紫外分光光度法测定肉桂中的肉桂醛

紫外分光光度法测定肉桂中的肉桂醛

一、天然植物香辛料据估计，世界上大约10.20%的食物损失在各种腐败和堕落事件中，造成了巨大的经济损失。食品发生物理变化使外形改变,以及在以微生物为主的作用下所发生的腐败变质,包括食品成分与感官性质的各种酶性、非酶性变化及夹杂物污染,从而使食品质量下降或丧失食用价值的一切变化都是食品腐败变质。食品腐败变质不仅会影响食品的风味,还可能造成食物中毒。为了延长食品的保质期,人们常常在食品加工中添加防腐剂,以使微生物丧失活性、延缓或阻止其生长。目前国内外实际使用的食品防腐剂仍以化学合成防腐剂如苯甲酸为主,在常规使用量下,防腐效果并不十分理想。因此人们往往超量使用,从而对人体造成伤害。随着科技的发展和人们生活水平的不断提高,人们越来越注重食品安全问题,因此开发天然、高效、无毒、性能稳定的食品防腐剂成为食品科学、中药学及生物领域的研究热点。自然界中,茴香、桂皮、胡椒、丁香、芥菜、生姜等属于可食用的植物香料。近年来,国内外学者研究发现这些香辛料中能够抗菌的活性成分较多,如桂皮中的挥发油有抑菌防腐作用,即肉桂油或桂皮油的作用。其中主要成分为桂皮醛、少量桂皮酸、咕巴烯、丁香酚、对甲氧肉桂醛、乙酸桂皮酯、乙酸苯丙酯等。研究表明桂皮醛有良好的抗氧化效果,可用于食品防腐。因此,通过研究桂皮中桂皮醛的提取及含量测定,为将来应用于食品的防腐,以减少化学防腐剂的使用,就显得非常有现实意义。二、紫外分光光度法本课题以样品的萃取方法及桂皮醛的测定方法为研究内容。具体包括:紫外分光光度法测定桂皮醛的测定条件,研究测定波长选择、溶剂乙醇浓度的影响、温度影响、稳定时间影响等;桂皮醛含量提取研究,主要有水萃取时间、温度影响、不同浓度乙醇萃取时间影响、温度影响等。1.实验部分(1)试剂瓶及溶剂配制本实验所用的药品、试剂和仪器如下表所示:配制试剂:(1)4.196μg/ml桂皮醛标准溶液:移取0.10ml桂皮醛于100ml容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,摇匀;移取0.20ml于50ml容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,摇匀。(2)不同浓度乙醇溶液的配制:90%乙醇溶液:准确量取360ml无水乙醇、40ml蒸馏水于试剂瓶中,摇匀。改变无水乙醇和蒸馏水的比例依次配制体积比为85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%乙醇溶液。(2)桂枝预处理将桂皮在78-80℃恒温干燥箱干燥3~4h,然后经粉碎机粉碎即可。(3)%、5.2乙醇溶液对大鼠血清中乙醇溶液稳定性的影响准确称取3.0000g桂皮粉末于各个棕色试剂瓶中,分别加入0%、5%、10%、15%、…95%、100%乙醇溶液40ml,放置七天后测定。(4)标准曲线的绘制配制系列不同浓度的桂皮醛溶液,用不同浓度的乙醇定容至刻度,在最大吸收波长处分别测其吸光度,绘制不同乙醇浓度下的标准曲线。(5)包装液中环氧化对包料中包合物最佳吸收波长的确定将浸泡后的样品离心分离5min,移取1.00ml上层清液于25ml容量瓶中,加无水乙醇定容,摇匀,移取0.50ml溶液加入10ml容量瓶中,用无水乙醇定容,摇匀,在室温下放置10min后,用紫外可见分光光度计在最大吸收波长处测其吸光度,根据标准曲线计算桂皮醛的含量。2.结果与讨论(1)测量波长选择取桂皮醛标准溶液,在200-350nm波长处测其吸光度。得到实验如下结果:桂皮醛最大吸收波长λmax=294nm。(2)温度对水浴锅吸光度的影响分别移取5.00ml桂皮醛标准溶液于8个10ml容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,摇匀,将容量瓶中的溶液转入干燥的烧杯中,分别在0℃、10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃水浴锅中恒温半小时后在294nm处测其吸光度。得到如下实验结果:随着温度的升高,溶液的吸光度先缓慢增大,后又下降。在温度为293.15K,即20℃时,吸光度最大。随着温度的上升,体系稳定性变得越来越差,所以测定条件宜选择在室温下(T<30℃)进行。(3)放置时间测定分别移取5.00ml桂皮醛标准溶液于8个10ml容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,摇匀,分别放置5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min后在294nm波长处测其吸光度。得到如下实验结果:溶液放置10min时吸光度最大,随着时间的增加,吸光度反而变小。(4)标准曲线的绘制准确移取2.40mL的桂皮醛标准溶液于25mL容量瓶中,分别用0%、5%、10%......95%、100%浓度乙醇稀释至刻度,在室温下放置10min,在294nm处测定其吸光度,结果如下图:由上图可见,相同浓度桂皮醛溶液的吸光度随着乙醇浓度的改变呈不规则变化,因此必须在各个乙醇浓度下绘制标准曲线。(5)标准曲线的绘制分别用100%、95%、90%、85%...5%、0%乙醇溶液配制一系列的不同浓度的桂皮醛溶液,在室温下放置10min,在294nm处测定各个浓度溶液的吸光度,绘制标准曲线。得到实验结果如下:不同浓度乙醇溶剂下的标准曲线各不相同。(6)最佳水浴锅中包合物皮醛含量的测定准确称取3.0000g桂皮样品于各个试剂瓶中,分别加入40ml水,分别在0℃、10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃水浴锅中恒温半小时后冷却至室温,离心5min,移取1.00ml上层清液于25ml容量瓶中,摇匀,再从中移取0.50ml溶液于10ml容量瓶中,摇匀,室温下放置10min后在294nm处测其吸光度,计算桂皮醛含量。结果如左图:由图可见,水萃取的最佳温度为70℃,萃取液中桂皮醛的含量为0.6892%(7)外加剂用量对皮醛含量的影响准确称取3.0000g桂皮样品于各个试剂瓶中,分别加入40ml水,放置1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d后测其吸光度,计算桂皮醛含量。得到实验结果如下:水萃取桂皮中的桂皮醛的最佳时间为5天,萃取液中桂皮醛的含量最高为0.9119%。(8)蒸发时间对蒸发皮提取物测定准确称取3.0000g桂皮样品于各个试剂瓶中,分别加入40ml不同浓度乙醇溶液,放置7d后测其吸光度,计算桂皮醛含量。结果如下图:由图可见,无水乙醇萃取桂皮得到的桂皮醛的含量最高,萃取率高达2.8246%,且随着乙醇浓度的降低,萃取率也随之下降。乙醇中蒸发成长法准确称取3.0000g桂皮样品于各个试剂瓶中,分别加入40ml无水乙醇,在5℃、15℃、25℃、35℃、45℃水浴锅中恒温半小时后测其吸光度,计算桂皮醛含量。得到实验结果如下:当萃取温度为35℃时,萃取桂皮醛的效果最好,萃取液中桂皮醛的含量最高为2.1194%。(10)最佳包埋剂的确定准确称取3.0000g桂皮样品于各个试剂瓶中,分别加入40ml无水乙醇,放置1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d后测其吸光度,计算桂皮醛含量。得到实验结果如下:乙醇提取桂皮醛的最佳时间为6天(室温下),萃取液中桂皮醛的含量最高为2.8391%。三、结论和问题1.乙醇浓度对萃取效果的影响本研究通过最大吸收波长,温度、稳定时间影响,不同浓度乙醇溶剂对吸光度影响等因素,确定了桂皮醛的测定条件。在室温下静置10min,于294nm下,必须分别绘制不同乙醇浓度下的标准曲线,才能满足要求。又通过水萃取时温度、时间及乙醇萃取时浓度、温度、时间对萃取效果的影响研究。实验结果表明无水乙醇为萃取剂效果显著高于纯水溶剂萃取,萃取温度为35℃时,提取桂皮醛的含量最高为2.1194%;放置6d,提取桂皮醛的含量则为2.8391%;而用纯水作为萃取溶剂温度为70℃时,