反相高效液相色谱法测定果酒中的有机酸

反相高效液相色谱法测定果酒中的有机酸

这种含有大量有机质的食物广泛存在于水果和蔬菜中。它可以使食品具有一定的味道、质地和颜色、耐腐蚀性和抗逆性。以科学方法酿造而成的果酒中,含有丰富的维生素、有机酸及含氮物质,其中有机酸能维持果酒的pH值,使果酒口味鲜美、清凉透明。目前,有机酸的测定方法有酸碱滴定法、旋光法、气相色谱法,高效液相色谱法等。其中酸碱滴定法、旋光法所需费用较低,但影响因素较多,准确度差;气相色谱法中常因酸的沸点较高、不易气化而需要先对其衍生再进行测定,方法繁琐;高效液相色谱法灵敏简便,样品不需前处理,可直接测定,因此更快捷和准确。本实验采用反相ODS色谱柱,磷酸溶液作流动相,测定果酒中的有机酸,并对测试条件进行了研究,建立了一种简便、准确的分析方法。1材料和方法1.1超声波细胞粉碎机日本岛津LC-6A高效液相色谱仪;紫外-可见光光度检测器SPD-6AV;C-R3A数据处理器;JY88-Ⅱ型超声波细胞粉碎机;SPM-10A数字酸度计。1.2乳酸ar磷酸(AR);酒石酸(AR);乳酸(AR);甲醇(AR);磷酸氢二钠(AR);磷酸二氢钾(AR);磷酸氢二铵(AR);柠檬酸。1.3溶液的制备1.3.1流量相的制备(1)0.01mol/l磷酸溶液的制备取1.15ml磷酸溶液,用超纯水定容至1000ml,用磷酸氢二钠调节pH至2.5,超声波脱气后备用。(2)0.5%磷酸氢二铵溶液的制备准确称取1.500g磷酸氢二铵,用超纯水定容至300ml,用磷酸调节pH至2.5,超声波脱气后备用。(3)磷酸二羟钾溶液2mol准确称取8.165g磷酸二氢钾,用超纯水定容至300ml,用磷酸调节pH至2.5,超声波脱气后备用。1.3.2标准溶液的制备(1)酒石酸标准储备溶液准确称取10.000g酒石酸放入100ml容量瓶中,用超纯水溶解并定容至100ml(1ml=0.1g/L)。(2)标准储备磷酸溶液准确称取10.000g柠檬酸放入100ml容量瓶中,用超纯水溶解并定容至100ml(1ml=0.1g/L)。1.4流动相和检测波长色谱柱:InertsieΦODS-3(5μm,4.6×250mm);流动相:0.01mol/L磷酸溶液(pH=2.5);流速:1ml/min;检测波长:210nm;进样量:5μl;柱温:30℃。1.5样品预处理将葡萄酒原液用0.45μm孔径的滤膜过滤两次,取1ml滤液适当稀释,备用。2结果与讨论2.1色谱柱的选择hypersilods-2色谱柱a用两种色谱柱InersieΦODS-3(5μm,4.6×250mm)和HypersilODS-2(5μm,4.6×250mm)分析同一标准溶液,结果用InersieΦODS-3(5μm,4.6×250mm)色谱柱各组分分离效果较好,保留时间适宜。2.2流量相的选择2.2.1流动相的测定使用不同流动相能使色谱峰得到更好分离。根据参考文献我们分别选用0.5%磷酸氢二铵(pH=2.5)、2mol/L的磷酸二氢钾(pH=2.5),0.01mol/L的磷酸溶液(pH=2.5)作流动相,测定同一标准混合溶液。能使有机酸结果很好分离,避免样品中杂质的干扰。2.2.2流动相ph的影响分别配制pH为2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0的磷酸溶液,并以其作为流动相,测定同一标准溶液。结果随着pH的增大,两种酸的保留时间不断接近。为使组分更好分离和保护色谱柱,选用pH=2.5的磷酸溶液最适宜。2.3标准铬图在最佳色谱条件下,分析有机酸标准液,乳酸、酒石酸、柠檬酸结果的保留时间分别为8.345、4.893、13.490min。见图1。2.4内标岩酒石酸峰面积测定分别配制0.05、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9g/L的标准溶液,在最佳色谱条件下,取5μl分别进样,测定峰面积,结果酒石酸的线性范围为0.05～0.90g/L,回归方程Y=12370+66528X(r=0.9953)。分别配制浓度为0.3、0.5、0.7、1.0、1.2g/L标准溶液,取5μl分别进样,结果柠檬酸线性范围为0.3～1.2g/L,回归方程Y=-3641.7+25884X(r=0.9936)。2.5限制采样以三倍信噪比值计算酒石酸,柠檬酸的检出限分别为2.58×10-6(g/L),8.48×10-6(g/L)。2.6返回率和准确度取处理后的葡萄酒向其中加入一定量的标准溶液,结果进行测定。结果见表1、表2。2.7酒石酸含量分析用上述方法分别测定通化野生原汁葡萄酒、王朝干白葡、野生山葡萄酒、张裕干红葡萄酒、野妹原汁山葡萄酒中的酒石酸,柠檬酸的含量,