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文档简介

1病毒检验技术授课教师：庞明珍单位：鹤壁职业技术学院2熟悉分离培养

了解病毒标本的处理

掌握病毒检测方法

学习目标病毒的检验技术

一、标本的采集与处理1.采集时间：发病早期或急性期尽快采集。2.采集部位：取决于临床症状和所怀疑感染的病毒。

如：流感病毒感染------鼻咽拭子

乙型脑炎病毒感染------脑脊液

轮状病毒感染------粪便

乙型肝炎病毒感染------血液3.采集方法与处理

提高病毒的分离率，防止标本污染。采集时无菌操作,可加入抗生素以杀死杂菌二、标本的运送与保存

1.标本的运送尽快送检冷冻、冷藏运输防漏、专人、标记2.标本的保存-70℃可较长时间保存可加入甘油或二甲基亚砜（DMSO）、Hanks液或小牛血清等以防病毒失活返回章内容病毒的检验技术

三、病毒的分离培养

2.鸡胚培养

原代细胞培养二倍体细胞培养传代细胞

羊膜腔接种尿囊腔接种卵黄囊接种绒毛尿囊膜接种组织细胞培养

鸡胚培养

动物接种病毒的检验技术

1.组织细胞培养

鸡成纤维细胞Hep-2细胞细胞培养瓶Vero细胞病毒的检验技术

7一般选用9～14d的鸡胚来源充足、组织分化程度低、本身很少携带病毒和细菌、对接种病毒不产生抗体及病毒较易增殖等2.鸡胚培养优点：病毒的检验技术

3.动物接种常用的实验动物有小白鼠、乳鼠、豚鼠、家兔、猴和鸡等常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及脑内接种等方式病毒的检验技术

四、病毒增殖的观察（一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标1．细胞形态的改变2．红细胞吸附3．细胞培养液pH值改变（二）病毒数量及病毒感染性测定1．血凝试验2．中和试验3．空斑形成试验4．半数感染量（ID50）和组织培养半数感染量（TCID50）

病毒的检验技术

五、形态学检查及诊断

1.

光学显微镜检查：

*直接观察到较大的病毒体（如痘病毒）

*包涵体狂犬病毒感染------嗜酸性包涵体

巨细胞病毒感染---“猫头鹰眼”状的嗜酸性包涵体

病毒的检验技术

2.电子显微镜检查：

*透射电子显微镜

用于观察病毒的大小、形态与结构及细胞内的超微结构等*扫描电子显微镜：

用于观察病毒和细菌表面结构和附属结构等

五、形态学检查及诊断扫描电子显微镜病毒的检验技术

H1N1流感病毒电子显微镜图片狂犬病病毒电子显微镜图片病毒的检验技术

六、血清学检测及诊断

原理：用已知的病毒抗原检测患者血清中的抗体水平或

用已知的病毒抗体直接检测标本中的病毒抗原1.病毒抗原的检测：用荧光素、酶或胶体金等标记物标记病毒抗体检测标本中的相应病毒抗原。如ELISA检测HBsAg病毒的检验技术

2.病毒抗体的检测：已知病毒抗原多数为通过基因工程技术制备的重组抗原，其次是从患者标本中分离纯化的抗原。检测抗体的类型确定患者所处感染阶段-----急性期单份血清的IgM测定是诊断原发感染和早期感染-----IgG含量的测定应取病人急性期和恢复期双份血清，若含量升高4倍以上表明感染病毒病毒的检验技术

七、分子生物学检测及诊断1.核酸分子杂交技术

2.聚合酶链反应（PCR）-----多种病毒的快速诊断3.基因芯片技术----如检测H1

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