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文档简介
基因工程
一、概念
又叫基因重组技术,或DNA拼接技术,是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通
过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,发明出更符合人们需要的
新的生物类型和生物产品
二、基本工具
「分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)
⑴来源:重要从原核生物分离纯化
⑵作用:辨认双链DNA中某种特定的核甘酸序列,并且使特定部位的磷酸二酯键断
开
⑶结果:产生黏性末端或平末端
2.“分子缝合针”——DNA连接酶
(DE.coli-DNA连接酶
①来源:大肠杆菌
②作用:将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来
(2)T4-DNA连接酶
①来源:T4噬菌体
②作用:既可连接黏性末端又可连接平末端,但连接平末端的效率比较低
3.“分子运送车”——载体
⑴常用载体:质粒
⑵必备条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存
②具有一至多个限制酶切位点,供外源DNA片段插入
③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择
(3)其他载体:噬菌体、动植物病毒
三、操作环节
1.目的基因的获取
⑴目的基因:重要指编码蛋白质的结构基因
⑵方法:①从基因文库中获取目的基因②运用PCR技术扩增目的基因③用化学方法直
接人工合成
基因文库
将具有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌
分别具有这种生物的不同的基因,成为基因文库。假如基因文库中包含了一种生物所有的
基因,这种基因文库就叫做基因组文库;假如只包含了一种生物的一部分基因,这种基因
文库叫做部分基因文库,如cDNA文库。
PCR技术
是聚合酶链式反映的缩写,运用DNA双链复制的原理,将基因的核昔酸序列不断地
加以复制,使其数量呈指数方式增长。
运用PCR技术获取目的基因的前提,是要有一段已知目的基因的核甘酸序列,以便根
据这一序列合成引物。扩增的过程是:目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单
链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶作用下进行延伸,如此反复循环多次。
2.基因表达载体的构建(核心)
⑴目的:是目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因可
以表达和发挥作用
⑵组成:
启动子+目的基因+终止子+标记基因启动子是一段有特殊结构的DNA片
段,位于基因的首端,它是RNA聚合酶辨认和结合的部位,有了它才干驱动基因转
录出mRNA,最终获得所需要的蛋白质。
终止子
终止子相称于一盏红色信号灯,使转录在所需要的地方停止下来。终止子位于基因的
尾端,也是一段有特殊结构的DNA短片段。
标记基因
标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否具有目的基因,从而将具有目的基因的细
胞筛选出来,如抗生素基因就可以作为这种基因。
3.将目的基因导入受体细胞
⑴将目的基因导入植物细胞
①农杆菌转化法:使目的基因整合到受体细胞染色体DNA上
②基因枪法
③花粉管通道法
⑵将目的基因导入动物细胞:显微注射法
⑶将目的基因导入微生物细胞
受体细胞
ICa2+
感受态细胞
I含重组表达载体DNA分子的缓冲液
感受态细胞吸取DNA分子
4.目的基因的检测与鉴定:分子杂交技术检测转基因生物的染色体DNA是否插入了
目的基因(DNA—DNA杂交)
I
检测目的基因是否转录出了mRNA(DNA—RNA杂交)
I
检测目的基因是否翻译成蛋白质(抗原一抗体杂交)
四、基因工程的应用
1.植物基因工程
⑴抗虫转基因植物——减轻农药对环境的污染⑵抗病转基因植物⑶抗逆转基因植物
⑷运用转基因改良植物的品质
2.动物基因工程
⑴提高动物生长速度⑵改善畜产品的品质⑶用转基因动物生产药物
⑷用转基因动物作器官移植的供体⑸基因工程药品的生产
3.基因治疗
⑴概念:把正常基因导入病人体内,使该基因表达产物发挥作用
⑵方法:①体外基因治疗②体内基因治疗
五、蛋白质工程
1.概念
以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合
成,对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求
2.崛起的缘由
基因工程只能生产自然界中已经存在的蛋白质。这些天然蛋白质是生物在长期进化过
程中形成的,它们的结构和功能符合特定物种生存的需要,却不一定完全符合人类生产和
生活的需要。
3.蛋白质工程的原理
⑴目的:根据人们对蛋白质功能的特定需求,对蛋白质的结构进行分子设计
⑵基本途径
预期蛋白质的功能一设计预期蛋白质的结构一推测应有的氨基酸序列一找到相相应的
脱氧核甘酸序列(基因)
细胞工程
一、植物细胞工程
1.基本技术⑴理论基础:细胞全能性⑵常用技术
①植物组织培养
直联僧胪利工愈伤组织里生工试管苗植物体
②植物体细胞杂交
过程:
植物细胞A―►原生质体A
植物
I\杂种唯胞组织培鬓杂种
酶水杆细胞植物体
1,
植物细胞A—►原生质体B,
意义:克服远缘杂交不亲和的障碍
2.应用
1.植物繁殖新途径:微型繁殖(快速繁殖)作物脱毒制造人工种子
2.作物新品种的哺育:单倍体育种突变体的运用
3.细胞产物的工厂化生产
二、动物细胞培养
1.概念:从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养
基中,让这些细胞生长和增殖
2.过程
卜细胞株,细胞系
剪碎单个一细胞—细胞贴壁--------►IO代〜50代---------无限
胰蛋白的细胞悬浮液出现接触抑制遗传物质遗传物质传代
处理不变改变
(10代以内)
原代培养|传代培养…
3.条件:无菌、无毒的环境营养——合成培养基温度和pH(36.5±0.5℃,7.2~7.4)气体
环境
4.应用:生物制品的生产转基因动物的培养检测有毒物质医学研究
2.体细胞核移植(克隆)
⑴概念:将动物的一个体细胞的细胞核,移入一个己经去掉细胞核的卵母细胞中,使
其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体
⑵过程(以克隆牛为例)
去核卵母细胞供体细胞
重组细胞(胚胎)
[胚胎移植
代孕母体子宫
I生出
幼体
(与供体中遗传物质基本相同)
⑶应用前景
畜牧业:加速家畜遗传改良进程,促进优良畜群繁育保护濒危物种,增大存活数量
医药:生物反映器移植性克隆
科研:胚胎发育及衰老的研究用作疾病模型
⑷存在的问题
成功率低克隆动物的健康问题克隆动物食品的安全性问题
3.动物细胞融合
⑴概念:两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程
⑵原理:生物膜的流动性
⑶方法:聚乙二醇(PEG)灭活的病毒电刺激
⑷意义①突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为也许
②细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种哺育的研究
③单克隆抗体的制造
4.单克隆抗体
⑴制备[
O60
B淋巴细胞色髓瘤细胞
合、筛选
杂交瘤细胞
[培养、筛选
°产生特定抗体的细胞群。
扩大培养
体内培养体外培养
取
单克隆抗体
OOO
⑵特点:化学性质专一、特异性强、灵敏度高,并可以大量制备
⑶应用:作为诊断试剂用于治疗疾病和运载药物
胚胎工程
一、概念
对动物初期胚胎或配子所进行的多种显微操作和解决技术,如胚胎移植、体外受精、
胚胎分割、胚胎干细胞培养等
二、体内受精和初期胚胎发育
1.精子的发生
⑴场合:睾丸的曲细精管
⑵时间:初情期f生殖机能衰退
⑶过程:
盛—般一幡器晌叫霜鬣晌驾精细谍”精子
细胞细胞殖与细胞情母细胞
卜阶段I,卜阶段n,卜阶段m।
2.卵子的形成
⑴场合:卵巢、输卵管
⑵时间:始于性别分化后(胚胎时期)
⑶过程
第一极体第二极体
而原有丝分裂卵原一初级生I
细胞MII
细胞卵母细胞次级第二极体
卵母细胞
上卵子
胎儿期|初情期后
3.受精作用
⑴概念:精子+卵子一受精卵
⑵场合:输卵管
⑶过程
①准备阶段:精子获能卵子的准备
②受精阶段
顶体反映(穿越放射冠)
透明带反映(屏障1)
I
卵黄膜封闭作用(屏障2)
I
原核形成,配子结合形成受精卵
4.胚胎发育
受精卵
[卵裂
桑植胚
囊胚
II
滋养层细胞内细胞团
I
原肠胚
胎膜和胎盘组织器官分化
三、体外受精和初期胚胎培养
1.试管动物技术
通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精,并通过培养发育为初期胚胎
后,再通过移植产生后代的技术
2.体外受精
⑴卵母细胞的采集和培养
①促性腺激素②超声波探测仪、内窥镜等
⑵精子的采集和获能
①采集:假阴道法、手握法、电刺激②获能:培养法、化学诱导法
⑶受精:获能的精子和培养成熟的卵子发生作用
3.初期胚胎培养
培养液成分:无机盐、有机物、维生素、激素、氨基酸、核甘酸、血清等
胚胎去向:向受体移植冷冻保存
四、胚胎工程的应
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