TNAIA 0263-2023 牛子宫内膜炎诊断与防治技术规程

ICSICS65.020.30ICSCCSA031

T/NAIA团 体 标 准T/NAIA0263-2023牛子宫内膜炎诊断与防治技术规程Technicalregulationsfordiagnosis,preventionandtreatmentofbovineendometritis2023-12-18发布 2023-12-31实施宁夏化学分析测试协会 发布T/NAIA0263-2023T/NAIA0263-2023前言GB/T1.1-20201定起草。本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：宁夏农林科学院动物科学研究所、宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心、宁夏大学、宁夏回族自治区兽药饲料监察所、宁夏回族自治区畜牧工作站。本文件主要起草人：王建东、于有利、郭亚男、梁小军、郭延生、岳康、康晓冬、侯鹏霞、高海慧、张久盘、施安、张坤。牛子宫内膜炎诊断与防治技术规程范围本文件规定了牛子宫内膜炎诊断与防治技术的术语和定义、诊断、预防和治疗。本文件适用于牛场子宫内膜炎的防治，其他牛场参照执行。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14926.42实验动物细菌学检测标本采集GB/T14926.43实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂GB/T39759实验动物术语NY/T3234PCR检测方法术语和定义下列术语和定义适用于本文件。牛子宫内膜炎Bovineendometritis是指母牛分娩时或产后由于致病性病原微生物感染或胎衣不下、难产等产科疾病或环境因素、围产期营养调控水平等因素引起的子宫黏膜炎症。诊断流行病学(阴道感染)和下行性感染(血源性或淋巴源性感染)爛 爛临床症状黏液脓性子宫内膜炎表现为病牛精神沉郁，体温略有升高，食欲减退，阴道检查时可见黏膜充血、病理变化有时可见子宫阜充血（见附录C）。镜下检测时发现初期黏膜毛细血管充血和渗出，黏膜浅层的子腺管上皮细胞，发生变性坏死脱落，可有红细胞和纤维素渗出(假膜形成)（见附录C）直肠检查通过触摸直肠，子宫角增大，子宫壁增厚，子宫呈面团样感觉，子宫收缩反应减弱，子宫体有波动感。慢性子宫内膜炎的子宫壁增厚，弹性减弱，厚薄不均匀。阴道检查道，至少停留30s以上，对侧面、腹面和背面阴道壁至宫颈口进行触诊，退出时对阴道内的性状和粘液量进行检查。B型超声波诊断通过将探头伸入直肠对子宫进行超声探查，对子宫内膜厚度，子宫角直径，卵巢等进行观察，判断子宫内是否有积液及积液量。子宫发生炎症时，宫腔膨胀，轮廓不清并伴有部分回声，存在片状物。实验室诊断样本采集0.1%1～2mL，立即注入备好的无菌瓶内，封盖，标记，冷藏保存。如果24h保存待用。样品解冻时，置于38℃～40℃水浴解冻。分离培养绵羊血琼脂培养基、MHA培养基、麦康凯培养基、伊红美蓝培养基和KF链球菌培养基，实验用水应符合GB/T6682规定（见附录A）。5%37℃恒温箱培养18h色、镜检，根据不同的培养特征、染色形态特征和其生化鉴定来综合判定。PCR鉴别诊断16SrRNAB.1，PCR1465bp，见附录B.2。4.5 结果判定符合流行病学、临床症状和病理变化判断为疑似病例。同时符合实验室诊断确诊病例。预防和治疗预防治疗性清宫恶露的清洗，用0.1%的高锰酸钾溶液；灌注抗生素，如链霉素、林可霉素等；注射缩宫素，通过促进子宫的收缩，来促进子宫恶露的排除。综合预防爛 爛日常加强饲养管理，遵守操作规程，定期消毒，定期监测。避免从病发较高的地区引进母牛，规范接产、做好产后保健、以及合理利用智能设备。治疗西药治疗主要使用抗生素药物，结合药敏试验进行治疗，使用剂量参照说明书。中药治疗可使用生化汤汤煎剂（组方：当归、川穹、自芍、炮姜、蒲公英、金银花、连翘、甘草）等，疗效较好。使用剂量参照说明书。中西药联合用药治疗西药选择硫酸庆大霉素注射液，中药选择生化汤汤煎剂，使用剂量参照说明书。其他疗法子宫给药治疗，激素治疗，微生物制剂治疗等。附录A（资料性）四种培养基的配制A.1伊红美蓝琼脂培养基蛋白胨10.0g，乳糖10.0g，磷酸氢二钾2.0g，琼脂15.0g，伊红0.4g，美蓝0.065g，溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，倾入无菌平皿，4℃保存。A.2麦康凯培养基蛋白胨20.0g，牛胆盐5.0g，氯化钠5.0g，琼脂14.0g，乳糖10.0g，中性红0.03g，加入蒸馏水或去离子水1L，将上述成分混合，加热溶解，校正pH，加入琼脂，煮沸溶化后再加人中性红溶液，摇匀，115℃灭菌20min，待冷至50～55℃时倾注平皿。凝固后置4C冰箱保存，一周内使用。A.3KF链球菌培养基蛋白胨10.0g，酵母粉10.0g，甘油磷酸钠10.0g，氯化钠5.0g，麦芽糖20.0g，乳糖1.0g，叠氮钠0.4g，琼脂13.0g，溴甲酚紫0.015g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压15min，冷却至50～60℃时，加入无菌1%TTC溶液10mL，混匀，倾入无菌平皿，备用。4MHA培养基牛肉粉6.0g，可溶性淀粉1.5g，酸水解酪蛋白17.5g，琼脂17.0g，称取本品加热溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，待冷至50℃，倾入无菌平皿，备用。爛 爛附录B（资料性）PCR1取4.7.2培养物2mL，12000r/min10min，用细菌基因组DNA提取试剂盒对沉淀物进行基的提取。以菌液DNA为模板，采用通用引物（16SrRNA），对细菌16SrRNA基因进行PCR将扩增产物进行测序。引物序列如下：16SF5，-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3，16SR5，-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3，B.250μL反应体系B.2.1：PCR反应体系为50μL体系：模板2μL，27F、1492R各1μL（20μmol/L），2×TaqPCRMix25μL，ddH2O21μL；16SrRNAPCR反应条件为：95℃预变性5min，94℃变性50s，57℃退火1min，72℃延伸90s，30个循环，72℃终延伸10