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关于骨髓细胞染色体制备与观察骨髓细胞染色体制备与观察实验目的：掌握制备方法，计算分裂中期染色体数目，观察端着丝点的形态特点．实验原理：小鼠骨髓细胞中的造血干细胞，具有高度的分裂能力，可得到较多的细胞中期的分裂相．第2页,共11页，2024年2月25日，星期天骨髓细胞染色体制备与观察

实验用品：材料：小白鼠（2n=42）．用品：显微镜、冰箱、恒温箱、恒温水浴锅、离心机、注射器、解剖剪、镊子、移液器、载玻片、烧杯等。药品：0.1%(W/V)秋水仙素、2%(W/V)柠檬酸钠溶液、0.07M氯化钾溶液、（或0.35%氯化钾溶液）、蒸馏水、Giemsa原液，甲醇、乙酸等。第3页,共11页，2024年2月25日，星期天骨髓细胞染色体制备与观察实验步骤：预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗固定离心滴片染色观察第4页,共11页，2024年2月25日，星期天骨髓细胞染色体制备与观察1、取健康小白鼠（约65-90天龄），腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为4ml/Kg动物体重。2、2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，取出股骨，把肌肉刮净，剪下，用2%柠蒙酸钠溶液洗净血污及残渣。3、剪去关节头，用3-5ml2%柠檬酸钠溶液冲洗股骨断面至粉白色，制备了骨髓细胞悬浮液。第5页,共11页，2024年2月25日，星期天骨髓细胞染色体制备与观察4、将骨髓细胞悬液，1000rpm离心10分钟。5、吸去上清液，加入0.075M氯化钾溶液5ml，立即将细胞团吹打均匀，置37℃水浴25-30分钟。6、加入卡诺氏固定液5-6滴，搅拌均匀进行预固定10分。7、再以1000rpm离心10分钟。第6页,共11页，2024年2月25日，星期天骨髓细胞染色体制备与观察8、弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分上清液，吹均匀制成细胞悬浮液涂片观察。注意：如果细胞分散的不好，可再按上述方法再固定1-2次，使染色体进一步分散。9、取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞悬浮液于其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自然干燥。第7页,共11页，2024年2月25日，星期天骨髓细胞染色体制备与观察10、用Giemsa染液,染色15-20分钟，自来水冲洗，空气干燥。11、在低倍镜下观察中期分裂相细胞，计算染色体的数目，以确定其细胞2n的染色体数目。第8页,共11页，2024年2月25日，星期天骨髓细胞染色体制备与观察绘图：绘制一个图像清晰、形态典型的小白鼠染色体组形图。思考：思考实验中应注意的事项，积累经验。第9页,共11页，2024年2月25日，星期天骨髓细胞染色体制备与观察第10页

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