-血凝和血凝抑制实验课件

血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验一、实验目的二、实验内容三、实验原理四、实验材料五、实验方法与结果判定六、注意事项七、红细胞制备一、实验目的1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法2、了解新城疫有关背景知识

二、实验内容1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原的效价2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体（疫苗注射后的抗体检测）三、实验原理1、血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。病毒颗粒红细胞2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。Iamlate！抗体抗原四、实验材料1、血凝板（96孔90ºV型）2、新城疫阳性血清3、被检血清（1份）4、1％红细胞悬液5、稀释液6、移液器（50ul,2人/把）7、枪头结果判定标准1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集；4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集；5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集；血凝价的判定以出现＋＋（50％凝集）的抗原最高稀释倍数为该抗原的血凝价（1:128）？？？。25ul1:256稀释的病毒抗原为该抗原的一个血凝单位。血凝抑制试验1、将病毒抗原稀释成4个血凝单位（1/128×4=1:32）2、在血凝板上1－12孔内各加入25ul生理盐水；3、在第1孔内加入被检血清25ul，然后倍比稀释至第10孔，最后弃25ul；4、第1－11孔内加入4单位抗原25ul（第11孔为抗原对照第12孔为红细胞对照）；5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟6、每孔加入1％鸡红细胞悬液25ul；7、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟8、结果判定血凝抑制效价测定结果判定标准1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：红细胞形成一个环状，四周有下凝集块，即50％凝集；4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集；5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。血凝抑制价的判定以出现完全抑制凝集(即不凝集)的血清最高稀释倍数为该血清的血凝抑制价（1:4）即抗体为22。六、注意事项1、红细胞用前请摇匀2、用枪加样定要准，尽量不要有气泡3、结果判定有耐心4、HA和HI勿相混红细胞的制备1、采SPF鸡血20-40ml于加抗凝剂的试管中（真空采血管）2、用生理盐水以1:5的比例稀释鸡全血后放入离心管中以1500r/min离心10min，3、离心后用移液器吸取上清液，再次加入生理盐水稀释并以1500r/min离心10min。4、离心后用移液器吸取上清液，再次加入生理盐水稀释并以1800r/min离心8min。5、离心后用移液器吸取上清液，剩余红细胞配制为10%的红细胞溶液，4℃保存备用。注意事项1、在稀释移取混匀的操作过程中动作要慢，