生物安全培训

喀什地区第二人民医院检验科易婷曲实验室生物安全1主要内容实验室生物危害生物安全实验室与生物安全防护2

实验室生物安全

是指在从事病原微生物实验活动的实验室中避免病原微生物对工作人员和相关人员的危害，对环境的污染和对公众的伤害，为了保证试验研究的科学性还要保护被试验因子免受污染。

3

实验室生物安全操作者操作对象环境4

实验室生物危害5生物危险

感染性的致病因子，无论是直接感染，还是间接地散播到环境中去，对人类、动物或植物都是一个现实的或潜在的危险。AnimalsHumansPlants6

涉及病原微生物法定报告传染病所涉及的病原微生物法定报告传染病以外常见传染病病原微生物国外新发现和已消灭传染病病原微生物

病毒细菌放线菌衣原体支原体立克次体螺旋体真菌7

健康工作者HIV感染的职业危险暴露类型经皮粘膜经皮和粘膜未知皮肤报告数量（截至99年6月）475210单次HIV暴露的危险性（％）0.30.03<0.038HBV、HCV和HIV职业感染的相对危险性病毒HBVHCVHIV健康工作者的血清阳转率（%）3~351～280.12~0.4每ml血中病毒颗粒数102~10810～10610～103针头刺伤的传播概率6～300.75~100~0.39对3921例实验室相关感染统计分析结果发现，已知原因的实验室感染只占全部感染的18％，不明原因的实验室感染却高达82％。对不明原因的实验室感染的研究表明，大多数可能是病原微生物形成的感染性气溶胶在空气扩散，实验室内工作人员吸入了污染的空气感染发病的。101112

气溶胶的特点生物气溶胶无色无味、无孔不入，不易发现，实验人员在自然呼吸中不知不觉吸入而造成感染。若治疗控制不及时会造成严重后果。与其疾病自然感染相比，有些微生物气溶胶感染的症状不典型，病程复杂，难以及时诊治，影响预后。有些气溶胶感染只有呼吸道粘膜免疫才有预防作用，非呼吸道免疫途径预防作用效果欠佳。现有常规疫苗的预防效果不理想，如肺炭疽。呼吸道传播的传染病的微生物特别是高致病性病毒常常发生变异，尤其是其抗原性、致病性都可能发生改变，在空气中存活力增强。气溶胶传播容易发生病原体在人与人、人与动物、动物与动物之间的传播。可以远距离或较远距离传播，这是其与其他传播途径的显著区别，也是气溶胶传播难以预防的另一重要原因。13

实验室微生物气溶胶的种类飞沫核气溶胶粉尘气溶胶

两类微生物气溶胶对实验室工作人员都具有严重的危害性，其程度取决于微生物本身的毒力、气溶胶的浓度、气溶胶粒子大小、以及当时实验室内的微小气候条件。研究发现，粒径>100

m的飞沫沉降很快，而粒径<50

m的飞沫在0.4s内就扩散开了；粒径<5

m的飞沫核被人吸入后，可以到达肺深部的肺泡处；粒径>5

m的飞沫核能够被呼吸道的粘膜捕获。14可产生各种严重程度微生物气溶胶的实验室操作

151617

产生微生物气溶胶的其它因素另外，一些在自然环境中可以繁殖的微生物，一旦进入实验室的空调或通风系统，污染了空调的冷却水，则可以形成更广泛的微生物气溶胶污染。除了实验室操作可以产生微生物气溶胶外，患有呼吸道传染病或皮毛上染有病原微生物的实验动物也可以产生微生物气溶胶。微生物气溶胶在一个实验室内产生后，还可以通过气流转移到同一建筑物的其他地方，甚至污染整个建筑物的空气……18病原微生物危害程度分类19

《病原微生物实验室生物安全管理条例》第七条国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，将病原微生物分为四类：第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。20生物安全实验室与生物安全防护21

生物安全实验室分级生物安全一级实验室(BSL-1)

适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物生物安全二级实验室(BSL-2)

适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物生物安全三级实验室(BSL-3)

适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，可能已有预防传染的疫苗生物安全四级实验室(BSL-4)

适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素22

生物安全防护

是指避免生物危险因子，特别是偶然的和有意利用的生物因子，对生物体包括实验室工作者在内的伤害和对环境的污染的意识和措施。实验室生物安全防护分为一级防护（屏障）和二级防护（屏障）23实验室设计

基本原则人流、物流、气流——畅通清洁区、缓冲区、污染区——分离24

实验室的进入未经批准，任何人不得进入实验室工作区域。儿童不得进入实验室工作区域。可能增加获得性感染的危险性或感染后可能引起严重后果的人员不允许进入实验室或动物房。BSL-2实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，包括通用的生物危险性标志，标明传染因子、实验室负责人或其他人姓名、电话、以及进入实验室的特殊要求。实验室的门应保持关闭。工作人员进入动物房应当经过特别批准。与实验室工作无关的动物不得带入实验室。25262728

生物全风险告知书告知内容我已了解实验室生物安全风险，我自愿进入喀什地区第二人民医院检验科，愿承担相应责任。各位来访者：进入喀什地区第二人民医院检验科进行参观、学习培训、交流、设备维护等活动。在整个过程中所接触的各类物品可能存在感染性物质。包括各类生物标本、电脑、键盘、各类纸张、仪器、冰箱、地面、台面、椅面等，以及空气等环境中存在潜在感染性气溶胶颗粒。所以进入本实验室存在一定风险，对来访者的身体健康和生命安全有一定威胁。如任需要进入实验室必须遵守“实验室生物安全管理规定”，并做好个人防护，以降低感染的风险。如违反实验室管理规定，应承担相应的责任。日期从事活动自愿者签名授权人

29防护要求在实验室工作时，必须穿着合适的工作服或防护服。在进行可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域。不得在实验室内穿露脚趾的鞋。禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。30

生物安全实验室的个人防护装备31

个人防护装备所涉及的防护部位：

1、眼睛、

2、头面部、

3、躯体、

4、手、

5、足、耳（听力）

6、呼吸道32

个人防护装备装备包括：

1、眼镜（安全镜、护目镜）

2、口罩、面罩、防毒面具

3、帽子

4、防护衣(实验服、隔离衣、连体衣、围群)5、手套

6、鞋套

7、听力保护器等。33

个体防护的配备原则

BSL－1实验室工作人员在实验时应穿工作服，戴防护眼镜。工作人员手上有皮肤破损或皮疹时应戴手套。34个体防护的配备原则BSL－2实验室除符合BSL－1的要求外，还应该符合下列条件：在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服。离开实验室时，防护服必须脱下并留在实验室内。不得穿着外出。用过的工作服应先消毒，然后统一洗涤或丢弃。当手可能接触感染材料、污染的表面或设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室。工作完全结束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。

35个体防护的配备原则当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行，而必须采取外部操作时，为防止感染性材料溅出或雾化危害，必须使用面部保护装置（护目镜、面罩、个体呼吸保护用品或其他防溅出保护设备）。36（一）眼睛防护装备1、安全眼镜和护目镜（物理、化学和生物因素）

A）在所有易发生潜在眼睛损伤的生物安全实验室中工作时必须采取眼睛防护措施

B）所选用的眼睛防护装备的类型取决于外界危害因子对眼睛危害程度

37一般而言：佩戴侧面带有护罩的安全眼镜就可以达到防护的目的。只有在进行有可能发生化学和生物污染物质溅出的实验时，必须佩戴护目镜。

进行有潜在爆炸的反应和使用或混合强腐蚀性和强酸溶液时，必须佩戴面罩或同时佩戴面罩和护目镜或安全眼镜。

38a、安全镜b、安全护目镜不得戴眼镜防护装备离开实验室区域！39

眼睛防护装备2、洗眼装置

如发生腐蚀性液体或生物危害液体喷溅至工作人员的眼睛时，应该（或在同事的帮助下）在就近的洗眼台（洗眼装置）用大量缓流清水冲洗眼睛表面至少15到30分钟。事后必须立即填写事故报告单并立即报告主管领导。便携式洗眼装置

固定式洗眼装置

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要求：

1、洗眼装置应安装在室内明显和易取的地方，并保持洗眼水管的通畅，便于工作人员紧急时使用。

2、工作人员应掌握其操作方法。41（二）淋浴装置和应急消毒喷淋装置1、规定：--BSL-2实验室在必要时应有应急喷淋装置--BSL-3实验室应设置淋浴装置（清洁区），必要时在半污染区设置应急消毒喷淋装置。

2、要求：保持管道的通畅、必须告知工作人员应急消毒喷淋装置的摆放位置、培训其操作方法。

---应急消毒喷淋装置在使用中可用大量冷水淋洗污染的部位，淋洗时间至少需要20分钟。如果为化学物品溅出污染，用大量急水冲洗。

当使用紧急淋浴装置后必须立刻填写事故报告单并立即报告主管领导42（三）头面部防护装备

口罩口罩仅可以保护部分面部免受生物危害物质如血液、体液、分泌液以及排泄物等喷溅物的污染

仅适用于---BSL-1或BSL-2实验室中使用43

（四）防护面罩

1、对整个脸部进行防护：必须使用一种标准的防护面罩以罩住整个脸部，或使用口罩加护目镜（或口罩加安全镜）。2、保护部分面部：配戴安全眼镜或护目镜，但必须戴口罩以保护部分面部或配戴标准防护面罩。注意：1、在使用防护面罩时常常同时佩带安全镜或护目镜或口罩。2、实验完毕后必须先摘下手套，然后用手卸下防护面罩。44——防护面罩——一次性面罩

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一次性简易防护帽

防护帽在生物安全实验室中佩戴简易防护帽可以保护工作人员避免化学和生物危害物质飞溅至头部(头发)所造成的污染。要求：工作人员在实验操作时应佩带防护帽

46（五）呼吸防护装备

1、当实验室操作不能安全有效的将气溶胶限定在一定的范围内要求使用呼吸防护装备。2、使用和维护指导书包括在相应活动的安全操作程序手册中，并按指导书及培训的要求使用。3、呼吸防护的有效装备

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防毒面具（面具、个人呼吸器和正压防护服）使用：1、在进行高度危险性的操作（清理溢出的感染性物质和气溶胶）时，可以采用防毒面具来进行防护。2、根据危险类型来选择防毒面具。47

特点：1、在防毒面具中装有一种可更换的过滤器，它可以保护佩戴者免受气体、蒸汽、颗粒和微生物以及气溶胶损害的影响。2、过滤器必须与防毒面具的正确类型相配套。3、为了达到理想的防护效果，每一个防毒面具都应与操作者的面部相吻合。4、应安排工作场所监控、医学评估和对呼吸器使用者的监督，以确保其始终正确使用该类装备。5、应对呼吸器作个体适应性测试。48

一次性防毒面具一次性防毒面具罩式防毒面具及其佩戴方式49

正压防护服使用中的全罩式防毒具50正压面罩正压面罩（也称头盔正压式呼吸防护系统）除对呼吸系统防护外，还可提供眼睛、面部和头部防护。1)正压式呼吸防护系统包括：普通头盔、安全帽头盔（可配肩罩）双管供气式呼吸防护系统包括：前置式、背置式、全面具、半面具2)电动式呼吸防护系统：电动式送风过滤系统、电动式送风防尘系统电动式呼吸防护系统可提供高等级安全防护，集多种防护为一体，电动送风无呼吸阻力，无压缩空气管限制活动空间。51正压面罩52头盔式正压呼吸防护系统53（六）手部防护装备

手部防护装备——手套1、手套应在实验室工作时使用。2、在接触感染性物质（血液、体液、分泌液、渗出液、以及接触粘膜和非完整皮肤时），必须使用合适的手套以保护工作人员避免受到污染物溅出或生物污染的事故所造成的损3、手套被污染，应该尽可能早的脱下，消毒后丢弃。4、手套应按所从事操作的性质符合舒适、灵活、握牢、耐磨、耐扎和耐撕的要求，并应对所涉及的危险提供足够的防护。5、对实验室工作人员进行手套选择、使用前及使用后的配戴及摘除等培训。

6、一次性手套不得重复使用。必须先消毒后丢弃。54

规范的使用手套方法的几个要点：

手套的选择：生物安全实验室一般使用乳胶橡胶或聚腈类或聚氯乙烯手套用于对强酸、强碱、有机溶剂和生物危害物质的防护手套的检查：在使用手套前应该检查手套是否退色、穿孔（漏损）或有裂缝。可以通过充气试验，将其浸入水中观察是否有汽泡来检查手套的质量3、手套的使用：

a）一般情况下，佩戴一副手套即可（BSL-1实验室），

b）若在生物安全柜中操作感染性物质时（BSL-2和BSL-3实验室）应该佩戴两副手套。乳胶手套

聚脂手套55聚氯乙烯手套c）在操作过程中，外层手套被污染，立即用消毒剂喷洒手套并脱下后丢弃在生物安全柜中的高压灭菌袋中并立即戴上新手套继续实验。

d）戴好手套后应完全遮住手及腕部，如必要可覆盖实验服袖

4、手套的清洗和更换：a)使用一次性手套，不可再次使用。用后立即进行高压灭菌消毒然后丢弃。b)不得戴着手套离开实验室区域。56

戴手套注意要点:

1)在实验室工作中要一直保持戴手套状态并选择正确类型和尺寸的手套；

2)将手插入手套后将手套口遮盖实验服袖;手套的手要远离面部。

57脱手套过程及注意要点:

用一手捏起另一近手腕部处的手套外缘,将手套从手上脱下并将手套外表面翻转入内；用戴着手套的手拿住该手套；用脱去手套的手指插入另一手套腕部处内面；脱下该手套使其内面向外并形成一个由两个手套组成的袋状；丢弃在高温消毒袋中并进行消毒处理。58

洗手根据(GB19489-2004）要求:1、应该安装洗手装置，该装置可以是脚控或红外控制的洗手池，或者配置一个酒精擦手器。2、洗手是一种减少有害物质暴露的有效措施，要经常洗手。

a）在处理活体病原材料或动物等生物危害物质后，

b）在脱去手套之后和离开实验室之前，

c）在脱卸个人防护装备时发生手部可见的污染时，

d）在继续脱卸其他个人防护设备之前。

洗手一般用肥皂和水或使用酒精擦手器。

59（七）身体防护装备

防护服

（实验服、隔离衣、连体衣、围裙以及正压防护服）1、在实验室中工作人员应该一直或持续穿上防护服2、清洁的防护服应放置在专用存放处3、污染的防护服应放置在有标志的防漏消毒袋中4、每隔适当的时间应更换防护服以确保清洁5、当防护服已被危险材料污染后应立即更换6、离开实验室区域之前应脱去防护服。

60实验服

隔离衣

连体防护

61实验服（BSL-1实验室）------前面应该能完全扣住隔离衣和连体衣（BSL-2和BSL-3实验室）------比实验服将更适合于在微生物实验室以及生物安全柜中的操作工作。当有可能发生危险物质（血液或培养液等化学或生物危害物质喷溅）到工作人员身上时，应该在实验服或隔离衣外面再穿上塑料高颈保护的围裙。禁止在实验室中穿短袖衬衫、短裤或短裙62

隔离衣穿戴方式63隔离衣

解开颈和腰部的系带，将隔离衣从颈处和肩处脱下。把外面污染面卷向里面，将其折叠或卷成包裹状。丢弃在消毒箱内64隔离衣脱去方式

65（八）足部防护装置

当实验室中存在物理、化学和生物危险因子的情况下，穿合适的鞋子和鞋套或靴套。可以防止实验人员足部（鞋袜）避免受到损伤。BSL-2和BSL-3实验室要坚持穿鞋套或靴套。BSL-3和BSL-4实验室要求使用专用鞋。禁止在生物安全实验室中穿凉鞋、拖鞋、露趾和机织物鞋面的鞋。---建议使用皮制或合成的不渗液体的鞋类以及防水、防滑的一次性或橡胶靴子66使用方法示意图

靴套使用方法示意图鞋套使用方法示意图67生物安全柜

在操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时：

用来保护：

--操作者本人--实验室环境--实验材料

使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。68

生物安全柜主要的保护屏障，防止生物有害气溶胶逃逸.保护操作人员-负压保护周边环境-HEPA可以保护样品-层流69

生物安全柜实验室操作都可能产生感染性气溶胶。(直径小于5μm的气溶胶、直径为5～100μm的微小液滴）亦可能产生吸入或交叉污染工作台面的其他材料。正确使用生物安全柜—

将有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交叉污染。7071

CLASSII二级生物安全柜层流负压柜

CLASSII级生物安全柜适用于1、2、3级生物安全水平的实验。它们可以安全的保护样品、人员和环境。CLASSII级生物安全柜根据结构以及气流分配的不同，主要是外排气流，分为：

A型（30%排在实验室内）

B型B1（70%接管道外排）

B2（100%接管道外排）

B3（30%接管道外排）．HEPA（高效微粒子空气，能99.99%地去除0.3微米以