【2024西南大学生物学考研】 分子生物学简答题梳理

胞周期蛋白的表达，影响细胞的增殖和分裂。一些细胞内RNA可以作为信号分子，在细胞信号传导通路中发挥作用。例除了上述功能外，细胞内RNA还参与其他生物学过程，如DNA修复、染色对其功能和机制的理解也在不断扩展和深化。中心法则(CentralDogma)是描述生物信息传递的基本原理，它概括了DNA两条链被解开，每条链作为模板，合成新的互补链，形成两个完全相同的读取，每三个核苷酸称为一个密码子(codon),对应一个特定的氨基酸。tRNA(transferRNA)分子带有特定的氨基酸，通过与mRNA的密码子互补配对，将氨基酸连接起来，形成多肽链，最终折叠成功能性的蛋白质。过程是生物体遗传信息传递和表达的基础，对维持生命的正常功能至关重要。然而，值得注意的是，中心法则并不是一个完整的描述，因为在某些情况下，RNA还可以逆转录为DNA(逆转录过程)或直接参与功能活动而不(1)酵母双杂原理很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域，这两个结构域各具功能，互不影响，但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域，否则无法完成激活功能。将两待测研的两个质粒转入同一酵母细胞中表达，如果两蛋白之间不存在相互作用，则下游基因(报告基因)不会转录表达；如果两个蛋白存在相互作用，则BD与AD两结构域空间上很接近，从而下游基因(报告基因)得到转录。判断通过报告基因表达与否，即可判断两蛋白之间是否存在相互作用。用酵母双杂交系统能够快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用，并能寻找、分离与已知蛋白相互作用的配体，在研究抗原和抗体相互作用、发现新的蛋白质和发现蛋白质的新功能、筛选药物作用位点及药物对蛋白互作影响、建立基因组蛋白连锁图等方面应用广泛。(2)免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究两个蛋白相互作用的经典方法。原理：基于抗体与抗原(靶蛋白)之间的特异性结合，此时如果样品溶液中存在能与靶蛋白相互作用的目的蛋白，会一同被拉下来，随后利用SDS,WesternBlot等方法对得到的目标蛋白进行分析，进而证明两者间的相互作用。通俗点来说，假设我们需要研究样品中A蛋白和B蛋白之间是否存在一些相互作用，首先我们通过合适的方法处理样本，将蛋白提取出来(同时不能破坏蛋白之间的相互作用),然后用预先结合了琼脂进而证明二者之间存在相互关系。(3)Pull-down实验，又称拉下实验，是一种体外亲和纯化技术。(这个实验跟免疫共沉淀实验很像，不同的是免疫共沉淀是在细胞里进行的。)原理：将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时，可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附，而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。为了更有效地利用pulldown技术，可以将待纯化的蛋白以融合蛋白的形式表达，即将“诱饵”蛋白与一种易于纯化的配体蛋白相融合。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合标签从细菌中白通过GST与固化在载体上的GTH(谷胱甘肽)亲和结合。简单来说，我们假定a蛋白和b蛋白可能存在互作，将纯化的融合GST的a蛋白和纯化的b检测结果，我们可以看到GST-a蛋白和b蛋白所对应的条带，即表明了a蛋白和b蛋白因发生相互作用而被GST-apulldown(GST对照只显示一个条二、基因编辑技术的原理，应用和进展?基因编辑技术是一组用于修改生物体基因组的技术，其中最具代表性的是CRISPR-Cas9系统。下面是基因编辑技术的原因编辑工具，它利用CRISPR(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats)序列和Cas9(CRISPR-associated随后，细胞的自我修复机制(如非同源末端连接或同源重组)可以被利用1.功能研究：通过基因编辑技术，可以生成基因敲除、基因敲入或基因突变的模型生物，帮助研究人员理解基因的功能和调控机制。2.遗传疾病研究：基因编辑技术可以用于研究遗传疾病的发生机制和治疗方法。例如，可以通过模拟人类遗传疾病的基因突变，研究疾病的发展过3.农业改良：基因编辑技术可以用于改良农作物和畜牧业生物的性状，提4.生物医药研发：基因编辑技术为药物研发提供了新的途径。可以通过基因编辑来改变细胞的代谢途径、增强药物的生产能力，或者直接编辑人体高其特异性和准确性，减少非特定性的剪切。例如，通过使用改进的Cas92.新的基因编辑工具：除了CRISPR-Cas9,还出现了其他基因编辑工具，应用场景下具有独特的优势，拓宽了基因编辑技术的应用范围。3.精准基因组编辑：研究人员致力于实现更精确的基因组编辑，包括单碱基编辑、基因组大片段的插入和删除等。这些技术的发展使得基因编辑更4.基因编辑在临床治疗中的应用：基因编辑技术在基因治疗和个体化医学领域具有巨大的潜力。临床试验已经开始使用基因编辑技术治疗一些遗传性疾病，如β-地中海贫血和猎光病等。总结起来，基因编辑技术通过CRISPR-Ca