革兰阳性菌的鉴定操作

革兰阳性菌的鉴定操作1整理课件

阳球G+c：葡萄球菌属、微球菌属、链球菌属、肠革兰阳性菌球菌属等阳杆G+b：棒状杆菌属、李斯特氏菌属、丹毒丝菌属、分支杆菌属、奴卡菌属等2整理课件3整理课件需氧革兰阳性球菌：触酶葡萄球菌属微球菌属链球菌属肠球菌属G+球菌革兰涂片阳性阴性七叶苷阳性、6.5％Nacl阳性肠球菌属链球菌属4整理课件

挑取单个菌落进行涂片固定、初染、酶染、脱色、复染注意：挑取时接种环轻碰菌落边缘即可。

1：涂片

2：染色

5整理课件根据菌体特征作出初步鉴定假设镜检结果为革兰氏阳性杆菌，那么在建议与解释栏填写“因NCCLS上无相应的药敏标准，请根据临床病症经验用药，并考虑是否为污染菌。〞3：镜检革兰阳性球菌6整理课件

原理：2H2O2

O2+2H2O注意：血琼脂上菌落不宜作此试验。4：触酶试验触酶试验〔Catalase〕：1、触酶阳性，可初步判断为葡萄球菌属和微球菌属;2、触酶阴性，可初步判断为链球菌属和肠球菌属7整理课件5：Staphaurex胶乳凝集试验Staphaurex胶乳凝集试验是一种鉴定金葡菌的快速、简便的商品化直接凝集试验。根本原理是在纸板或玻片上滴加包被有纤维蛋白原和IgG抗体的聚苯乙烯胶乳，然后用接种环挑取待鉴定的新鲜培养物参加混匀出现凝集块现象为阳性。本法不仅可以检测金葡菌的凝固酶而还可通过IgG抗体的FC段与金葡菌的A蛋白有特殊的亲和力而检测之。中等大小、黄或灰白，β溶血或不溶血的菌落，那么做Staphaurex胶乳凝集试验：阳性、24hβ溶血，那么判断为金黄色葡萄球菌；不溶血，那么API或上机。阴性报告凝固阴性葡萄球菌或APISTARPH、上机8整理课件5.API板条试验5.葡萄糖发酵试验5.β溶血菌落小、黄色菌落；镜下呈四联、八叠排列细菌，那么做葡萄糖发酵试验：阳性那么转为上一个步骤试验；阴性报微球菌属9整理课件6.杆菌肽试验6.CAMP试验6.Optochin试验6.七叶苷NaCl试验七叶苷试验〔阴性或阳性〕6.5％Nacl试验阴性：1.α溶血，做Optochin试验：敏感且G+矛头状双球菌、脐窝状菌落，那么判断为肺炎链球菌〔Optochin试验抑菌圈的直径≥14mm为阳性〕2.β溶血：2.1.杆菌肽试验敏感，那么判断为A群链球菌2.2.乳胶凝集或CAMP阳性，那么判断为B群链球菌2.3.其它上机3.γ溶血那么上机10整理课件6.阿拉伯糖、山梨醇七叶苷试验阳性6.5％Nacl试验阳性，那么判断为肠球菌属：1.阿拉伯糖阴性、山梨醇阳性那么判断为粪肠球菌2.阿拉伯糖阳性、山梨醇阴性那么判断为屎肠球菌11整理课件葡萄球菌属12整理课件葡萄球菌属概述葡萄球菌属〔Staphylococcus〕是一类触酶试验阳性的革兰氏阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌属、施氏葡萄球菌、路邓葡萄球菌等32个种。因常堆聚成葡萄串状，故名。葡萄球菌在自然界中分布广泛，存在于空气、水、尘埃及人体皮肤外表、鼻、咽等。多数为非致病菌。少数可导致疾病。13整理课件形态与染色球形或稍呈椭圆形，直径0.4-1.2um，排列成葡萄球状。葡萄球菌无鞭毛、不能运动，无芽孢，除少数菌株外一般不形成荚膜。革兰染色为阳性，其衰老、死亡或被白细胞吞噬后某些菌株可被染成革兰阴性。14整理课件金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌菌落特征：光滑、完整微隆起、半透明，β-溶血，奶黄色、橙黄色、柠檬色、白色〔脂溶性色素〕菌落特征：菌落相对较小，2.5～6.0mm，取决于不同菌株，通常不产生色素，某些菌株产生黏液性常黏附在琼脂外表菌落特征：菌落5～8mm大小，完整，有光泽，不透明、光滑，比前面提到菌种菌落较凸起，约一半菌株产色素，奶油、黄-橙色。培养特性15整理课件头葡萄球菌孔氏葡萄木糖葡萄16整理课件金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌小、黄色菌落；镜下呈四联、八叠排列细菌

No中等大小、黄或灰白，β溶血或不溶血的菌落

API或上机

报微球菌属

葡萄糖发酵报告凝固阴性葡萄球菌或API或上机+Staphaurex胶乳凝集葡萄球菌微球菌属

－24hβ溶血+

－

－+

G+球菌触酶+

上机主要病原菌：金黄色葡萄球菌其他：脓肿和严重伤口感染中分离的路邓葡萄球菌；多次血培养中分离的凝固酶阴性葡萄球菌葡萄球菌17整理课件链球菌属18整理课件链球菌属概述链球菌属〔Streptococcus〕是一群触酶实验阴性、呈链状排列的革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部，可引起各种化脓性炎症、猩红热、丹毒、新生儿败血症、脑膜炎、产褥热以及链球菌变态反响性疾病等该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法分为A、B、C、D、E、F、G群，或根据其在血平板上的溶血现象进行分类〔β溶血或完全溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血〕19整理课件

根据溶血现象分类

⑴α型溶血性链球菌

菌落周围有不透明溶血环。多为条件性致病菌。⑵β型溶血性链球菌

菌落周围形成完全透明的无色的溶血环。致病力强。⑶γ型链球菌

不产生溶血素，菌落周围无溶血环，也称为不溶血性链球菌。无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔引起感染。20整理课件形态与染色球形或卵圆形，直径0.6-1.0um，呈链状排列，短者2-8个细菌组成，长者有20-30个细菌组成。局部幼龄培养物可见到透明质酸形成的荚膜。无芽孢，无鞭毛，革兰染色阳性。21整理课件肺炎链球菌菌落特征：生长在血琼脂平板或哥伦比亚血平板上的菌落圆形，外表光滑、灰白色、边缘整齐、半透明，开始扁平以后中心塌陷，呈脐窝状，具体呈矛头状成双排列。该菌Optochin敏感，胆汁溶菌试验阳性。22整理课件脐窝状菌落粘液状菌落23整理课件原理：Optochin〔乙基氢化去甲奎宁的商品名〕可干扰肺炎链球菌叶酸的生物合成，抑制该菌的生长故肺炎链球菌对其敏感，而其他链球菌对其耐药。Optochin试验抑菌圈的直径≥14mm为阳性Optochin敏感试验24整理课件临床标本培养后混杂在口腔正常菌群中的化脓链球菌化脓性链球菌25整理课件杆菌肽〔Bacitracin〕试验操作：K-B法贴杆菌肽纸片〔直径6mm，0.04U/片〕，常规培养18-24h结果判读：抑菌圈>10mm敏感。无乳链球菌金葡菌原理：细菌具有“CAMP〞因子，能促进葡萄球菌β溶血素的活性，使两种细菌在划线处呈现箭头形透明溶血区。操作：血平板上待测菌与金葡菌垂直划线，划线之间留出0.5-1cm,不能相接。CAMP试验26整理课件马链球菌β溶血无乳链球菌27整理课件血清分群诊断：A、B、C、D、F、G28整理课件耐药G+球菌触酶A群链球菌杆菌肽乳胶凝集或CAMPBAP溶血

γ

β

α上机Optochin试验肺炎链球菌上机敏感敏感阳性B群链球菌其他上机七叶苷：－或＋6.5％Nacl：－

－G+矛头状双球菌、脐窝状菌落链球菌属29整理课件肠球菌属30整理课件肠球菌属概述肠球菌属是一组主要存在于人类或动物肠道、具有共同生化特征的革兰阳性球菌，归属俩球菌科。主要包括：粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、铅黄肠球菌等。通常为Lancefield血清D群。1989年，依据Facklam和Collins的分类，肠球菌属内包括十二种及一个变异种。它们是：粪肠球菌〔E.faecalis〕屎肠球菌〔E.faecium)鸟肠球菌(E.avium)酪黄肠球菌(E.casseliflavus)坚忍肠球菌(E.durans)鸡肠球菌E.galinarum)芒地肠球菌(E.mundii)恶臭肠球菌(E.maladoratum)希拉肠球菌(E.hirae)孤立肠球菌〔E.solitarius〕棉子糖肠球菌(E.raffinosus)假鸟肠球菌(E.pseudoavium)粪肠球变异株(E.faecalisvar)。31整理课件形态与染色肠球菌属的细菌为革兰氏阳性球菌，多数菌种成双或呈短链状排列；一般无芽孢，无荚膜，少数菌种有鞭毛，陈旧培养物或在厌氧状态下有时呈革兰氏阴性。32整理课件生化反响胆汁七叶苷试验〔+〕6.