农业植物病理学

农业植物病理学实验指导书黄云、龚国淑、秦芸主编四川农业大学植保系二00五年十月前言为配合学生学习《园艺植物病虫害防治学》，我们新编写了《园艺植物病虫害防治学实验指导书》。园艺植物病虫害防治学实验指导书是园艺植物病虫害防治学重要组成部份。该实验指导书共有9个实验及课程教学实习的综合性实验。实验1～9的内容为课堂教学内容的实验。以印证，直观感受植物病害的症状和病原的形状特点，为诊断病害打下基础为目的；综合性实验以系统应用所学知识及补充植物病理学差不多实验技能，使学生能较多地把握本学科的系统知识，为本学科的研究工作打下基础为目的。由于编者水平有限，虽尽力而为但也难以尽如人意，不对之处，望批判指正。编者二00五年十月园艺植物病害防治学实验室守则一、实验室须知1．实验前须充分预习实验指导书的内容，明确此次实验的目的要求、做到心中有数。2.实验操作要细心慎重，认真进行观看，独立完成实验作业。3．实验室内保持安静，不能随意走动、高声喧哗，如有咨询题需举手请教。4．使用显微镜及其他贵重仪器时要按要求操作。取、放显微镜时应一手握住镜背，一手托住底座，使显微镜保持直立，防止镜头滑落地面而损坏；玻片标本看后需放回盒内。5.如损坏、丢失实验仪器及其它物品，须酌情赔偿。6．实验完毕应将仪器放回原处，擦净桌面，收拾整齐。离开实验时前注意关闭门、窗、水、电等。二、实验室安全知识在实验室中，经常与毒性强、有腐蚀性、易燃烧和具有爆炸性的化学药品直截了当接触，常使用易碎的玻璃和瓷质的器皿，以及在水、电等高温电热设备的环境下进行操作。因此，必须十分重视实验室安全。1.进入实验室开始工作前，应了解水阀门及电闸所在处。2．使用电器设备(如烘箱、恒温水浴、离心机、电炉等)时，严防触电；绝不可用湿手开、关电器开关。3．使用可燃物，专门是易燃物(乙醇等)时，应专门小心。4.如果不慎倾出了相当量的易燃液体，赶忙关闭室内所有的火源和电加热器；用毛巾或抹布擦拭撒出的液体与清除。5．实验后的废弃物不得倒水槽中，应收集在指定的容器内。6．可能造成环境污染的废液、废物应密封塑料袋中，集中处理。三、实验室急救在实验过程中不慎发生受伤事故：应赶忙采取适当的急救措施。1．受玻璃、刀片割伤及其他机械损害。第一必须检查伤口内有无玻璃或金属等物的碎片，然后用硼酸水洗净，再涂擦碘酒或红汞水，必要时用纱布包扎。若伤口较大或过深而大量出血，应迅速在伤口上部和下部扎紧血管止血，赶忙到医院诊治。2．烫伤一样用浓的(90%～95%)酒精消毒后，涂上红花油，防止感染。3．灼伤强碱（如氢氧化钠，氢氧化钾)、金属钠、钾等其他碱性化学药品触及皮肤而引起灼伤时，要先用大量自来水冲洗，再用5％硼酸溶液或2％乙酸溶液涂洗。强酸、溴、氯、磷或其他酸性化学药品触及皮肤而致灼伤时，应赶忙用大量自来水冲洗，再以5%碳酸氢钠溶液或5%氢氧化铵溶液洗涤。如酚触及皮肤引起灼伤，可用酒精洗涤。4．触电赶忙切断电路。①关闭电源；②用于木棍使导线与被害者分开；③使被害者和地面分离。急救者必须做好防止触电的安全措施，手和脚必须绝缘。园艺植物病害防治学实验指南园艺植物病害防治学实验是园艺植物病虫害防治学课程的重要组成部分，是植物病理学差不多概念、基础理论、差不多原理的深化懂得、实验应证、增强感性认识和衔接补充，是理论与实践相结合的具体体现。对学好农业植物病理学具有重要意义。园艺植物病害防治学实验的目的是以植物病理学和其它关学科知识为基础，追溯引起植物病害发生的缘故及过程，认识不同病原所致病害的症状特点及病原形状特点。把握植物病害实验及研究的差不多技能及方法，注重学生观看、摸索、分析、解决实际咨询题的能力培养，为今后的研究工作打下一定的基础。园艺植物病害防治学实验要求学生在实验之前预习实验指导，明确实验的目的意义，复习实验有关理论知识，了解实验的方法、步骤及重难点；认真、客观、正确地、观看、记录实验内容和显微绘图，整理、归纳，分析实验数据和结果，认真完成实验报告，总结成功的体会及找出不足的缘故，培养科学态度。实验1～重点要求学生认知和把握要紧果树和蔬菜病害的症状和病原物的形状特点、学习显微绘图、制片技术；综合性实验要求学生学习和把握从植物病害的调查、标本的采集、鉴定到灭菌、消毒、培养基制作及病原物的分离和培养等实验技能。该实验指导书对症状和病原形状特点进行了描述，通过提示对重点观看内容与阐明并对实验技能进行了简述。作业与摸索题，要紧是实验内容的课堂作业及复习时的参考。第一部分园艺植物病害防治学实验实验一、园艺植物病害症状一、目的要求本实验通过对园艺植物病害标本的观看，明确植物病害的概念，认识和把握植物病害的症状和病状、病征及其类型；学习植物病害症状描述和记载方法以及症状在病害诊断中的作用。二、材料和用具各种类型的病害标本、挂图、放大镜等。三、内容和方法（一）症状：感病植物的外观病态表现，可分为病状和病征两部分。病状及其类型：病状指植物生病后本身表现出来的不正常状态。分为以下五种类型：1．变色：植物受害后局部或全株失去正常的绿色、但植物细胞未死亡。1.1褪绿和黄化：是由于叶绿素合成受到抑制使叶片颜色变浅或褪绿变黄。如：豌豆黄顶病（黄化）、大白菜病毒病（沿叶脉褪绿）。1.2花叶与斑驳：部分叶绿素受到破坏，叶片黄绿相间或深绿和浅绿相间。如：苹果花叶病、萝卜花叶病、南瓜花叶病等。2．坏死：是寄主被害后其细胞和组织死亡，仍保留着原有的形状。2.1斑点：按照病斑颜色不同，有褐斑、灰斑、黑斑、白斑等。按照病斑形状不同：有圆形、椭圆形、梭形、不规则形，有的受叶脉所限成为角斑，有的沿叶脉进展形成条纹或条斑。如：豇豆褐纹病、黄瓜霜霉病、柑桔溃疡病、葡萄褐斑病、苹果灰斑病等。2.2穿孔：病斑部分组织脱落，形成穿孔。如：核果类穿孔病。2.3枯焦：早期发生斑点，随后迅速扩大或愈合成片，最后使局部或全部组织或器官死亡称为枯焦。如：马铃薯晚疫病和早疫病。2.4猝倒：幼苗茎基部坏死腐烂，缢缩呈线状、倒伏。如：茄科蔬菜幼苗猝倒病。2.5立枯：幼苗的根或茎基部与地面接触处腐烂，全株枯死，病苗不倒伏。如：茄科蔬菜苗期立枯病。3．腐烂：是较大面积植物组织受病原物的破坏分解，细胞崩溃解体。干腐——组织本身含水量较低，腐烂后水份专门快散失。如：油菜菌核干腐病。湿腐——组织本身含水较多，水份不易散发。如：瓜、果腐烂、大白菜的软腐病。4．萎蔫：植物根茎的维管束受病原物侵害后，大量菌体堵塞导管，或是产生毒素，阻碍水份运输，使其枝叶萎蔫下垂。（1）青枯：病株全株或局部迅速萎蔫，而叶片仍保持绿色。如：辣椒青枯病。（2）枯萎与黄萎：病状与青枯相似，但叶片多先从距地面较近处开始色泽变黄，病情进展较慢，不迅速枯死。如：番茄枯萎病和黄萎病。5．畸形：植物受害后，发生增生性病变或抑制性病变，分以下几种类型。5.1卷叶：叶片两侧沿叶脉向上卷曲，叶片较厚，硬而脆，严峻时卷成筒状。如：桃缩叶病。5.2蕨叶：病组织发育不均衡，叶片变成线状或蕨叶状。如：蕃茄蕨叶病。5.3丛枝：受病后茎节缩短，枝条过度分枝，密集丛生。如：枣疯病。5.4瘤瘿：受病组织局部细胞增生，形成不定型的畸形肿大。如：柑桔根结线虫病、十字花科根肿病。病征及其类型病征是病原物在寄主的受病部位表现出来的特点。可分为以下类型：（1）霉状物：在受病部位产生的各种霉层，霉层具有一定的厚度。如：莴苣的霜霉病，葡萄霜霉病。（2）粉状物：在受病部位产生的各种粉状物。如：瓜类的白粉病、梨白粉病等。（3）粒状物：在受病部位产生的各种颗粒状物，形状、大小不定。如：十字花科蔬菜菌核病、瓜类的白粉病（闭囊壳）、苹果腐烂病、炭疽病。（3）锈状物：锈病的病征。如豇豆锈病、枣锈病。（4）脓状物：这是细菌病害独具的专门病征。如：十字花科蔬菜软腐病、菜豆细菌性疫病、柑桔溃疡病。四、作业1.按照所观看的植物病害标本，按下表内容记载观看结果，应包括病状、病征的各种类型，至少记载10种。表病害症状记载表序号病害名称症状类型病害类型发病部位病状病征12345五、摸索题：1．症状在病害诊断上有什么作用？2．学习病害症状的描述。实验二植物病害病原形状观看一、实验目的1.病原真菌认识真菌营养体:菌丝体——无隔菌丝、有隔菌丝的形状；真菌的菌丝体的变态结构——吸器、假根的形状；真菌的菌组织及菌组织体——疏丝组织、拟薄壁组织；菌核、子座、菌索的形状。认识真菌繁育体的类型，真菌各种类型的孢子，学习常规的制片技术。2.病原细菌、病毒、线虫寄生性种子植物形状细菌病害、病毒病害、线虫病害、寄生性种子植物的病原形状。二、材料和用具真菌营养体、繁育体和其它病原物的各种玻片标本和新奇材料，徒手切片常规用具及显微镜。三、内容与方法（一）真菌的营养体其是真菌的要紧营养器官，具有丝状并分枝的管状体，每一根丝状物叫菌丝，多数菌丝团圆在一起称菌丝体，按照菌丝有无隔膜，将菌丝分为无隔菌丝（低等真菌的菌丝）和有隔菌丝（高等真菌的菌丝）。1.菌丝观看无隔菌丝，有隔菌丝玻片标本，注意菌丝形状、有无隔膜、分枝处有无缢缩。2.真菌营养体的变态结构：真菌的营养体为了抗击不良的环境条件和习惯寄生生活而形成的一些专门的结构。2.1吸器：由菌丝特化而成的伸入寄生细胞内吸取营养的结构。有球状、蟹状、根状等。观看小麦白粉病菌吸器玻片、注意在叶片的表皮细胞内，染成红色的蟹状吸器。2.2假根：是由菌丝分化的根状分枝。3.真菌的菌组织：真菌的菌丝体可密集形成菌组织，观看菌核切片玻片标本，菌核外层有2—4层褐色近圆形或多角形，排列紧密的细胞即拟薄壁组织，向内颜色较浅的为疏丝组织，可见菌丝体的长形细胞、组织排列疏松。4.真菌的菌组织体：真菌的菌组织还能够进一步形成菌组织体。4.2子座：观看子座玻片标本：子座是由拟薄壁组织和疏丝组织或由菌丝体与部份寄主组织结合而成的一种垫状结构，子座上形成产孢组织。4.3菌索：肉眼观看竹菌索玻盒标本，镜检菌索玻片标本，可见菌索是由若干菌丝平行排列形成的。（二）真菌的繁育1．真菌的繁育有两种类型：即无性繁育和有性生殖。真菌的无性繁育：是指不通过两个性细胞或性器官的结合而进行繁育产生新个体，无性繁育以营养繁育为特点，形成各种类型的无性孢子，常见的无性孢子有：1.1游动孢子：鞭毛菌亚门的无性孢子。它是产生于孢子囊中的内生孢子，无孢壁、圆形、洋梨形或肾形，具1～2根鞭毛的内生游动孢子。游动孢子借助鞭毛在水中能游动，随后鞭毛收缩产生细胞壁、休止，然后萌发形成新个体。用挑片方法挑取少量十字花科白锈病疱斑内粉沫于载玻片上水滴中进行保湿培养，避光3～4小时后观看十字花科蔬菜的白锈菌（Albugocadida）孢子囊萌发生产的游动孢子在水中的游动情形。观看鞭毛玻片标本，注意有几根鞭毛。1.2孢囊孢子：接合菌亚门的无性孢子。它形成于孢子囊内，有孢壁、无鞭毛、长筒形、圆球形、梨形的内生不能游动的孢子。成熟后孢子囊破裂放出孢囊孢子。观看根霉菌（Rhizopusspp），注意孢囊梗顶端黑色圆形的孢子囊和它破裂后散出的孢囊孢子。孢囊梗2—3根着生在一起，下面有假根。1.3分生孢子：子囊菌亚门和半知菌亚门的无性孢子。它产生于菌丝分化而有形状差异的孢子梗上，具有各种形状的外生孢子。由于孢子成熟时从孢子梗上分生脱落故称分生孢子。一些分生孢子产生在特异的分生孢子盘、分生孢子器、分生孢子座和孢梗束上。观看辣椒炭疸病菌（Colletotrichumspp.），注意观看：分生孢子梗、刚毛和分生孢子形状。1.4厚垣孢子：各类真菌均可形成的无性孢子，它由菌丝体的个别细胞原生质浓缩，壁加厚形成的一种休眠孢子，观看厚垣孢子玻片，注意形状，壁是否加厚。2．真菌的有性生殖：是指通过两个性细胞或性器官的结合而进行生殖的一种形式。有性生殖所产生的孢子称为有性孢子。有性生殖进程以细胞核结合为特点。有性生殖一样包括三个时期：质配（N+N）→[双核期（N+N）]→核配（2N）→减数分裂（N）。有性孢子分以下几种：2.1卵孢子：鞭毛菌亚门的有性孢子，由两个异型配子囊交配接触所形成的厚壁卵孢子。观看油菜白锈病玻片标本，卵孢子在寄主组织内圆形，外层有一圈形似波浪的卵周质。2.2接合孢子：接合菌亚门的有性孢子，是由两个同型配子囊相结合而形成的。观看接合孢子玻片标本，注意观看其形状、颜色、表面有无纹饰。2.3子囊孢子：子囊菌亚门的有性孢子，是由两个异形配子囊（雄器和产囊体）相结合经产囊丝、钩状体，子囊母细胞，发育成子囊。子囊内经核配、减数分裂一样形成8个（2n）内生、单倍体的子囊孢子。子囊孢子产生于子囊内为子囊菌的要紧特点。子囊一样着生在子囊壳、闭囊壳、子囊盘等子囊果内。观看油菜菌核子囊盘（Sclerotiniasclerotiorum）玻片标本，观看子囊盘形状，棍棒状子囊和子囊孢子的数目。2.4担子孢子：担子菌亚门的有性孢子，通常两性器官退化或无明显分化，由不同性别的初生菌丝，孢子萌发产生芽管，或精子与菌丝之间结合形成双核菌丝，担子，经核配，减数分裂，形成4个单倍体的外生担孢子。挑取梨胶锈菌（Gymnosporangiumasiaticum）冬孢子萌发材料观看担子的形状，有无隔膜，小梗着生部位，数目，担孢子形状，颜色和数目。（三）其它病原物3.1植物病原细菌：它可引起植物坏死、腐烂、萎蔫等症状，常在病部显现脓状物，取病组织块镜检，有喷菌现象，即：组织切口处有大量细菌菌体缢出。取水稻白叶枯病叶，观看喷菌现象，观看白叶枯玻盒标本，注意观看菌脓。观看大白菜细菌软腐，注意有无臭味。3.2病毒：病毒是非细胞形状、在寄主细胞内营专性寄生的一种生物体，病毒粒体专门小，在一样光学显微镜下看不到，病毒可引起植物花叶，皱缩，矮化，畸形，病毒病害无病征。但有的病毒病害有内病征——即内含体，观看小麦黄色花叶病内含体玻片标本，在叶片的表皮细胞中或保卫细胞中，细胞核染成紫色，在其旁边粉红色较疏松的颗粒状物即为内含体。观看烟草花叶病病毒的外部形状。3.3线虫：线虫是一种低等动物，属于无脊椎动物中的线虫门，它种类专门多，常见的有粒线虫属，如小麦线虫，破坏子房后成虫瘿，镜检小麦线虫玻片标本，观看虫体形状。根结线虫属，如芹菜根结线虫，危害芹菜根，使根变成根结状或瘤状肿大，剥开结状，观看肿根内雌虫和卵的形状特点。3.4寄生性种子植物：按照对营养的依靠程度不同，将寄生性种子植物分为两大类：一类是全寄生，其叶片退化成鳞片，用吸盘伸入寄主体内，与寄主的导管和筛管相连，完全依靠寄主供给有机营养，无机营养和水分。观看大豆菟丝子玻盒标本。注意观看菟丝子茎与大豆茎连接部位，是否有吸盘形成？另一类是半寄生，这类寄生性种子植物能合成自己所需要的有机营养，只需寄主提供水分和无机盐。观看茶树桑寄生玻盒标本。四、作业1．绘无隔菌丝、有隔菌丝图。2．绘菌核横切面图（拟薄壁组织和疏丝组织）。3．绘根霉（无性时期）形状图。4．绘卵孢子和接合孢子形状图。5．绘辣椒分生孢子盘图和油菜菌核子囊盘图。五、摸索题1.真菌营养体态结构的作用是什么？2.菌丝有、无隔膜在真菌分类上有何意义？3.真菌分哪几个亚门？各亚门有何特点？4.无性孢子和有性孢子有何区别，它们在植物病害循环中分别起什么作用？实验三柑桔、桃和葡萄病害－、目的要求识别和把握柑桔、桃和葡萄要紧病害的症状及其病原菌的形状特点；把握描画病害症状图和病原形状图的技巧；学习徒手切片、撕制和挑制片技术。二、材料、仪器和用具材料：柑桔、桃和葡萄要紧病害的玻盒标本，浸渍标本和病原菌玻片标本；各种柑桔病害的挂图和多媒体课件。仪器和用具：电视显微系统、显微镜，放大镜，载玻片，盖玻片、解剖针、镊子，培养皿，双面刀片、通草，浮载剂等。三、实验操作（一）柑桔溃疡病（citruscanker）1.症状柑桔溃疡病是一种世界性重要病害，为国内外（A2类和B类）植物检疫对象。要紧危害柑桔新梢枝叶和未成熟的果实。1.1叶片症状正、背两面均逐步隆起，成为近圆形、米黄色的病斑。病部表皮破裂，呈海绵状，隆起更明显，木栓化，表面粗糙，灰白色或灰褐色，后病部中心凹陷，并现微细轮纹，周围有黄色或黄绿色的晕环，在紧靠晕环处常有褐色的釉光边缘。一样直径在3～5mm。有时几个病斑互相愈合，形成不规则形的大病斑。后期病斑中央凹陷呈火山口状开裂。1.2枝梢症状以夏梢为重。病斑特点差不多与叶片上相似，灰褐色，木栓化，比叶片上的病斑更为隆起，病斑中心如火山口状开裂，但无黄色晕环。1.3果实症状上病斑也与叶片上相似，但病斑较大，一样直径为4～5mm，最大的可达12mm，木栓化程度比叶部更强。病斑中央火山口状的开裂也更为明显。1.4溃疡病与疮痂病的症状区别：叶片上的症状区别，溃疡病病斑突破叶表，出现于叶的两面，病斑较圆，中央稍凹陷，边缘明显，外围有黄色晕环；疮痂病病斑仅出现于叶的一面，不突破表皮，一面凹陷，另一面凸起，呈漏斗状或牛角状，病斑较不规则，外围无黄色晕环，潮湿条件下，牛角状顶端有粉红色小点状物（分生孢子盘和分生孢子）。溃疡病病叶外形一样正常，而疮痂病病叶常因病斑凹陷使叶片畸形。提示:注意观看溃疡病叶部症状的形状、大小、是否贯穿叶正背两面、是否凹陷、有无微细轮纹、黄色晕环、潮湿条件下有无粉红色小点状物、叶是否畸形等特点，并与疮痂病作比较。2.病原病原菌为野油菜黄单胞菌柑桔致病变种(Xanthomonascampestrispv.citri)。菌体短杆状，两端圆，大小为1.5～2.0μm×0.55～0.7μm，极生单鞭毛，有荚膜，无芽孢。（二）柑桔黄龙病(CitrusHuanglongbing)1.症状柑桔黄龙病又称黄梢病，我国台湾省称为立枯病。为国内（B类）植物检疫对象。其要紧为害梢、叶和果，表现为全株系统性症状。病树初期典型症状是在浓绿的树冠中发生1～2条或多条黄梢。病梢叶片黄化分为平均黄化型和斑驳黄化型两类。1.1春梢春梢症状的特点：叶片黄化程度较轻且不平均，形成斑驳。1.2夏梢和秋梢两梢表现的症状差不多相同。病梢停止转绿。叶脉往往先变黄，随之叶肉由淡黄绿色变成黄色（黄化）。中、下部叶片差不多转绿，但也会褪绿变黄，显现黄绿相间的斑驳。1.3枝梢的中后期症状当年发病的黄梢，一样到秋末叶片连续脱落。翌春病梢萌芽多而早，长出的新梢短而纤细，叶片小而窄，新梢叶片老熟时，叶肉停止转绿而变黄，但叶脉及其周围组织仍呈绿色，与缺锌的症状相似，称为花叶。病叶较健叶厚，有革质感，在枝上着生较直立，有些黄叶的叶脉木栓化肿大，开裂，叶端稍向叶背弯曲。1.4病果果小，畸形，果脐常偏歪在一边，着色较淡或不平均。有些品种的果蒂邻近变橙红色，而其余部分仍为青绿色“红鼻果”。提示:注意观看叶片变色的黄化和斑驳的特点，注意与缺锌症状的区别；注意“红鼻果”的症状特点。2.病原病原菌为一种原核生物，过去称为、类立克次氏体和类细菌，按新的分类系统，该病原菌为薄壁菌门韧杆菌属亚洲韧皮杆菌Liberobacterasiaticus。柑桔黄龙病菌菌体多数呈圆形、椭圆形或线形，少数呈不规则形，大小50～600nm×170～1600nm。菌体的外部界限是膜质结构，厚为17～33nm，平均25nm，由三层膜组成。（三）柑桔炭疽病(Citrusanthracnose)1.症状该病要紧危害叶、花和果。1.1叶片症状有两种症状类型。叶斑型(慢性型)病斑多显现在成长叶片或老叶的近叶缘、叶尖处，病斑呈半圆型或近圆形，稍凹陷，中央灰白色，边缘褐色或深褐色。天气潮湿时，病斑上显现许多肉红色黏质小点；在干燥条件下则为黑色小粒点，散生或呈轮纹状排列(分生孢子盘)。②叶枯型(急性型)症状常从叶尖开始，黄色或黄褐色，病健分界不明显，似云纹状。病部组织枯死后，常呈“V”字形，上生肉红色小点或黑色小点，病叶脱落。1.2枝梢症状症状有两种。一种由梢顶向下枯死，病斑多发生在受冻害后的秋梢上，病部褐色，后灰白色，枯死，其上生许多小黑点。另一种是发生在枝梢中部，病部淡褐色，椭圆形，后扩展呈梭形，稍凹陷。1.3幼果症状病部暗绿色油渍状斑点，后扩至全果，在潮湿条件下，显现白色霉层及淡红色小粒点。症状表现有干疤、泪痕和腐烂三种类型。干疤型多在果腰部，圆形或近圆形，黄褐至深褐色，病部果皮革质或硬化。泪痕型症状为果皮外表红褐色或暗红褐色条点状微凸的干疤，似泪痕。腐烂型症状多在果蒂或其邻近，初为淡褐色、水渍状，后变褐腐烂。2.病原为盘长孢状刺盘孢(ColletotrichumgloeosporioidesPen.)，属半知菌亚门。分生孢子盘埋生于寄主表皮下，后突破表皮外露。有刚毛，深褐色，直或稍弯曲，具1～2个分隔，长40μm～160μm。分生孢子梗呈栅状排列，圆柱形，无色单胞，顶端尖，大小为9.8～29.4μm×2.8～4.9μm。分生孢子椭圆形至短圆筒形，稍弯曲或一端稍小，无色，单胞，大小为8.4～16.8μm×3.5～4.2μm，内含1～2个油球。提示:学习徒手切片方法切片炭疽病叶部病斑。切片时注意臂、腕、手指各部位的和谐，刀片从外向内快速移动；制片时，注意浮载剂（水或乳酚油）的多少、盖盖破片的方法、幸免过多产动气泡而阻碍观看；显微镜检玻片标本时，注意观看分生孢子盘是否于角质层下、分生孢子盘、分生孢子梗、分生孢子的形状及大小，分生孢子盘中有无刚毛、分生孢子梗有无隔膜、分生孢子内有无油球。（四）柑桔树脂病（Cirtusmelanose）病害因发生部位不同，有多种名称：发生在树干上的称树脂病或流胶病；发生在叶片和幼果上称为砂皮病或黑点病；发生在果实上称为褐色蒂腐病。1.症状病菌可危害树干、新梢、嫩叶和果实等，症状复杂。1.1树干症状有两种类型：(1)流胶：病斑多发生在主干分叉处和其下的主干，以及易受日灼伤和冻害的部位。病部皮层组织松软，呈灰褐色，渗出黄褐色黏液。最后病部逐步干枯下陷，病斑周缘产生愈合组织并隆起，中部已死亡的皮层开裂剥离，露出木质部。(2)干枯：病部皮层红褐色，干枯微下陷，微有裂缝，但皮层不赶忙剥落，在病健交界处有一条明显的隆起线。在适温、高湿时，干枯型可转化为流胶型。木质部病健交界处有一条黄褐色的痕带，导管内有褐色胶体和菌丝。病树皮上形成黑色小点，潮湿时涌出淡黄色卷须状黏液。1.2新梢和嫩叶症状新梢和嫩叶病部表面产生黄褐色坚硬胶质小点。小点散生或密集成片，表面粗糙，故称为“砂皮”或“黑点”。病菌只限于表皮及其以下数层细胞。在枯死枝条上产生大量分生孢子器。1.3．果实症状受害幼果表现“砂皮”或“黑点”症状。初为围绕蒂部显现水渍状褐色病斑，果皮较坚强，病斑向脐部进展，边缘波浪状，最后可使全果腐烂。当果皮病变扩大至果面l／3～1／2时，果心已全部腐烂，故有“穿心烂”之称。后期有时在病果表面产生白色菌丝体、黑色点状物和淡黄色丝状物。提示:柑桔树脂病菌因侵染柑桔树体不同部位而表现出不同的症状特点，故有树干上的树脂病或流胶病；叶片和幼果上称为砂皮病或黑点病；果实上称为褐色蒂腐病等不同的称谓。观看树干症状时，注意观看病部是否深入到木质部、病健交界处有无褐色菌痕带；病树皮上是否黑色小点和淡黄色卷须状黏液。观看叶、梢、果部“砂皮”或“黑点”的症状特点。注意观看果实蒂腐的发生部位、感知果皮的坚强度、病斑边缘是否具波浪状；剖果是否有“穿心烂”的特点；病果表是否有白色菌丝体。2.病原物病原物有性态为柑橘间座壳[Diaporthecitri(Faw.)Wolf]，子囊菌亚门间座壳属；无性态为柑橘拟茎点霉(PhomopsiscirriFawcett)，半知菌亚门拟茎点霉属。有性态子囊壳球形，埋藏在树皮下的子座组织中，喙部细长，突出于子座外；子囊无色无柄，长棍棒状，顶部较厚；子囊孢子无色，双胞，隔膜处缢缩，长椭圆形或纺缍形。无性态分生孢子器在表皮下形成，近球形或不规则形，内产生两种类型分生孢子，一种为卵形，另一种为丝状或钩丝状，均为单胞，无色。提示:注意观看子囊壳的形状、有无长喙。注意观看分生孢子器内的两种类型分生孢子形状。（五）柑桔脂点黄斑病(Greasyyellowspotofcitrus)1.症状脂点黄斑病要紧危害叶片。叶片上的症状有脂点黄斑型、褐色小圆星型及脂点黄斑与褐色小圆星混合型三种，而以脂点黄斑型为主。1.1脂点黄斑型叶片背面暗褐色至黑褐色的脂斑。与脂斑相对应的叶片正面，形成不规则形的黄色病斑，边缘不明显，中部有淡褐色至黑褐色的疱疹状小粒点。1.2褐色小圆星型病斑直径1～3mm，边缘紫褐色，稍隆起，中央灰白色，少数病斑上长有黑色小粒点，为病菌的子囊壳。脂点黄斑型病斑在后期会有少数转变为褐色小圆星型。这种症状常见于秋梢的叶片上。1.3混合型为脂点黄斑和褐色小圆星混合型。提示:脂点黄斑病因危害稍期而表现出两种完全相异的症状，以致过去曾认为是两种病害。注意观看脂点黄斑型叶正面的黄斑的特点、黄斑相对叶背面黑褐色的疱疹的特点，并注意和柑桔黄蜘蛛为害状的区别。2.病原有性态柑橘球腔菌(MycosphaerellacitriWhiteside)。无性态为柑橘灰色疣丝孢［Stenellacitri-grisea(Fisher)Sivanesan］。有性态子囊壳产生于崩溃的病叶两面，丛生，近球形，黑褐色，有拟孔口，子囊壳直径65～85.8μm，高80.2μm～96.2μm。子囊倒棍棒形或长卵形，成束着生在子囊壳基部，大小31.2～33.8μm×4.7～6.0μm。子囊内含8个子囊孢子，排列成二行。子囊孢子无色，长卵形，一端钝圆，一端稍尖，双胞，大小10.4～15.6μm×2.6～3.4μm。无性态分生孢子梗直立，近圆柱形，0～4个分隔，初无色，后变为淡黄褐色，而顶部色浅或无色，梗长13～20.8μm，梗粗2.6～3.9μm，梗壁偶然有微疣。分生孢子多数圆柱形，少数倒棍棒形，直或弯曲，无色至淡黄褐色，表面密生微疣，多数单生，少数为2～3个链生，孢子基部有明显的脐；分生孢子大小13～52μm×2.3～2.9μm，0～8个分隔。（六）柑橘青霉病(Citrusbluemold)和柑橘绿霉病(Citruscommongreenmold)1.症状柑橘青霉病和柑橘绿霉病两病症状相似。受害果实上产生水渍状、淡褐色、近圆形病斑，病部组织变软腐烂，用手指按压病部时，果皮易破裂。病部生白色霉状物，后转为青色或绿色霉层(分生孢子梗和分生孢子)，周围有一圈白色菌丝环。两病症状比较见下表:提示:注意两种病害霉层的颜色、白色菌丝环带的宽窄、边缘、气味和粘着性的差异。2.病原物柑橘青霉病和柑橘绿霉病的病原物分别为意大利青霉(PenicilliumalicumWehmer)和指状青霉(P.digitatumSacc)，半知菌亚门青霉属。病原形状比较见下表:

表1柑橘青霉病和柑橘绿霉病两病症状比较项目青霉病绿霉病分生孢子丛白色菌丝环软腐边缘果腐速度气味粘着性青色，在果皮外表及果心间隙中形成，发生较快外观粉状较窄，约1～3mm宽边缘明显，较整齐较慢发霉气味果实腐烂后与包果纸不粘连绿色，仅在果皮外表形成，发生较慢略带粘性，微有绉褶较宽，约8～15mm边缘不明显，不整齐较快芳香气味果实腐烂后与包果纸粘连在一起表2意大利青霉与指状青霉形状比较分生孢子梗(μm)小梗(μm)分生孢子(μm)意大利青霉指状青霉150～300×4～550～160×4～511.5～13.8×3～416.1～23×4～54.9×2.76.8×4.2提示:学习挑制片的方法。用解剖针挑取少许柑桔青霉病和柑桔绿霉病症状部的霉层制片观看病原物。注意观看两种病原菌分生孢子梗先端扫帚状分枝的多少、形状特点；小梗的形状及分生孢子形状、大小、是否串生等特点。（七）桃缩叶病(PeachLeafCurl)1.症状桃缩叶病要紧为害桃树幼嫩部分，以嫩叶片为主，也可为害花、嫩梢和幼果。1.1叶部症状叶片变厚变脆，凹凸不平，卷曲，红褐色，叶表面生出一层灰白色粉状物(子囊层)。1.2枝梢症状受害后呈灰绿色或黄色，病部肥肿，枝条节间短，其上叶片丛生。1.3花症状受害其花瓣肥大变长。1.4幼果症状受害呈畸形，果表龟裂。提示:注意观看叶部畸形的特点，注意与蚜虫为害状的区别。2.病原物病原有性态为畸形外囊菌[Taphrinadeformans(Berk)Tul.]，属子囊菌亚门。子囊生于叶片角质层下，无包被，栅状排列。子囊圆筒形、顶部平截，无色，大小为18～42μm×5～12μm内含4～8个子囊孢子。子囊孢子椭圆形，单胞，无色，5～7μm×4～5μm,可在子囊内芽殖和产生许多芽孢。芽孢子卵圆形，分为厚壁和薄壁两种。提示:注意该病原菌子囊外无包被，子囊裸生；注意观看子囊的形状特点及足胞；子囊内子囊孢子的个数是否为8个，什么原因？（八）桃穿孔病（Peachshothole）1.症状要紧为害叶片，也能侵害果实和枝条。1.1.细菌性穿孔病叶部症状圆形或不规则形病斑，紫褐色至黑褐色，大小约2mm左右。病斑周围呈水渍状并有黄绿色晕环，病健组织交界处发生一圈裂纹，脱落后形成穿孔，穿孔边缘破裂，不整齐。2.霉斑穿孔病褐色，圆形或不规则形，直径2mm～6mm，潮湿时，病斑背面长出污褐色霉状物。3.褐斑穿孔病圆形病斑，直径约1mm～4mm，边缘清晰并略显环纹。病斑上长出灰褐色霉状物，中部干枯脱落，形成边缘整齐的穿孔。提示:穿孔病在核果类果树樱桃、李、杏上均有发生。注意观看穿孔边缘是否破裂、整齐，病斑上有无霉层及颜色、及病斑周围是否呈水渍状和有黄绿色晕环；注意区别细菌性穿孔和真菌性穿孔的差异。2.病原物2.1细菌性穿孔病病原为甘蓝黑腐黄单胞杆菌桃李致病变种[Xanthomonascampestrispv.Pruni(Smith)Dye.]，属薄壁菌门黄单胞菌属。菌体短杆状，大小1.4～1.8μm×0.2～0.8μm，单极生1～6根鞭毛，有荚膜，无芽孢。2.2霉斑穿孔病病原为嗜果刀孢菌[Clasterosporiumcarpophilum(Lév.)Aderh.]，属半知菌亚门。分生孢子梗有分隔，暗色。分生孢子梭形椭圆形或纺缍形，有3～6个分隔，稍弯曲，淡褐色，大小16～28.5μm×9～10.5μm。2.3褐斑穿孔病病原为核果假尾孢菌[Pseudocercosporacircumscissa(Sacc.)Liu&Guo.]分生孢子梗10～16根呈束生长，橄榄色，不分枝，直立或弯曲，0～2分隔，大小12～32μm×3～4μm。分生孢子梗着生于子座上。分生孢子细长，鞭状，倒棍棒状或圆柱形，棕褐色；直立或微弯，3～12个分隔，大小24～120μm×3～4μm。（九）葡萄霜霉病（Grapedownymildew）1.症状霜霉病为害葡萄所有绿色器官，以叶片受害最重。1.1叶部症状病斑黄色至红褐色、坏死，多角形，多数病斑相互融合成大斑。后期病叶干枯脱落。1.2新梢、卷须、穗轴、叶柄症状病斑微凹陷、黄色至褐色病斑，病梢生长停滞，扭曲，甚至枯死。1.3果梗及果实症状果梗黑褐色坏死，果粒病部灰色变硬下陷。潮湿时病部产生白色霜状霉层(孢囊梗及孢子囊)为其典型特点。提示:白色霜状霉层是霜霉病的－般特点，但并非霜霉病都呈白色霜状霉层。大多数霜状霉层生于叶背、却或多或少的受叶脉限制而呈多角形。2.病原物葡萄生单轴霉［Plasmoparaviticola(Berk．etCurtis)Berl.etdeToni］属鞭毛菌亚门。孢囊梗自气孔伸出，4～6根成束，树枝状，无色，单轴分枝3～6次，一样2～3次，分枝处近直角，长400～780μm，宽6～10μm。分枝末端有2～3个短梗，圆锥形，末端钝。孢子囊着生在短梗上，无色，单胞，卵形或椭圆形，顶端有乳头状突起。大小12.6～25.2μm×11.2～16.8μm，游动孢子肾形，大小7.5～9.0μm×6～7μm，在扁平的一侧生有2根鞭毛。卵孢子褐色，球形，直径30～35μm，别处包着皱缩的藏卵器壁。翌年春季，卵孢子萌发产生芽管，在芽管先端形成芽孢囊，大小28～36μm，萌发后产生30～56个游动孢子。提示:学习撕制片法制片观看病原，其作法为用镊子夹住病斑边缘，撕下病斑后取最薄部位（不带叶肉组织）制片。孢囊梗的分枝处的特点（二叉分枝、假二叉分枝、是否有一主轴、分枝是锐角或近直角等）及顶端形状是分属的重要依据。注意观看孢囊梗丛何处伸出，是否有一主轴；分枝处是否为近直角；短梗（着生孢子囊处）形状特点；观看孢子囊的形状及乳突。（十）葡萄黑痘病(Grapeanthracnose)1.症状黑痘病要紧为害葡萄果实、果梗、叶片、叶柄、新梢和卷须等绿色幼嫩的部分。1.1叶部症状病斑圆形或不规则形，中央坏死呈灰白色，稍凹陷，边缘暗褐色或紫色，直径1～4mm。中央破裂穿孔，周缘紫褐色晕圈。1.2叶脉症状病斑梭形，凹陷，灰色或灰褐色，边缘暗褐色，组织干枯后，常使叶片扭曲，皱缩。1.3果实症状病斑圆形褐色，直径2～5mm，中央凹陷，呈灰白色，外部仍为深褐色，周缘紫褐色，似“鸟眼状”。潮湿时，病斑上显现乳白色的粘质物（分生孢子团）。提示:注意观看果实似“鸟眼状”病斑，撕开病斑观看病部是否伸入果肉；注意观看由于叶脉受害、穿孔致使叶片扭曲、皱缩的特点。2.病原物葡萄痂圆孢(SphacelomaampelinumdeBary)属半知菌亚门。有性时期为痂囊腔菌[Elsinoeampelina(deBary)Shear]属子囊菌亚门，我国尚未发觉。分生孢子盘半埋生于寄主组织内，直径60μm；分生孢子梗短小，无色，单胞，大小6.6～13.2μm×1.3～2.0μm；分生孢子椭圆形或卵形，无色，单胞，稍弯曲，两端各有一个油球，大小4.8～11.6μm×2.2～3.7μm。（＋一）葡萄褐斑病(Grapebrownspot)1.症状褐斑病仅为害叶片。1.1大褐斑病病斑定形后，直径3～10mm的称大褐斑病；直径2～3mm的称小褐斑病。大褐斑病在美洲系统葡萄上，病斑不规则或近圆形，直径约5～9mm，边缘红褐色，中部黑褐色，外围黄绿色，背面暗褐色，并生有黑褐色霉层。1.2小褐斑病病斑圆形，深褐色，中部颜色稍浅，后期背面长出黑色霉状物。2.病原物2.1．大褐斑病葡萄褐柱丝霉［Phaeoisariopsisvitis(Lev.)Sawada］属半知菌亚门。分生孢梗束及分生孢子。分生孢子梗细长，常10～30根集结成束状，单根分生孢子梗大小92～225μm×2.8～4.0μm，有隔膜1～5个，暗褐色，顶端有着生孢子的疤痕1～2个。分生孢子棍棒状，暗褐色，稍弯曲，基部稍膨大，上部渐狭小，有隔膜7～11个，大小23～84μm×7～l0μm。2.2．小褐斑病座束梗尾孢［Cercosporaroesleri(Catt.)Sacc.］属半知菌亚门。分生孢子梗较短，每丛仅数根，松散不集成束状，淡褐色，大小158～221μm×4.0μm；分生孢子长柱形，直或稍弯曲，有3～5个分隔，棕褐色，大小26～78μm×6～9μm。（＋二）其它病害柑桔流胶病、根结线虫病、根线虫病、裂皮病、黑腐病、桃褐腐病、等病害的症状及病原观看。四、实验作业1.绘柑桔炭疽病病原形状图。2.绘桃缩叶病的病原形状图。3.绘葡萄霜霉病的病原形状图。4.绘葡萄褐斑病的病原形状图。5.比较柑桔溃疡病和疮痂病叶部症状特点。实验四、苹、梨和枣病害－、目的要求识别和把握苹、梨和枣要紧病害的症状及其病原菌的形状特点；学习描画病害症状图和病原形状图的技巧；学习徒手切片和挑制片技术。二、材料、仪器和用具材料：苹、梨和枣要紧病害的玻盒标本，浸渍标本、新奇标本和病原菌玻片标本；各种苹果病害的挂图和多媒体课件。仪器和用具：电视显微系统、显微镜，放大镜，载玻片，盖玻片、解剖针、镊子，培养皿，双面刀片、通草，浮载剂等。三、实验操作（一）苹果腐烂病（Applecanker）1.症状症状表现为溃疡型和枝枯型两种，以溃疡型为主。溃疡型病部红褐色，略隆起，水渍状，组织松软，用手指按压即下陷。后皮层腐烂，流出黄褐色汁液，湿腐状，有酒糟味。病斑圆形或椭圆形，边缘不清晰；后期病部失水干缩，黑褐色下陷，生黑色小粒点（外子座及分生孢子器）。天气潮湿，病部产生橘红色卷须状物(分生孢子角)，生黑色粒点（内子座及子囊壳）。枝枯型病部形状不规则，红褐色或暗褐色，有明显的赤褐色轮纹，具黑色小粒点。提示:苹果树腐烂病与干腐病的症状有相似之处，注意该病在发生部位（主干和主枝）、流出黄褐色汁液的多少、酒糟味的浓淡、黑色小点的大小和疏密、潮湿时有无桔黄色卷须状物等上两病的区别。2.病原物病菌有性态为苹果黑腐皮壳（ValsamaliMiyabeetYamada），属子囊菌亚门。无性态为壳囊孢（Cytosporasp.），属半知菌亚门。外子座黑色圆锥形，子座内含1个扁瓶形、几个相通的腔室分生孢子器，直径为480μm～1600μm。分生孢子梗无色、长10.5～20.5μm；分生孢子无色，单胞，香蕉形或腊肠形，两端圆，微弯曲，4.0～10.0μm×0.8～1.7μm；具橘红色卷须状孢子角。内子座在外子座的下面或旁边形成，内含3～14个子囊壳。子囊壳球形或烧瓶形，直径为320～540μm，具有长颈、颈长540μm～860μm，顶端有孔口。子囊长椭圆形或纺锤形，一端较宽，顶端钝圆或较平，28～35μm×7.0～10.5μm，内含8个子囊孢子，子囊孢子排列成两行或不规则，无色，单胞，腊肠形或香蕉形7.5～10.0μm×1.5～1.8μm。提示:注意观看该病原菌的分生孢子器和子囊壳均分别生于外子座和内子座上的特点、分生孢子器为多腔室及从器口涌出桔黄色卷须状物的特点。（二）苹果褐斑病（MarssoniaLeafBrownSpot）1.症状褐斑病要紧危害叶片，也能危害叶柄和果实。叶部症状病斑有三种类型：1.1同心轮纹型病斑近圆形，直径为1cm～2cm，中心褐色，四周黄色，周围有绿色晕，病斑中部生排列成同心轮纹的黑色小粒点。1.2针芒型病斑褐色，不规则，上生由黑色小点(分生孢子盘)和黑色菌索组成呈针芒放射状扩展。1.3混合型病斑专门大，近圆形或不规则形，直径约0.5cm～3cm，暗褐色，黑色小点在病斑中部呈同心轮纹状排列，病斑外围呈放射状排列。果实症状病斑圆形或不整形，直径约6mm～12mm。病斑褐色，凹陷，表面有黑色小粒点。提示:注意观看该病叶部病班周围具绿色边缘及黑色小点（分生孢子盘）与线（菌索）相连呈放射状的特点；注意症状的三种类型特点、注意与苹果花叶病（病毒病害）的花叶的区别。2.病原物有性态为苹果双壳菌［DiplocarponmaliHaradaetSawamura］，属子囊菌亚门。无性态为苹果盘二孢[Marssoninacoronaria(Ell.etDavis.)Davis]，属半知菌亚门。无性态菌索，多分枝，穿行于表皮下，交叉点上着生分生孢子盘。分生孢子盘初埋生于角质层下，成熟后外露，直径为100μm～200μm。分生孢子梗呈栅状排列，无色、单胞、棍棒状，大小15～20μm×3～4μm。孢子梗顶生分生孢子，分生孢子无色，双胞，中间缢缩，上大且圆，下小而尖，呈倒葫芦状。大小为13.2～18μm×7.2～8.4μm，内含2～4个油球，偶有单胞的分生孢子产生。有性态子囊盘肉质，钵状，大小105～200μm×80～125μm。子实层由子囊和侧丝组成，子囊阔棍棒状，有囊盖，大小40～49μm×12～14μm。子囊内含8个子囊孢子。子囊孢子香蕉形，一端稍弯曲，成熟后有隔膜，大小24～30μm×5～6μm。提示:病原菌以无性态常见。其种名苹果盘二孢告之我们病原菌的产孢结构为分生孢子盘、分生孢子为双胞；注意观看双胞的特点、有无油球。（三）苹果白粉病（ApplePowderyMildew）1.症状白粉病要紧危害新梢、嫩叶，也危害花器、芽、幼果等。新梢症状节间缩短、叶细长、叶缘上卷、质脆、被一层白粉覆盖，后期变为黄褐色、重者梢枯死。叶片症状病叶生褪绿斑，生长受阻而皱缩不平；叶片窄小，纵卷、变脆直至枯死脱落。花瓣症状花淡黄或绿色，变窄，扭曲，干枯脱落。芽症状芽瘦小，灰褐色至暗褐色，芽鳞松散，张口呈刷状。果实症状在果顶或梗洼等处产生白粉斑，稍后形成网状锈斑，硬块，易造成龟裂。受害部产生白色粉状物（病菌的菌丝和分生孢子）为该病最明显的特点。一些地区，在叶背主脉、支脉、叶柄上生成堆的黑色小点（闭囊壳）。提示:症状部位以产生白色粉状覆于表面及后期生黑色小点（闭囊壳，一些地点产生）为其特点；注意观看新梢发病后节间缩短、叶细长、上卷的特点。2.病原物病原为白叉丝单囊壳[Podosphaeraleucotricha(Ell.etEv.)Salm],属子囊菌亚门。无性态分生孢子梗直截了当在菌丝上产生，短棍棒状。分生孢子串生，向基性成熟，无色，单胞，椭圆形，16.4～26.4×14.4～19.2μm。有性态闭囊壳近球形，初无色，后变淡黄色，成熟后褐色至黑褐色，直径75～100×70～100μm。附属丝两种，一种生于闭囊壳顶部，3～10枝，基部褐色，端部色淡，透亮，分隔，顶端有二叉状分枝，直立，长度为闭囊壳3～7倍；另一种生于闭囊壳基部，黄褐色，较粗，弯曲，有的也分叉，长度一样小于闭囊壳直径。闭囊壳内生1个子囊，子囊椭圆形或球形，50.4～55.0μm×45.5～51.5μm，内含8个子囊孢子。子囊孢子无色，单胞，椭圆形，16.8～22.8μm×12～13.2μm。提示:挑取黑色小点制片，注意观看闭囊壳两种附属丝的形状；然而用解剖针于低倍镜下轻压盖玻片，让闭囊壳破裂、子囊释出；注意观看闭囊壳内子囊的个数及子囊内子囊孢子的个数。（四）苹果霉心病（AppleMouldCoreandCoreRot）1.症状该病要紧危害果实。果实症状生长期田间外部症状不明显，病果偶见果面发黄，果形不正，或者着色较早。发病严峻的果实，明显呈畸形。贮藏期，果心霉烂进展更快，病果果面可见水渍状、褐色不规则形的湿腐斑块，斑块可连成片，以致全果腐烂。果心症状剖开病果，心室变褐，逐步向外扩展，具粉红色、灰绿色、黑褐色和白色霉状物。提示:病果外观无明显症状。剖果后可见心室及果肉（如已扩展时）有粉红色、灰绿色、黑褐色和白色霉状物（依病原种类不同而异，但一样仅有一优势种）。2.病原物苹果霉心病是由多种真菌侵染所致，常见的有链格孢菌[Alternariaalternata(Fr.)Keissl]、粉红单端孢菌[Trichotheciumroseum(Bull)Link]串球镰刀菌（FusariummoniliformeSheld）等3种。此外，还有青霉菌(Penicilliumsp.)，拟青霉菌(Paecilomycessp.)、节孢状镰刀菌(F.arthrosporioidesSherb.)等20余属的真菌。2.1T.roseum分生孢子梗直立，有少数横隔或无隔，不分枝，梗端稍大。分生孢子自梗端单个地以向基式连续产生一串孢子。孢子形成后，靠着生痕彼此连接而集合在孢子梗的顶端，形成外观圆形至矩形的孢子头。分生孢子梨形或倒卵形，两个孢室，上孢室较下孢室为大，下孢室基端明显收缩变细，着生痕在基端或其一侧，透亮或粉红色，12～18μm×8～10μm。2.2A..alternata分生孢子梗直立，分枝或不分枝，淡橄榄色至绿褐色，有屈曲，顶端常膨大而具多个孢子痕，大小5～12.5μm×3～6μm，分生孢子组成链，有的长链由10个孢子组成。孢子有喙或无喙，形状变化极大，表面平滑或有瘤，浓橄榄色至深橄榄色，有横隔膜1～9个，纵隔膜0～6个，大小7～70μm×6～22.5μm。2.3F.moniliforme子座黄色、褐色或紫色，产生的菌丝为鲜黄色至浅粉红色。分生孢子串珠状，单胞，棱形至卵圆，大小4～30μm×1.5～5μm。大分生孢子生于分生孢子座或分生孢子团内，淡红色至红褐色，孢子细长、稍弯、具3～5个隔膜，大小为20～70μm×2～4.5μm。（五）苹果炭疽病（Applebitterrot）、轮纹病（Appleringrot）和褐腐病（Applebrown）1.症状1.1轮纹病苹果轮纹病又称粗皮病、轮纹褐腐病。果实症状以皮孔为中心，水渍状褐色腐烂斑点，呈同心轮纹状向四周扩展，病斑不凹陷，烂不变形，病组织呈软腐状，病斑的中部产生黑色小粒点，散生，不突破表皮。1.2炭疽病果实症状病斑圆形，直径1～2cm，中心生黑色小粒点(分生孢子盘)，常呈同心轮纹状排列。潮湿时，溢出绯红色粘质团(分生孢子团)。烂部呈圆锥状干腐。1.3褐腐病又名菌核病。果实症状病斑中心部逐步形成同心轮纹状排列的灰白色、绒球状菌丝团，这是褐腐病的典型症。病果干缩呈黑色僵果。提示:上述三种苹果果实病害的共同特点是出现轮纹的共同特点，但组成轮纹的病征或病状不同。轮纹病的轮纹由深浅褐色的症状组成；炭疽病的轮纹由病征黑色小点（分生孢子盘）或肉红色粘质物（分生孢子和粘质物）组成；褐腐病的轮纹是由病征灰白色、绒球状菌丝团组成。此外，它们在病斑大小、是否凹陷等方面也不同。2.病原物2.1病原轮纹病有性态为贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型［Botryosphaeriaberengerianaf.sp.piricola(Nose)koganezawaetSakuma］属子囊菌亚门；无性态为簇小穴壳菌(Dothiorellagregaria)，属半知菌亚门。无性态分生孢子器扁圆形或椭圆形，直径383～425μm；分生孢子无色、单胞，纺锤形或椭圆形，大小24～30μm×6～8μm。有性态子囊壳球形或扁球形，黑褐色，大小170～310μm×230～310μm；子囊无色，棍棒状，顶端膨大，壁厚透亮，基部较窄，大小110～130μm×17.5～22.0μm；子囊孢子无色、单胞，椭圆形，大小24.5～26μm×9.5～10.5μm。2.2炭疽病有性态为围小丛壳［Glomerellacingulata(Stonem)SchretSpauld.］属子囊菌亚门；无性态为盘长孢状刺盘孢［Colletotrichumgloeosporioides(Penz.)PenzetSate.］，属半知菌亚门。有性态少见。无性态分生孢子盘埋生于表皮下，随着分生孢子梗生长、产孢而突破表皮，其上专门少有刚毛。分生孢子梗无色单胞，大小15～20μm×1.5～2.0μm。分生孢子无色、单胞，长圆柱形或长椭圆形。大小10～35μm×3.5～7.0μm。2.3褐腐病褐腐病病原是仁果链核盘菌［Moniliniafructigena(Aderh．Etruhl.)Honey］属子囊菌亚门；无性时期为仁果丛梗孢(MoniliafructigenaPers.)，属半知菌亚门。菌丝集结灰白色菌丝团，其上长分生孢子梗及孢子。分生孢子梗丝状，无色，单胞，其上串生分生孢子。分生孢子椭圆形，无色，单胞，大小1l～31μm×8.5～17μm。后期，病果内生成菌核，黑色，不规则，大小1mm左右，子囊盘漏斗状，外部平滑，灰褐色，直径3～5mm。子囊无色，长筒形，内生8个子囊孢子。子囊孢子无色，单胞，卵圆形，大小10～15μm×5～8μm。子囊间有侧丝，棍棒状。（六）苹果其它病害苹果赤衣病、泡性溃疡病、花叶病等等。（七）梨黑星病（PearScab）1.症状梨黑星病能侵染梨树所有的绿色幼嫩组织，要紧侵害叶片和果实，也能够危害花序、鳞芽、新梢、叶柄、果柄等部位。叶片症状..叶背主、枝脉之间出现圆形、椭圆形或不整形的淡黄色斑，病斑沿主脉边缘长出黑色的霉层，且有沿叶脉走向的特点。许多病斑互相结合，整个叶片的背面布满黑色的霉层。叶柄症状长条形、凹陷病斑，其上生黑色霉状物。果实症状病斑圆形，稍凹陷，上生黑霉，木栓化，坚硬、凹陷并龟裂。幼果畸形；成果生大小不等的圆形黑色病疤，病斑硬化，表面粗糙。病芽及病梢症状病芽的要紧特点是鳞片变黑和产生黑霉，病芽梢要紧特点是从新梢基部开始，逐步向上产生黑色霉层。病部生有黑色霉状物是该病的共同特点。提示:注意观看叶背黑色霉层具有沿叶脉走向的特点。2.病原物梨黑星病菌有性态为［VenturianashicolaTanakaetYamamoto］,属子囊菌亚门。无性态为［FusicladiumvirescensBon.］,属半知菌亚门。无性态分生孢子梗及分生孢子。分生孢子梗暗褐色，散生或丛生，直立或稍弯曲,大小为8.0～32.0μm×3.2～6.4μm。分生孢子着生于孢子梗的顶端或中部，脱落后留有瘤状的痕迹。分生孢子梗单生或丛生，从寄主角质层下伸出，呈倒棍棒状，暗褐色，直立或弯曲，常不分枝，孢痕多而明显。分生孢子淡褐色，卵形或纺锤形，两端略尖，单胞，萌发前少数生一横隔，大小为7.5～22.5μm×5～7.5μm。有性态假囊壳埋藏在落叶的叶肉组织中，成熟后有喙部突出叶表，如小黑点状,以反背面为多。假囊壳圆形或扁球形，颈部较肥短，黑褐色，平均大小118.6μm×87.1μm。子囊棍棒状，聚生于子囊果的底部，无色透亮，大小37.1～61.8μm×6.2～6.9μm。每个子囊内含有8个子囊孢子，淡黄绿色或淡黄褐色，状如鞋底，双胞，上大下小，大小11.1～13.6μm×3.7～5.2μm。提示:病部黑色霉状物为病菌的分生孢子梗及分生孢子。注意观看分生孢子梗是否丛生，有无分生孢子脱落后留下的疤痕。（八）梨锈病（PearRust）1.症状梨锈病要紧为害叶片和新梢，严峻时也能为害幼果和果梗。叶部症状，叶片正面生圆形小病斑，中央橙黄色有光泽，边缘淡黄色，周围具有黄色晕圈。随着病斑的扩大，病斑中央产生蜜黄色微凸的小粒点（性子器），潮湿时小粒点溢出淡黄色黏液（性孢子），黏液干燥后黄色小粒点变成黑色。之后病斑组织变肥厚，正面凹陷，背面隆起并长出十多根灰白色或淡黄色的毛管状物（锈孢子器），内有大量褐色锈孢子，成熟后从锈孢子器顶端开列散出。后期病叶变黑干枯，早落。幼果症状叶片症状相似。提示:注意观看叶、叶柄、果及果梗上性子器（蜜黄色微凸的小粒点）及锈子器（淡黄色的毛管状物）是否于同一部位。叶柄、果柄症状病部橙黄色，并隆起呈纺锤形，病斑上也可长出性子器和锈子器。新梢受害后的症状与叶柄、果柄相似。转主寄主柏科植物症状针叶、叶腋或小枝上产生淡黄色斑点，病部于秋季黄化隆起，翌春，形成球形或近球形瘤状菌瘿，菌瘿连续发育突破表皮露出红褐色、圆锥形或锲形的冬孢子角。冬孢子角成熟后，遇雨吸水胶化、膨大，冬孢子萌发产生担子及担孢子。2.病原物病原为亚洲胶锈菌(梨胶锈菌)［GymnosprangiumasiaticumMiyableexYamada］，属担子菌亚门。整个生活史中可产生4种类型的孢子。性孢子及锈孢子性孢子器扁烧瓶形，大小120～170μm×90～120μm，内生许多无色、单胞、纺锤形或椭圆形的性孢子，大小8.0～12μm×3～3.5μm。锈子器细圆筒形，长约5mm～10mm，直径0.2mm～0.5mm。锈孢子球形或近球形，大小18～20μm×19～24μm，膜厚2μm～3μm。橙黄色、表面有瘤状细点。冬孢子及担孢子冬孢子纺锤形或长椭圆形，双胞，黄褐色、大小33～62μm×14～28μm，孢子的分隔处各有两个发芽孔，柄细长。冬孢子萌发的最适温为17～20℃，冬孢子萌发时长出担子，4胞，每胞生一小梗，每小梗顶端生一担孢子。担孢子卵形，淡黄褐色，单胞，大小10～15μm×8～9μm。提示:梨胶锈菌具转主寄生特性，其性孢子器和性孢子、锈子器和锈孢子生于梨树，而冬孢子角和冬孢子、担子和担孢子生于柏科植物上。该菌还具有多型性，生活史中共产生性孢子、锈孢子、冬孢子和担孢子等4种孢子（缺夏孢子）。注意观看性孢子器和性孢子、锈子器和锈孢子及冬孢子、担子和担孢子的形状特点。该病菌与苹果锈病菌（GymnosprangiumyamadaiMiyabe）为同属不同种，不能交互侵染。（九）梨轮纹病(PearRingRot)1.症状要紧危害枝干和果实，也可危害叶片。1.1枝干症状以皮孔为中心先形成暗褐色瘤状突起，近圆形或扁圆形暗褐色坏死斑，直径约5mm～15mm，沿病斑外缘产生一圈裂纹，边缘翘起呈马鞍状。病斑产生许多的小黑点(分生孢子器)，形成以皮孔为中心的同心轮纹状病斑。众多病斑导致树皮粗糙，故称“粗皮病”。潮湿条件下，病斑小黑点中可溢出灰白色粘液状分生孢子团。1.2果实症状皮孔为中心，生成近圆形至红褐色圆形烂斑，形成浅褐色与红褐色至深褐色相间的同心轮纹。病斑散生的小黑点(分生孢子器)。1.3叶片症状病斑初期近圆形或不规则形，褐色，略显同心轮纹；后期逐步变为灰白色稀疏的小黑点。提示:注意观看枝干上以皮孔为中心的“马鞍状”翘起病斑，注意其上是否有黑色小点、为何物？2.病原物病菌有性态为贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型［Botryosphaeriaberengerianade.Notf.sp.piricola(Nose)KoganecawaetSokwwa］，属子囊菌亚门；无性态为轮纹大茎点霉［MacrophomakuwatsukaiHara］，属半知菌亚门。另一种病菌称干腐病菌，即贝伦格葡萄座腔菌Botryosphaeriaberengerianade.Not，属子囊菌亚门，无性态产生大茎点(Macrophoma)、杏核小穴壳(Dothiorella)型分生孢子。有性态子囊壳埋生于寄主表皮下子座中，单生，黑褐色，大小为170～310μm×230～310μm，有短喙。子囊棍捧形，大小为110～130μm×17.5～22μm，子囊内含8个子囊孢子。子囊孢子无色至淡黄色，椭圆形，大小为24.5～26μm×9.5～10.5μm。无性态分生孢子器黑褐色，球形或近球形，大小为383μm～425μm。分生孢子梗棒状。分生孢子无色，单胞，纺锤至长椭圆形，大小为24～30μm×6～8μm。（十）梨黑斑病(PearBlackSpot)1.症状要紧危害叶、果及嫩梢。1.1叶片症状圆形、黑色斑点，在呈圆形或不规则形，中央灰白色，边缘黑褐色，有时具轮纹大斑。潮湿时病班表生黑霉(病菌的分生孢子梗和分生孢子)。1.2幼果症状病斑近圆形至椭圆形，褐色至黑褐色，病斑略凹陷，潮湿时表面也产生黑色霉层。果面龟裂，裂缝可深达果心，在裂缝内产生黑霉。重病果常数个病斑合并为大病斑，致使全果呈乌黑色，表面密生墨绿色至黑色霉层。1.3新梢及叶柄症状，病斑长椭圆形，淡褐色，明显凹陷的病斑。病健交界处常产生裂缝。2.病原物病原为菊池链格孢［AlternariakikuchanaTanaka］，属于半知菌亚门。分生孢子梗褐色或黄褐色，丛生，一样不分枝，基部较粗，先端略细，有隔膜3～10个，大小为40～70μm×4.2～5.6μm，孢子脱落后有孢痕。分生孢子常2～3个链状长出，形状不一，大多数为棍棒，基部膨大,顶端细小，嘴胞短至稍长，有横隔膜4～11个，纵隔膜0～9个，大小为10～70μm×6～22μm，分隔处略缢缩。老熟的分生孢子壁较厚，暗褐色；幼嫩的分生孢子则壁薄而成黄褐色和暗黄色。（十一）梨褐斑病(Pearbrownspot)1症状仅为害叶片。叶片症状圆形或近圆形的褐色病斑，病斑相互愈合呈不规则形的褐色斑块。呈灰白色，密生黑色小点，周围褐色，最外层为黑色。2.病原物有性态为梨球腔菌[Mycosphaerellasentina(Fr.)Schröer]，属子囊菌亚门。无性态为梨生壳针孢［SeptoriapiricolaDesm.］，属半知菌亚门。无性态分生孢子器在叶组织内形成，孔口突出表皮外，球形或扁球形，直径80μm～150μm，暗褐色。分生孢子针状，无色，大小50～83μm×4～5μm，3～5个隔膜。有性态子囊壳在落叶上形成，多数群生，球形或扁球形、黑褐色，颈部突出叶表皮外，直径50μm～100μm。子囊棍棒状，无色透亮，大小45～60μm×15～17μm。子囊内含8个子囊孢子。子囊孢子纺锤形或圆筒形，向一方略弯曲，无色，大小27～34μm×4～6μm，有1个隔膜，隔膜处略有缢缩，分成大小相等的两个细胞。（十二）梨其它病害梨炭疽病、轮纹病、褐腐病、白粉病等。（十三）枣疯病(Jujubewitche’sbroom)1.症状要紧表现花梗延长，花变叶和主芽不正常萌发而构成枝叶丛生。1.1花器症状花器变成营养器官。花梗延长4～5倍，萼片、花瓣、雄蕊均变为小叶。1.2叶片病状叶肉变黄，叶脉仍绿，叶黄化，叶缘上卷，暗淡无光泽，硬而脆。有的叶尖边缘焦枯，似缺钾状。花后所长的叶片狭小，明脉，翠绿色，易焦枯。有时在叶背中脉上，长一片鼠耳状的明脉小叶。1.3枝症状病树技呈丛枝状。1.4根蘖症状根蘖枝纤细，节间缩短、叶小而黄，丛枝状更为明显。2.病原物枣疯病的要紧病原是植原体。枣疯病植原体为不规则球状，直径90～260nm，外膜厚度8.2～9.2nm，堆积成团或联结成串。四、实验作业1.比较苹果腐烂病和干腐病的症状特点。2.比较苹果轮纹病、炭疽病和褐腐病果实上的症状特点。3.绘苹果褐斑病病原菌形状图。4.绘梨黑星病无性态病原菌形状图。

实验五、蔬菜真菌病害－、目的要求识别和把握各种蔬菜要紧真菌病害的症状及其病原菌的形状特点。二、材料、仪器和用具材料：各种蔬菜要紧病害的玻盒标本，浸渍标本、新奇标本和病原菌玻片标本；各种各种蔬菜病害的挂图和多媒体课件。仪器和用具：电视显微系统、显微镜，放大镜，载玻片，盖玻片、解剖针、镊子，培养皿，双面刀片、通草，浮载剂等。三、实验操作（一）蔬菜霜霉病(Vegetabledownymildewdisease)霜霉病要紧危害十字花科蔬菜，也能危害葫芦科蔬菜。以白菜、青菜、油菜、菜苔、芥菜、榨菜、萝卜和甘蓝、黄瓜等发生霜霉病比较普遍。1.症状1.1叶部症状叶正面显现变色斑（如黄色、黄褐色），叶背面产生白色霜状霉层（注意，黄瓜为灰黑色霉层），病斑常受叶脉限制而成多角形。1.2花器症状花梗肿大、弯曲，常称为“龙头病”，病部生白霉，花瓣变为绿色。提示:注意观看叶背面霜状霉层且常受叶脉限制而成多角形的症状特点。2.病原物病原为十字花科霜霉菌[Peronosporaparasitica(Pers.)Fr.]，黄瓜霜霉病为古巴假霜霉（Pseudoperonosporacubensis），均属鞭毛菌亚门。无性态孢子囊生于孢囊梗上，由气孔伸出寄主表面，无色、无隔，作重复二叉状分枝，顶端小梗尖锐，每端着生孢子囊1个。孢子囊无色，单胞，长圆形至卵圆形，大小为24～27μm×25～30μm。有性态卵孢子黄色至黄褐色，圆形，厚壁，表面光滑或有皱纹，直径30～40μm。（二）瓜类白粉病(Melonsandgourdspowderymildew)白粉病要紧危害黄瓜、西葫芦、南瓜、甜瓜，其次是冬瓜、西瓜，丝瓜。要紧侵染叶片，亦可为害茎和叶柄一样不为害果实。1.症状1.1叶片症状叶面初呈白色近圆形小粉斑，后逐步扩大连接成片，呈边缘不整齐的大片白粉斑，严峻时白粉布满整个叶片，叶面上好像撒了一层白粉（分生孢子梗及分生孢子）。后期白粉状物渐变成灰白色，上面散生许多小黑点（闭囊壳）。1.2茎和叶柄症状其症状与叶片相似，只是白色粉状斑较小，白粉病斑上的白粉是病菌的菌丝体，小黑点是病菌的闭囊壳。提示:注意观看白色粉状物的病征特点，并注意与白色霜状霉层的区别；注意观看不同颜色的小点。2.病原物瓜类白粉菌有两种，一种是二孢白粉菌（ErysiphecichoracerumDC.），另一种是单丝壳白粉菌[Sphaerothecafuliginea(Schlecht)Poll.]。无性态分生孢子梗不分枝，圆柱形分生孢子梗及分生孢子或短棍棒形，无色，有2～4个隔膜，其上着生分生孢子。分生孢子椭圆形，无色，单胞，串生呈念珠状，大小为24～25μm×13～24μm。有性态闭囊壳皆为扁球形，暗褐色，无孔口，直径约为70～140μm，表面有菌丝状附属丝。两种菌的要紧区别为闭囊壳内子囊数目和子囊内子囊孢子数目不同。二孢白粉菌闭囊壳内有多个子囊，每个子囊内含有2个子囊孢子；单丝壳菌闭囊壳内仅有1个子囊，子囊内含有8个子囊孢子。提示:闭囊壳附属丝的形状，如丝状、球针状、钩丝状等等，以及闭囊壳内子囊个数和子囊内子囊孢子的个数是白粉菌分属的重要特点。（三）豆类锈病(Legumerust)锈病要紧危害菜豆、豇豆、蚕豆、豌豆等。1.症状各种豆类蔬菜锈病的症状都十分相似。锈病要紧为害叶片，也为害叶柄、茎和豆荚。叶、茎症状初出现边缘不明显的褪绿小黄斑，后中央稍突起，逐步扩大出现出黄褐色夏孢子堆，表皮裂后，散出红褐色粉末，即夏孢子。在豇豆上，可见到在一个夏孢子堆周围还有许多次生夏孢子堆围成一圈，其外围还有黄晕。夏孢子堆一样多发生在叶的背面，而在相对的叶正面只形成褪绿斑点。后期，夏孢子堆转变为黑色的冬孢子堆，或者在叶片上长出冬孢子堆。另外，在叶正面及荚上还会产生近圆形且具晕圈的黄褐色小斑点。上生黑褐色小粒点，即性子器，以后在性子器四周(茎、荚上)或相对的叶背产生黄白色小疱斑，即锈子器，再连续则形成夏孢子堆及冬孢子。但性子器和锈子器不常见。提示:锈病以夏孢子堆堆破裂散出锈色夏孢子为其症状特点。2.病原物豆类锈病是由担子菌亚门单胞锈菌属(Uromyces)不同种真菌侵染所致。几种要紧豆类锈病的病原形状特点和有关特性见表。表三种豆类锈病病菌形状和其他特性比较菜豆单胞锈菌U．appendiculatus豇豆单胞锈菌U．vignae蚕豆单胞锈菌U．fabae性子器罕见罕见桔红色小点锈子器罕见罕见白色或黄白色小点，周缘白色。夏孢子单胞，椭圆或卵圆形，浅黄或桔黄色，表生稀疏微刺，具1～3个芽孔，大小20～30μm×18～22μm。单胞、球形至椭圆形，黄褐色，密刺，具2个芽孔，大小20～32μm×18～25μm。单胞，球形至椭圆形，淡褐色，有刺，具3～5个芽孔，大小22～33μm×16～27μm。冬孢子单胞，近圆形或短椭圆形，褐色，顶端有乳头状突起，下有无色长柄，表面光滑，大小25～35μm×20～25μm。单胞，近圆形至椭圆形，褐色，顶有乳突，下有长柄，表面光滑，大小27～36μm×20～28μm。单胞，近圆形至椭圆形，褐色，顶部圆或平，下有长柄，表面光滑，大小为22～42μm×15～30μm转主寄主无无无为害寄主菜豆、扁豆、绿豆等豇豆蚕豆（四）蔬菜灰霉病(VegetablesGrayMold)灰霉病要紧危害葫芦科、茄科、豆科和其他蔬菜。植株地上部分均可受害，以果实和叶片为主。1.症状1.1果实症状先从残留的败花和柱头部侵染，造成花腐，后向果面和果柄扩展，呈灰白色腐烂；1.2叶片症状多从叶尖开始，向内呈“V”字形扩展，病斑初呈水渍状，边缘不规则，后呈浅褐色至黄褐色，具深浅相间的轮纹