致病性微生物的实验诊断学基础

致病性微生物的实验诊断学根底浙江省医学科学院何浙生1一、常见细菌性传染病的病原学及血清学诊断根底法定细菌性传染病种类：甲类传染病：鼠疫、霍乱；乙类传染病：细菌性痢疾、伤寒和副伤寒、淋病、梅毒、百日咳、白喉、流行性脑脊髓膜炎、猩红热、钩端螺旋体病、布鲁氏菌病、炭疽、流行性和地方性斑疹伤寒；丙类传染病：肺结核、麻风病、感染性腹泻。2采样本卷须知：时间性针对性防护与消毒无菌操作标志昆虫、动物标本3临床与尸解取材参考表病人取样解剖取样————————————————————————————待诊血尿便痰唾咽脑腺局肝脾肺肠淋骨脑病种液洗脊穿部巴髓液液液穿结刺——————————————————————————————————斑疹伤寒+++鼠疫+++++++++++++++霍乱

+++炭疽+++

+++++++++++++布病+++++++++伤寒、副伤寒+++++++痢疾

++肉毒毒素中毒+钩体病++++———————————————————————————————————注:++代表一定要取样，+代表亦应取样4样品保管：冷藏保管保管液保管5标本运送：严厉包装，外表消毒，编号，登记，贴标签，严防容器破碎、滴漏，防止活标本逃逸等；附送检单，填明称号、数量、地点、时间等；专人护送，不要委托携带，尽快到达目的地；妥善保管，运送途中防止高温、日光、过度震动等。6非污染资料检验程序动物非污染样品保管一部分(以备再查)血清学检查镜检细菌培育查Ag查Ab染色及非染色免疫荧光镜检鉴定镜检分菌血清学检验G染色及其他染色免疫荧光G染色及其他染色免疫荧光镜检鉴定查抗原查抗体7被污染资料检验程序样品处置污染样品保管一部分(以备再查)上清或滤过液(病毒)沉淀物或滤阻物(经一定稀释)接种小鼠︹查肉毒毒素︺接种幼猫︹查葡萄球菌肠毒素︺乳鼠.鸡胚.组织培育︹病毒、立克次体等︺细菌培育查抗原CFT协同SAT反向HATHAIT等镜检动物细菌培育G染色及其它染色IFT查抗原查抗体分菌镜检鉴定8细菌病原学诊断检样处置普通样品处置：包括洗脱、提取、浓缩和抗杂菌等；节肢动物标本处置蚤类：制造标本时挤出前胃，涂片，分菌时可用单体也可用群体，研碎后接种培育。蜱：用消毒液浸洗后研磨，分菌。蝇：用选择性增菌液洗，培育洗液。蚊：对细菌性传染病意义不大，主要时对病毒性传染病意义较大9病原鉴定菌属确实定细菌种型确实定细菌染色细菌生化反响实验糖代谢实验有机酸、铵盐反响蛋白、氨基酸、含氮化合物呼吸酶类实验毒性酶类实验胆汁〔胆盐〕溶菌实验10血清学诊断根底知识〔1〕

抗原、抗体和补体抗原:完全Ag、半Ag、构成Ag条件，医学上主要Ag类别、共同Ag与异嗜性Ag；抗体:根本构造、特点、功能、类别等；补体:概念、组成、功能11血清学诊断根底知识〔2〕抗原、抗体结合原理12血清学诊断根底知识〔3〕

抗原、抗体反响特点特异性阶段性比例性可逆性13血清学诊断根底知识〔4〕

抗原、抗体反响影响要素AgAb电解质温度pH14血清学诊断根本方法：玻片凝集实验试管凝集实验抗球蛋白凝集实验补体结合实验ELISA实验琼脂分散实验免疫荧光实验15二、常见病毒性传染病的实验诊断学根底法定病毒性传染病种类：〔甲类传染病〕乙类传染病：病毒性肝炎、艾滋病、脊髓灰质炎、麻疹、流行性出血质热、狂犬病、流行性乙型脑炎。丙类传染病：流行性感冒、流行性腮腺炎、风疹骊、急性出血性结膜炎。16临床诊断血清学诊断实验室诊断病毒学诊断分子病毒学诊断病毒性疾病确实诊临床诊断＋实验室诊断病毒病的诊断17采样标本血液脑脊液粪便咽分泌物〔咽拭子〕尿疱疹液结膜拭子痰、鼻分泌物尸检：脑、肝、肺、肾、心、胃、淋巴结等器官活检：病变器官18根本方法：鸡胚病毒培育与分别动物细胞细胞阳性的判别尿液中抗原阳性鸡胚绒毛尿囊膜的病变死亡动物发病与死亡培育液PH变化细胞干扰实验CPE鉴定病毒加规范血清后的中和实验含抗原资料的抗原性检测电子显微镜病毒检测病毒学检诊191、查抗体IgG——早期及恢复期；IgM——4周内；IgA——2～8周。根本方法：血凝抑制实验〔例如流感、麻疹等〕间接血凝抑制实验对流电泳琼脂分散实验补体结合实验酶标抗体染色实验ELISA实验免疫萤光实验中和实验等血清学检诊20根本方法：血凝实验间接血凝实验