药剂学毕业论文

基于纳米混悬技术的难溶性中药

有效部位给药系统的研究课题支持国家新药创制重大专项〔2021ZX09103-349〕内容提要引言1实验部分2全文结论3致谢4引言纳米混悬给药系统〔Nanosuspension，简称NS〕物理加工减小粒径，增大比表面积特殊性质较大的溶解性高透过性强吸附性明显优势增加吸收速度和吸收率提高局部聚集浓度，减少毒副作用延长作用时间根据需求进行表面修饰引言据统计，中药药效物质中约有50%为水难溶性药物。难溶性中药有效部位瓶颈问题为难溶性中药有效部位纳米制剂提供示范提升民族医药产业产生巨大社会和经济效益

提高生物利用度，增强临床疗效NS引言波棱瓜子为葫芦科植物波棱瓜〔Herpetospermumcaudigerum)的枯燥成熟种子，具有清热解毒，去火降热，助消化等成效。总木脂素活性部位波棱瓜子临床用途赤巴病、黄疸型肝炎、胆囊炎、消化不良等。结构分析苯并呋喃木脂素类成分。筛查方法

抗鸭乙肝病毒实验2.2.15细胞株实验抗小鼠急性肝损伤实验BCSⅡ类难溶性药物引言

主要化学成分结构式波棱酮(Herpetone)波棱素(Herpetin)波棱芴酮(Herpetfluorenone)

波棱酚(Herpetenol)波棱甲素(Herpetrione)引言技术路线总木脂素纳米混悬剂制备工艺研究固体化研究体外溶出度考察体内药代动力学研究药效学研究粉末稳定性考察形态学考察、粒径和多分散度测定再分散性评价波棱瓜子提取纯化工艺研究实验局部HTL的制备HTL-NS的制备HTL-NS的固体化研究HTL-NS的体内药代动力学研究HTL-NS的药效学研究主要内容HTL的制备一.评价标准的建立HPLC法出膏率=所得膏率/药材的投入量×100%波棱甲素得率=干膏中波棱甲素的含量/药材中波棱甲素的含量×100%波棱甲素的含量出膏率波棱甲素得率HTL的制备二、提取工艺的考察1.吸水率的考察方法：药材粗粉10倍量水浸泡每隔30min观察1次收集未被吸收的水液直至完全浸透结果：波棱瓜子药材的吸水率为210%。HTL的制备2.正交试验优化提取条件

以波棱甲素含量为指标，考察溶剂用量、提取时间、乙醇浓度、提取次数四个因素，三个水平。因素ABCD水平溶剂用量（倍）提取时间（h）乙醇浓度（%）提取次数（次）151701272802393903表1提取因素水平

HTL的制备试验编号ABCD波棱甲素含量(mg/g生药)111113.62212225.09313335.53421235.27522314.02623125.19731325.08832135.18933214.16K14.7474.6574.6633.933K24.8274.7634.8405.120K34.8074.9604.8775.327R0.0800.3030.2141.394表2HTL提取工艺正交试验表HTL的制备方差来源自由度偏差平方和F比F值显著性A20.0101.00019.000B20.14214.200C20.0787.800D23.392339.200*误差20.010表3HTL提取工艺正交试验方差分析表

从直观分析和方差分析结果可以看出，四个影响因素的主次顺序为D>B>C>A，其中D有显著性意义。最正确组合为A2B3C3D3，即7倍量的90%乙醇提取3次，每次3小时。考虑到实际生产中降低本钱、生产效率等因素，确定最正确提取工艺为A1B1C2D3，即5倍量的80%乙醇提取3次，每次1小时。HTL的制备3.提取工艺的验证分别称取波棱瓜子药材粗粉100g，共6份，其中三份按正交试验所得的最正确制备工艺(A2B3C3D3)，另外三份按次最正确制备工艺(A1B1C2D3)。滤过，合并滤液，回收乙醇，65℃真空枯燥。表4验证试验结果

工艺条件A2B3C3D3A1B1C2D3药材投量（g）100100稠膏得量（g）8.148.89出膏率（%）8.148.89波棱甲素含量（mg/g生药）5.205.15HTL的制备4.波棱瓜子药材中波棱甲素提取率的考察取波棱瓜子药材粗粉100g，按A1B1C2D3提取；另取波棱瓜子药材粗粉5.0g，按质控分析方法提取。分别测定波棱甲素的含量，计算波棱甲素的提取率。表5波棱甲素提取率的考察结果提取方法波棱甲素含量（mg/g生药）波棱甲素提取率（%）A1B1C2D35.1587.88质控方法5.86结果显示，该提取工艺对波棱瓜子药材中的波棱甲素提取率较高，工艺可行。HTL的制备三、精制纯化工艺的考察1.色素工艺的考察

波棱瓜子药材提取液中含有大量的叶绿素，其在冷乙醇溶液中的溶解度较小，放置过程中会大量析出。6h12h24hHTL的制备2.除油工艺的考察波棱瓜子药材提取液中含有大量的脂肪油，和本品的功能主治无关，而且润肠致泻，必须将之除去。通过静态放置试验发现，该脂肪油密度比水小，通过静置后油水别离效果很好。因此，考察不同静置时间对除油效果的影响。结果说明，静置12小时后油水别离效果最好。波棱瓜子乙醇提取液过滤，回收乙醇至无醇味静置2小时静置6小时静置12小时HTL的制备3.别离纯化工艺的考察

为减少服用剂量，同时利于枯燥、粉碎、减少吸湿、潮解及成型等问题，需对乙醇提取液进行纯化。由于目标成分是带有酚羟基的木脂素类化合物，因此，本研究对碱溶酸沉和萃取两种方法进行了考察，结果说明用乙酸乙酯萃取的方法较好。HTL的制备4.精制纯化工艺的验证方法：波棱瓜子粗粉乙醇提取液浓缩液静置24小时后，过滤，浓缩至无醇味浸膏静置12小时后，分去油层乙酸乙酯溶液1倍量乙酸乙酯萃取4次HTL50℃减压浓缩枯燥HTL的制备表6验证试验结果试验批次生药量（g）干膏量（g）出膏率（%）波棱甲素得率（%）1100030.073.0184.212100027.442.7482.683100025.352.5483.48平均值100025.272.5383.46结果显示，该精制纯化工艺稳定可行。HTL的制备四、HTL质量控制研究〔1〕总木脂素的含量测定；〔2〕波棱甲素的含量测定。〔1〕枯燥失重；〔2〕炽灼残渣。方法参照中国药典2005版。棕色粉末，味苦。以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶板展开剂：二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(3:2:0.2)显色剂：20%硫酸乙醇溶液性状检查鉴别含量测定质量标准HTL的制备五、HTL固体状态的稳定性考察称取HTL原料药约1g，置于量瓶中。分别于第0、1、2、4、6个月取样，采用HPLC法测定波棱甲素的含量。图1稳定性试验结果结果显示，HTL固形物中波棱甲素的含量在6个月内根本保持不变，理化性质稳定。HTL-NS的制备研磨法微乳法纳米沉淀法高压乳匀法优点

适用范围广，粒径分布均匀，且适于热不稳定性药物。缺点在制备过程中会出现碾磨介质的溶蚀、脱落，使纳米混悬剂中含有一定量的碾磨介质。

优点制备过程简单，不需要特殊设备。缺点不适用于既不溶于水也不溶于有机试剂的药物，同时还存在有机溶剂残留及安全性问题。

优点重复性好，粒径均匀，适用于稳定性较差的药物。缺点制备过程需要大量有机溶剂，且含药量低，不适用于大生产。无需使用有机试剂，前三种方法的优点均具有，还可适用于制备注射用的无菌纳米混悬剂，从而被认为是NS较理想的制备方法。制备方法HTL-NS的制备1.制备工艺的初步确定

采用高压乳匀法制备HTL-NS。先将波棱瓜子总木脂素原料药和外表活性剂参加适量蒸馏水中，充分搅拌混匀，然后进行高速探头超声乳化，最后高压乳匀，得HTL-NS。一、HTL-NS制备工艺的考察HTL-NS的制备2.外表活性剂的考察为了得到稳定的纳米混悬剂，防止纳米粒子的凝聚和增大，制备过程中需参加一些外表活性剂。外表活性剂的种类、用量及用法均会不同程度影响纳米粒的粒径、分散性和稳定性，因此，制备不同的纳米粒宜选择相适宜的外表活性剂。HTL-NS的制备〔1〕外表活性剂种类的筛选表7外表活性剂种类的筛选表面活性剂平均粒径（nm）体系观察Poloxamer560放置后沉淀于杯底吐温80621颗粒间易发生絮凝卵磷脂780制剂失败SDS372放置后体系能保持较长时间稳定PVPK30410放置后体系能保持较长时间稳定PVA659放置后沉淀于杯底本研究以平均粒径和体系观察为指标，考察了Poloxamer、吐温80、卵磷脂、SDS、PVPK30、PVA等常用外表活性剂。HTL-NS的制备〔2〕外表活性剂用法的考察为了进一步优化外表活性剂的使用，充分发挥其作用，本课题还对外表活性剂的使用方法经行了研究，考察了SDS和PVPK30在单用和合用时，对粒径和体系稳定性的影响。结果说明，将两种辅料合用，制备HTL-NS时效果更佳，粒径更小，且体系更稳定。HTL-NS的制备3.高压乳匀参数的考察

在HTL-NS的制备过程中，除了外表活性剂的使用，高压乳匀过程也是影响粒径和体系稳定性的一个重要因素。本课题以粒径和体系观察为指标，对高压乳匀的压力和循环次数进行了考察。结果说明，在1000bar压力条件下高压乳匀10次，制备得到的HTL-NS效果最正确。HTL-NS的制备4.处方设计及优化以粒径为指标，考察主药与辅料的比例、SDS与PVPK30的比例，主药与蒸馏水的比例三个因素，三个水平。因素ABC水平主药：辅料SDS：PVPK30主药：蒸馏水110:11:11:20220:32:31:3035:11:31:40表8因素水平表

HTL-NS的制备123393123823137213261322532124333132221211111DCBA试验编号3.33311.000101.000167.667R383.333376.333420.000442.667K3383.000382.667319.000275.000K2380.000387.333407.333428.667K1479386463319204302462367457平均粒径（nm）表9正交试验表HTL-NS的制备方差来源自由度偏差平方和F比F值显著性A251921.5562567.57819.000*B218164.222898.241*C2182.8899.044D220.2221.000误差220.222表10方差分析表

根据直观分析和方差分析表可见，三个因素影响的主次顺序为A>B>C，其中A、B的影响有显著意义，最正确组合为A2B2C3。考虑到蒸馏水参加量过大，会影响枯燥效率，同时主药：蒸馏水的影响没有显著意义，因此选择A2B2C1为制备HTL-NS的最正确工艺，即主药：辅料为20:3，SDS：PVPK30为2:3，主药：蒸馏水为1:20。HTL-NS的制备5.制备工艺的验证制备工艺：HTLSDS、PVPK30参加适量蒸馏水，充分搅拌均匀2000r/min高速探头超声乳化1000bar压力下高压乳匀10圈HTL-NSHTL-NS的制备按上述工艺制备三批HTL-NS，测定平均粒径及多分散度指数。表11HTL-NS三批验证结果试验批号平均粒径(nm)PdI1239.90.1402237.70.1543241.60.118三批验证结果显示，其平均粒径的范围在200-300nm之间，PdI的平均值为0.137，粒径大小符合标准，且分布均匀，说明该工艺稳定可行，重现性好。HTL-NS的制备1.外表形态观察方法：

取HTL-NS加适量蒸馏水稀释后，滴加至锡箔纸上，常温下放置，待溶剂挥干后，于扫描镜下观察其形态并拍摄照片。二、HTL-NS形态学考察由图可见，按照最佳工艺制备的HTL-NS，纳米在扫描电镜下呈不规则球形，大小均匀。HTL-NS的制备2.粒径及多分散度的测定

方法：

取HTL-NS适量，加蒸馏水稀释后，放入粒径测定仪中，进行粒径和多分散度的测定。结果表明，HTL-NS的平均粒径为239.9nm，多分散度指数为0.140。说明按照最佳工艺制备的HTL纳米粒粒径小，粒径分布均匀，范围窄。HTL-NS的固体化研究HTL-NS为溶液，属于热力学不稳定体系，物理稳定性存在担忧，另服用携带不方便，非常必要将其固体化，以提高稳定性的同时，方便患者使用。研究发现，纳米混悬液固体化后常出现粒径明显变大、粒子发生聚合、储存过程老化等再分散性差问题。因此，固体化再分散后溶液是否还呈纳米状态，是关键的科学技术问题，也是制约药物纳米开展的瓶颈问题。HTL-NS的固体化研究一、枯燥方法的选择喷雾枯燥真空枯燥冷冻枯燥真空干燥：操作简直，干燥速率快，但呈现严重硬团聚集现象；喷雾干燥：粒径仍呈纳米状态，但成本较高；冷冻干燥：操作简单，具有良好的复原性。考察结果√HTL-NS的固体化研究二、保护剂的选择采用冷冻枯燥后，虽然粒径仍呈纳米状态，但是固体化前后粒径变化较大，且外观不好。为了改善这一情况，那么需要在枯燥前参加适量的保护剂。表12保护剂的评价方法及标准评价指标操作方法评价标准外观取各处方冻干品，通过肉眼观察和触摸，对冻干品整体形态、色泽、质地等进行评价。以色泽均匀，表面光洁，无花斑，不塌陷，不皱缩，维持原体积，可整块脱落但不散碎，质地细腻者为佳。粒径变化差值按粒径测定方法对固体化前后的粒径进行测定，计算粒径变化差值。以固体化前后粒径变化值不超过50nm为佳。再分散性取各处方冻干品，加入蒸馏水20ml，振摇分散。能在较少的振摇次数下，很快分散得到均匀的HTL-NS混悬液者为佳。HTL-NS的固体化研究1.保护剂的考察按最正确工艺制备HTL-NS，分别参加不同浓度的葡萄糖、甘露醇、乳糖、山梨醇作保护剂，充分混匀后，进行冷冻枯燥。枯燥结束后，按上述标准进行评价。表13各处方冻干品评价结果保护剂浓度外观粒径变化差值再分散性葡萄糖5%——+10%15%甘露醇5%++++++10%++++15%++++乳糖5%+++++++10%++++15%++++山梨醇5%—++++10%15%HTL-NS的固体化研究2.冻干HTL-NS的制备工艺验证按最正确工艺制备冻干HTL-NS，测定平均粒径、多分散度指数、粒径变化差值和再分散性。表14冻干HTL-NS三批验证结果试验批号平均粒径(nm)PdI粒径变化差值(nm)再分散性1256.70.22320+++

2262.30.19834+++

3248.90.16729+++

三批验证结果显示，平均粒径范围在200-300nm之间，多分散度指数的平均值为0.196，平均粒径变成差值为28nm，粒径大小符合纳米标准，且分布均匀，固体化前后粒径变化小，再分散性好，说明最正确工艺稳定可行，重现性好。HTL-NS的固体化研究3.冻干HTL-NS的稳定性考察按最正确工艺制备冻干HTL-NS三批，常温下放置3个月后，测定平均粒径、多分散度指数、粒径变化差值和再分散性。

结果显示，3个月后冻干品纳米粒平均粒径、多分散度指数和粒径变化差值均稍有增大，分散性良好，粒径都在400nm以下。HTL-NS的固体化研究4.HTL-NS的体外溶出度考察〔1〕溶出介质的考察在HTL中，大多数木脂素都含有-OH，因此在酸性溶液中溶解性较差。现选用pH=6.8的磷酸盐缓冲液和pH=7.5的磷酸盐缓冲液两种不同溶出介质进行HTL-NS的溶出度比较试验。0102030405060708090100010203040506070t/mindissolution/%PH=7.5PH=6.8结果显示，HTL-NS在pH=7.5的磷酸盐缓冲液的溶出行为较好，故选择pH=7.5的磷酸盐缓冲液作为溶出介质。HTL-NS的固体化研究〔2〕溶出体积的考察溶出介质的体积需符合药物漏槽条件，即溶出介质的量要超过药物全部溶解时所需要的介质量，至少为药物溶解用量的三倍以上。同时还需考虑高效液相色谱法含量测定时的最低检测限，故将溶出介质的体积定为900ml。HTL-NS的固体化研究〔3〕溶出度测定方法的建立色谱条件：AlltimaC18

色谱柱(5µm，250×4.6mm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(24:76)；流速：1.0ml/min；检测波长：240nm；柱温：30℃。

专属性考察线性考察

精密度试验回收率试验

稳定性试验方法学考察

在该色谱条件下，波棱甲素得到较好分离，且空白样品在相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。日内RSD为0.37%；日间RSD为0.45%。回归方程为:Y＝1312X－2.5414，r＝0.9997，波棱甲素在9.9～148.4µg/ml范围内线性关系良好。供试品溶液在12小时内稳定，RSD为0.19%。平均回收率为101.2%，RSD为1.21%。HTL-NS的固体化研究〔4〕HTL-NS胶囊和HTL物理混合物胶囊的制备取适量枯燥至恒重的固体化HTL-NS粉末分装到胶囊中，制成HTL-NS胶囊〔每粒含波棱甲素100mg〕；另取适量枯燥至恒重的HTL粉末按制备HTL-NS的处方比例称取辅料，通过物理混匀后，分装到胶囊中，制成HTL物理混合物胶囊〔每粒含波棱甲素100mg〕，备用。HTL-NS的固体化研究〔5〕溶出度的测定分别取HTL-NS胶囊和HTL物理混合物胶囊各6粒，量取经脱气处理的pH=7.5磷酸盐缓冲溶液900ml至溶出杯中，加温使溶出介质温度在(37±0.5)℃，调转速为100r/min。将胶囊投入溶出杯内，分别于5、10、15、20、30、45、60min时取样按外标法计算出供试品溶液的质量浓度，并计算出每粒的溶出度。0102030405060708090100010203040506070t(min)溶出度(%)HTLHTL-NS

结果显示，HTL物理混合物胶囊的最大累积溶出率只有38.96%，而HTL-NS胶囊在20min时的累积溶出率就能达到87.49%。HTL-NS的体内药代动力学研究1.色谱条件色谱柱：AlltimaC18(5µm，250×4.6mm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(24:76)；流速：1.0ml/min；检测波长：240nm；柱温：室温；进样量：20μl。一、血药浓度测定方法的建立2.血浆样品的处理与测定精密移取血浆0.2mL置于具塞离心管中，参加甲醇沉淀蛋白，涡旋振摇30s，3000r/min离心5min，吸取上清液于40℃用氮气吹干，残渣参加100μl甲醇溶解，充分涡旋振荡，3000r/min离心5min，取上清液20μl进样测定。HTL-NS的体内药代动力学研究3.专属性考察ABDC

A.空白B.波棱甲素对照品C.血浆对照品D.HTL-NS血浆浓度由图可见，血浆中杂质和波棱甲素有较好的别离度，血浆中内源性杂质无干扰，因此本法有较高的专属性。HTL-NS的体内药代动力学研究4.标准曲线的绘制以药物浓度(x)对峰面积(Y)作线性回归，回归方程为Y=59.976X－7.296，r=0.9989(n=6)

，波棱甲素血浆浓度在0.297-11.88μg/mL范围内线性关系良好。最低检测限为0.2μg/ml。

5.精密度试验

血浆中波棱甲素日内平均精密度RSD<2.72%(n=5)，日间平均精密度RSD<6.05%(n=3)。

6.回收率试验

高、中、低浓度血浆中波棱甲素的提取回收率均>79%，方法平均回收率为98.6%-101.3%，RSD<3.5%。HTL-NS的体内药代动力学研究实验动物：Wistar大鼠16只，♀、♂各半，(200±20)g，SPF级给药前禁食12h，不禁水，按体重随机分为2组A组：口服灌胃HTL-NSB组：口服灌胃参比制剂HTL给药剂量：270mg/kg〔以波棱甲素计算〕取血时间：0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、14、16h采集血样：眼眶后静脉丛取血保存方式:血样经肝素抗凝后分取血浆，冷藏，备用数据处理：3P97药动学软件二、给药方法、样品采集和数学分析HTL-NS的体内药代动力学研究三、药代动力学试验结果024681012140246810121416t/hC/ug?ml-1HTL-NSHTLParameterUntiHTL-NSHTLKe1/h0.38500.4921Ka1/h32.05432.3136T1/2(a)h0.02160.2996T1/2(e)h1.80051.4084T(peak)h0.13960.8498Cmaxµg·h-111.15734.8923AUC(0→T)(ug·ml-1)*h30.582915.1023表15波棱甲素大鼠体内药代动力学参数表

0→T:HTL-NSfromzeroto14h;HTLfromzeroto10h.

药时曲线经拟合显示波棱甲素在大鼠体内动力学行为符合一室模型。结果显示，HTL原料药和HTL-NS的药时曲线2h后开始呈缓慢的下降趋势，血药物浓度分别于10h和14h后低于最低检测限。与参比制剂相比，HTL-NP的Ka较大，Ke较小，T(peak)缩短了4/5，AUC增大了2倍以上。说明HTL-NS提高了HTL的体内生物利用度，有效的解决了HTL难溶性问题。HTL-NS的药效学研究1.试验方法实验动物：Wistar大鼠40只，♀、♂各半，(200±10)g，SPF级按体重随机分为4组A组：正常对照组；B组：肝损伤模型组；C组：HTL组；D组：HTL-NS组。造模方法：腹腔注射10%CCl4植物油(按0.5ml/100g体重给予)，每周两次，连续给予12周，正常对照组那么给予同体积的生理盐水。给药方法：造模同时每日灌胃给药一次，C、D组按0.081g/kg(以波棱甲素计)给药(按0.5ml/100g体重给予)，A、B组灌胃给予同体积的生理盐水。样品采集：实验结束前，禁食12小时。取股动脉血，3000r/min离心10min，别离血清，测定GPT、GOT、TP、ALB；取肝组织作羟脯氨酸测定，计算肝胶原蛋白含量，同时做组织化学及组织病理学检查。一、对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的影响HTL-NS的药效学研究2.试验结果表16对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的影响

组别GPT(U

L-1)GOT(U

L-1)TP(g

L-1)ALB(g

L-1)白/球对照组34.21

2.2533.42

4.316.79

0.384.12

0.291.54模型组138.68

25.53##113.22

8.03##5.43

0.95#3.14

0.53##1.37HTL组75.32

18.98**62.98

21.68**6.33

0.963.73

0.69*1.43HTL-NS组60.19

8.68**49.93

8.49**6.68

0.58**4.02

0.56**1.51与正常组比较#p<0.05，##p<0.01；与模型组比较*p<0.05，**p<0.01组别剂量(g/kg)动物数(只)胶原蛋白(mg/g干肝)对照组1014.15

2.96模型组1042.88

5.44##HTL组0.0811031.60

2.64**HTL-NS组0.0811020.33

1.68**与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01表17对大鼠肝胶原蛋白含量的影响HTL-NS的药效学研究正常对照组：肝组织正常结构；B.模型对照组：肝脏较大面积坏死，假小叶形成；C.HTL-NS组：少量纤维增生；D.HTL组：胶原纤维不明显。

结果显示，HTL和HTL-NS均可抑制多次注射CCl4引起的大鼠血清转氨酶的升高、总蛋白和白蛋白的降低，减少肝胶原蛋白的含量。HTL组和HTL-NS组比较，HTL-NS对CCl4所致的大鼠慢性肝损伤的治疗作用较HTL好。HTL-NS的药效学研究1.试验方法实验动物：昆明种小鼠40只，♀、♂各半，(20±2)g，SPF级按体重随机分为4组A组：正常对照组；B组：肝损伤模型组；C组：HTL组；D组：HTL-NS组。给药方法：C、D组按0.117g/kg(以波棱甲素计)给药，每天2次，连续给药7天，A、B组灌胃给予同体积的生理盐水。造模方法：连续给药7天后，腹腔注射D-GalN800mg/kg(按0.2ml/10g体重给予)，正常对照组那么给予同体积的生理盐水。样品采集：造模后20小时，小鼠摘眼球取血，测血清GPT、GOT值，并取肝组织作病理学检查。二、对D-GalN所致小鼠急性肝损伤的影响HTL-NS的药效学研究2.试验结果表18对D-GalN致小鼠急性肝损伤的影响

组别动物数(只)GPT(U

L-1)GOT(U

L-1)对照组1015.30

1.0220.56

2.96模型组1068.18

11.38##67.55

5.47##HTL组1054.95

16.17*54.88

12.82*HTL-NS组1028.83

5.55**33.38

11.03**与正常对照组比较，#p<0.05,##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01正常对照组：正常肝组织结构；模型对照组：局部肝细胞肿胀、变性；HTL-NS组：个别肝细胞肿胀；HTL组：肝细胞轻度水样变性。结果表明，