm(图1M至1O).来源:灵芝、平菇菌丝体.采集地:古田、福州.研究菌株:见表1.2.1.6物种tichoudmamp.2.2不同基质中木霉和绿木霉的比例,从食用菌、植物线虫和植物根际土壤中共分离到125个木霉菌菌株,从总体而言,绿色木霉和哈茨木霉为优势种,绿色木霉51株,占总菌株数的40.8%;哈茨木霉31株,占总菌株数的24.8%;康氏木霉、拟康氏木霉和长枝木霉分别占总菌株数的16.8%、8.8%和4.0%.但是,不同基质上的木霉优势种有所差异,食用菌上以康氏木霉和拟康氏木霉为优势种;植物根际土壤中以哈茨木霉和绿色木霉为优势种;植物线虫虫体上以绿色木霉为优势种.其分布情况如表1所示.3哈茨木霉和绿色木霉种的制备本研究初步揭示了福建省木霉菌的物种多样性,为福建省木霉菌资源调查和种类鉴定提供了理论依据.从125株木霉菌