抗双链DNA抗体检测讲解

抗双链DNA抗体检测（酶联免疫法）【预期用途】

本试剂盒用于体外定性检测人血清中的抗双链DNA抗体（ds-DNA抗体）水平。适用于系统性红斑狼疮（SLE）的辅助诊断。【实验原理】

本试剂盒应用间接酶联免疫吸附实验原理。在微孔板预包被ds-DNA抗原，加入样本稀释液及待检样本进行温育，样本中存在的抗ds-DNA抗体与包被抗原形成“包被抗原-抗体”复合物，洗板去除不与包被抗原结合的物质；加入酶结合物（HRP标记的抗人IgG抗体）进行第二次温育，酶标二抗将与“包被抗原-抗体”复合物结合，形成“包被抗原-IgG抗体-酶标二抗”复合物；再次洗板后加入显色剂，复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物。终止反应后，变为黄色。若样本中无抗ds-DNA抗体，不显色或很浅色。【适用仪器】含波长450nm的酶标仪。【样本要求】1.本试剂使用的样本为人血清。2.不能检测含有叠氮钠的样本，因叠氮钠抑制辣根过氧化物酶的活性；不能检测含有悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的样本。3.样本中应无微生物。无菌分离的样本可在2～8℃贮存1周，低于-18℃贮存三周，避免反复冻融。

4.使用前请将样本置于室温（10～30℃）平衡30分钟以上，冷冻样本实验前需解冻至室温（10～30℃）并混匀。【实验方法】1.配液：用蒸馏水或去离子水将1瓶浓缩洗涤液全部稀释至450ml。2.样本稀释：取90μl生理盐水于塑料试管中，再加10μl样本混匀。阴、阳对照已经1：10稀释可直接使用。3.编号：将样本对应的微孔按序编号，每板设阴性对照3孔、阳性对照2孔和空白孔1孔（双波长测定可不设空白孔）。

4.加样：每孔加100μl（或2滴）样本稀释液，空白孔不加。分别在相应的孔中加稀释过的样本或阴、阳对照10μl，轻轻振荡混匀。

5.温育：用封板膜封板后放入37±1℃温箱温育45±1分钟。6.洗涤：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5次（也可手工洗板），每次浸泡30秒，洗涤时各孔均需加满洗涤液，最后一次在吸水纸上尽量拍干。7.加酶：摇匀后每孔加100μl（或2滴）酶结合物，空白孔不加，轻轻振荡混匀。8.温育：用另一张封板膜封板后放入37±1℃温箱温育30±1分钟。9.洗涤：操作同第6步。10.显色：每孔先加50μl（或1滴）显色剂A，然后加50μl（或1滴）显色剂B（包括空白孔），37±1℃避光显色10±1分钟。

11.测定：每孔加50μl（或1滴）终止液终止反应，轻轻振荡混匀，10分钟内在波长450nm下分别测定各孔的吸光值A值。（单波长酶标仪需空白孔调零，双波长酶标仪不需空白孔调零）【实验方法】【阳性判断值】1.阴性对照质控的正常范围：正常情况下，阴性对照孔的A值≤0.1（若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若有两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复实验。若阴性对照平均A值小于0.05，则按0.05计算）。2.阳性对照质控的正常范围：正常情况下，阳性对照孔的A值≥0.6（若有1孔阳性对照A值小于0.6应舍弃，若两孔阳性对照A值都小于0.6，应重复实验）。3.界限值（CUTOFF值）计算：CUTOFF值=0.2+阴性对照平均A值。4.阴性判定：样本A值＜CUTOFF值者为抗ds-DNA抗体阴性。5.阳性判定：样本A值≥CUTOFF值者为抗ds-DNA抗体阳性。注：本试剂盒的界限值是基于150例健康人血清吸光度（A）值的平均值+2SD而得出。【检验结果的解释】1.由于受ELISA反应原理的限制，本试剂盒抗ds-DNA抗体检测阴性并不排除系统性红斑狼疮（SLE），还需结合其他临床指标判定。2.抗ds-DNA抗体阳性需用其他方法进行系统性红斑狼疮（SLE）的确认。【注意事项】1.本试剂盒仅用于体外诊断，操作应严格按照说明书进行。2.使用前请将试剂盒平衡至室温（10～30℃）。3.加液时建议使用加样器，若使用滴瓶滴加，请将滴瓶垂直，挤出头2滴舍弃，再依次加入。4.加样器要定期校准；加入不同样本或不同试剂组分时，应更换加样器吸头，以防交叉污染。5.所用样本、质控