微生物控制检测

Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20211微生物控制检测MrsRobynIsaacsonManufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20212微生物检测目的回想环境控制和质量控制的微生物检测微生物环境监测容器完好性测试灭菌前微生物负载测试培育基灌装促生长实验无菌测试其他微生物实验室事项Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20213环境监测表3这些数据是平均值单个沉降碟在空气中暴露小于4小时这些数据是指点性的，并不是代表规范必需建立微生物污染的程度〔限制〕，这样就可以起到警戒、纠偏的目的，并监控整个工厂的空气质量趋势。微生物限制值Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20214

环境监测方法外表监测该当对产品接触外表、地面、墙以及设备进展定期监测接触碟–用于平整外表取样面积25cm2培育基要凸起，高于碟子边缘培育基中含有中和剂外表擦试法-用于非规那么外表擦拭面积大约为25cm2定性或定量外表取样必需遵照无菌取样操作〔使污染消费过程的关键外表的风险最小化〕擦拭法和接触碟法都可以运用Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20215环境监测方法浮游菌监测撞击式，离心式和膜过滤〔明胶〕取样仪必需取一定体积的空气〔取样体积必需有代表性〕仪器必需经过校验沉降菌监测沉降碟在空气中的暴露时间为30-60分钟〔时间过长能够导致琼脂干掉〕，在灌装过程中需求改换。只能给出定性和半定量的数据数据必需结合空气浮游菌的取样结果进展评价Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20216环境监测取样地点必需基于微生物污染的风险取样点必需在产品或组件暴露的区域周围取样，比如：在灌装针头处冻干机产品装载处胶塞锅部件无菌衔接操作部位操作人员活动频繁处〔但不会影响消费进程〕低级别的区域以较低频率进展监测并监控趋势Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20217环境监测人员每次进入，手套都必需取样〔但不能在消毒过后马上取样〕定期的对着装的其他部位进展取样干净室的操作人员必需定期的验证来阐明本人在更衣时衣服未受污染〔更衣资质确认〕。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20218环境监测污染程度与趋势GMP法规上的限制值仅供参考。企业必需根据不同的区域制定警戒和纠偏限制值。必需思索单个结果值--平均值能够掩盖了不可接受的情况必需求有书面的操作规程规定数据回想和超越限制所采取的行动趋势分析报告对于人员和环境的短期和长期结果分析报告环境监测结果必需归档在批消费记录里微生物菌群的明显改动必需引起注重。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20219环境监测消毒剂消毒剂的适用性、有效性、局限性以及消毒规程程都必需评价必需制定最少接触时间对于A/B级区的消毒剂必需是无菌级别的，包装在无菌容器内，并在明确的效期内运用必需证明对工厂内的常规菌群有效必需运用杀孢子剂〔假设在环境中发现孢子〕，可以“喷雾〞的方式消毒部件和设备消毒的操作规程必需足够的详尽，以确珍重现性配制，任务顺序，接触时间从不良趋势中检出的微生物必需检测它们对于日常运用消毒剂的耐受性。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202110环境监测制药用水制药用水的微生物程度是非常重要必需求有一个广泛且全面的水系统监测方案工厂源水，预处置水，反浸透水，去离子水，纯化水/超纯水和注射用水都必需被监测企业必需设定警戒和纠偏限制。WHO引荐〔下一页〕对于纯化/水超纯水和注射用水，药典的限制如下：纯化水<100CFU/mL超纯水和注射用水10CFU/100mL〔但通常高温循环〕Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202111环境监测制药用水微生物限制参考值〔CFU/mL〕Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202112环境监测制药用水假设条件允许，需检测大肠菌群及或假单胞菌群〔该菌群能够会导致生物膜的产生〕。非肠道用药制剂用水必需检测热原。限制必需小于0.25EU/mL水的微生物检测用R2A琼脂〔此种培育基对于水中的微生物的复活提供低营养〕在30-35°C至少培育5天。取样程序必需遵照消费过程中的操作规程。紧缩空气/氮气/CO2必需监测非活性粒子和微生物。取样时运用减压口以提供稳定的气流，验证时必需思索这些要求Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202113容器完好性测试密闭系统的完好性初始验证用无菌培育基注入容器中，然后将容器浸入106CFU/mL的高浓度菌悬液中。对真空下进展密封的容器必需定期进展真空度检测，以证明在整个有效期内仍能维持真空度。建立规程，在制造过程剔除密闭性不好的产品。进展灯检的操作人员必需经常休憩，并且定期进展视力检查。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202114微生物负载/过程控制IPC检测对于灭菌前的生物负载测试，过程控制和原资料的测试都必需建立相应的书面规程必需对测试方法进展验证，来证明少量微生物也可以复活。假设环境中有厌氧菌存在，就要思索运用厌氧培育基。必需有文件来规定微生物限制的目的值，警戒和纠偏值，并且文件中应规定超越纠偏值时，所必需采取的措施。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202115微生物促生长实验用于微生物检测的培育基必需先对其进展营养实验来证明它是可以支持微生物的生长培育基灌装验证用的培育基必需可以支持大多数微生物的生长〔细菌和真菌〕。通常选用大豆酪蛋白酶消化培育基。有时假设环境中存在厌氧菌，需求思索运用厌氧性培育基。在培育基灌装终了以后，必需用实验证明培育基可以支持环境环境分别菌的生长。进展营养实验时，需求接种10-100CFU的菌液。菌株包括枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉等，以及环境分别菌。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202116微生物促生长实验培育基接种的培育基必需在3天内有微生物的生长。用于环境监测的培育基也必需对其促生长特性进展测试。必需进展验证证明培育基对残留消毒剂的中和才干，可以持在测试条件下的微生物的复活〔培育基中必需有中和剂〕。外部购买的培育基也必需进展测试。用于培育基灌装和环境监测的培育基必需经过预培育来证明其无菌性。培育基必需有经过验证的保管期限。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202117无菌检测无菌检测是无菌产品释放时进展的一项质量控制检测该方法有有显著统计学局限性–只能检测大范围的污染取样药典中规定了检测样品的数量及体积。在无菌工艺消费的产品，必需对灌装过程的前、中、后以及消费过程有干扰和中断后消费的产品进展取样。对于最终灭菌的产品，必需在先前识别的冷点处进展取样。取样数量必需可以满足复检。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202118无菌检测设备无菌检测必需在和无菌工艺消费过程一样的条件下进展。B级区背景的A级区层流〔也可以在隔离器中进展〕空气经过高效过滤器HEPA过滤，必需监控压差，并有超限报警进入该区域必需经过气闸室操作人员必需进展正确的无菌更衣操作人员必需经过适当的培训并对其进展人员资质确认必需制定相应的清洁，消毒，杀菌规程应对其环境进展监测Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202119无菌检测药典中已规定了方法假设产品可以过滤，引荐运用膜过滤方法直接接种法可作为备选培育基类型通常运用大豆酪蛋白酶消化培育基(SCD)和液体硫乙醇酸盐培育基(用于检测需氧和厌氧微生物)必需验证该培育基可以支持产品中曾经出现过的一系列微生物的生长，通常这些微生物数量〔浓度〕较少，能够需求中和抑菌剂。细菌3天内可以生长，霉菌5天内可以生长购买的或自制的培育基必需灭菌，灭菌程需经过验证。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202120无菌检测培育基运用前必需经过营养实验〔低数量的微生物〕必需有批号和有效期培育周期至少14天的培育培育基SCD中30-35°C培育,FTM培育基中20-25°C培育培育物进展定期检查对温度进展监控，温度监控设备必需经过校验假设产品产生浑浊、絮凝或沉淀，14天后应将适当比例的培育物〔2-5%〕接种到新颖的培育基中继续培育7天Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202121无菌检测阴性对照对于同一批培育基，应部分或全部预先培育14天后才干运用(也可以同无菌实验一同进展)阴性产品对照–应运用类似方式和包装的实践产品进展对照检测使检测结果容易评价应计算和记录阴性对照的污染率阳性实验对照抑细菌/抑真菌实验应证明培育基能支持产品中曾经出现过的一系列微生物的生长，通常这些微生物数量〔浓度〕较少，能够需求中和抑菌剂细菌3天，霉菌5天内应有明显生长Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202122无菌检测阳性对照应在新产品和任变卦时进展验证应每年进展再验证含抗生素或防腐剂或会缓慢释放以上成分的产品引荐运用直接接种法证明即使在培育终点，培育基没有遭到产品影响，依然能支持生长结果任何培育出的微生物都应被鉴定〔遗传学就〕自动/半自动鉴定系统都运用规范菌种进展定期确认Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202123无菌检测解释和复试不应检出污染菌除非可以证明实验失败是由于与产品无关的缘由引起的，方能进展复测欧洲药典规范(a)无菌检查时环境监控结果不符合要求(b)回想无菌实验过程，发现运用了可疑的方法，导致结果不符合要求(c)阴性对照有微生物生长(d)供试品中生长的微生物经鉴定后确证是因无菌实验中所运用的物品或无菌操作技术不当引起的。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202124无菌检测解释和复试当出现情况(a),(b)或(c)时应中止实验假设实验终了进展的抑制实验未出现挑战菌的生长，也以为实验无效出现情况(d)时必需用细菌鉴定的方法证明无菌实验分别的微生物经鉴定来自实验物料〔例如培育基〕和/或环境必需运用遗传学〔基因〕鉴定方法取一样样品数进展复试复试中有任何微生物生长，判产品不符合规定Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202125微生物实验室其他事项规范菌种的保藏规范菌种主要用于如下：培育基质量控制检测方法验证检测试剂的质控必需坚持其遗传稳定性，以维持它们的特性有些微生物培育物很容易发生变异/遗传学变化，这能够会影响它的培育特性，此类菌种不能继续运用菌种发生变异/遗传变化的概率是随着传代次数的添加而添加的-任务菌种自原始菌种传代后不应超越5代Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202126微生物实验室其他事项规范菌种(2)实验室必需建立一套保藏和维持规范菌种原始特征的体系。实验室必需:保管适宜的规范菌种用于培育基，检测试剂的质量控制、以及方法验证；确保规范菌种可追溯到公认的菌种保藏库〔比如ATCC，NCTC〕确保规范菌种在实验室内的鉴定结果独一性，可溯源Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202127微生物实验室其他事项规范菌种(3)实验室必需建立书面规程:必需对书面记录规范菌种的传代控制(如原始菌种转接保管菌株和任务菌株);对于规范菌种的购买、保藏、维护、鉴定和传代次数都要书面记录防止将任务菌种用作已衰退的次代菌种或原始菌种株对各个规范菌株都有记录:鉴定、来源、历史和接受日期对于原始菌株、传代菌株和任务菌株都有复活、保藏、保管和存放条件的记录;对原始菌株和/或传代菌株记录纯化和鉴定的结果;传代菌株和任务菌株的配制日期。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202128微生物实验室其他事项培育基质量控制用于无菌实验和培育基灌装以外的培育基也必需进展质量控制促生长/营养实验是可用定量或半定量的方法对于选择性培育基和/或特殊菌种的培育基，进展阴性阳性对照不同程度的质量控制要求取决于培育基能否：本人配制〔每批都要检测〕购买预浇制的培育基(供应商检测培育基，实验室定期核对)Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202129微生物实验室其他事项培育基质量控制(2)实验室必需:培育基的配制、质控、释放和保管都要有书面规程;在常规存放条件下,培育基必需确立经过验证的有效期;对每批培育基的配制和质量控制进展记录;确保每批培育基的配制记录都能追溯到该批培育基的微生物质控记录;根据接受规范来评价微生物质量控制检测结果Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202130微生物实验室其他事项培育基的灭菌程序培育基灭菌过程应同产品灭菌一样,都需对灭菌过程进展验证和监控设备校验和检查实验室设备(比如移液枪、天平、培育箱、冰箱、温度计、灭菌釜、层流台等)都必需经过校验、定期复校和常规检查〔假设条件允许〕人员必需经过适当的培训和授权Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202131微生物实验室其他事项生物指示剂的测试假设进展内控测试，应包有热处置步骤〔确保指示剂中只i存在孢子而并非营养型微生物〕必需抽查生物指示剂，确认供应商提供的孢子浓度能否正确内毒素检测非肠道用药不得检出内毒素内毒素是存在于革兰氏阴性杆菌细胞壁中的脂多糖物质，其在人体内会引起发烧对原资料、注射用水和其他一些废品必需进展内毒素检测Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202132微生物实验室其他事项内毒素检测(2)LAL(美洲鲎试剂)测试用于检测内毒素(以前是兔温实验)实验基于内毒素和鲎血液反响会产生凝结LAL测试的类型凝胶法浊度法比色法内毒素检测的设备必需无热原必需针对每个产品进展检测方法的准确性和可靠性验证Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November202133微生物实验室其他事项凝胶