从环境中分离酵母菌实验设计案

/实验设计方案从环境中分离酵母菌班级：10级生科（2）班组员:刘楠楠:2潘婷:2李炜昊：2马森:2实验：从环境中分离出酵母菌实验设计方案采样采样的理由：酵母菌与人类的关系密切酵母菌是一类单细胞真菌的俗称，分类学上分属于子囊菌纲半知菌类特征:

1.

个体一般以单细胞状态存在；

2.

多数营出芽生殖，有的裂殖；

3.

能发酵糖类产能；

4.

细胞壁常含有甘露聚糖；

5.

喜在含糖量较高、酸度较大的水生环境中生长。酵母菌分布：主要生长在偏酸的含糖环境中，在水果、蜜饯的表面和果园土壤中最为常见。种类：据1982年的资料，已知的酵母有56属，500多种。酵母菌与人类的关系极其密切。千百年来，人类几乎天天离不开酵母菌，例如酒类的生产，面包的制作，乙醇和甘油发酵，石油及油品的脱蜡，饲用、药用等的生产。酵母菌细胞的形态和构造电子显微镜下的酿酒酵母细胞结构示意图细胞直径比细菌粗10倍左右，如Saccharomycescerevisiae细胞的宽度为2.5~10μm，长度为4.5~21μm。因此在光学显微镜下可以模糊地看到它们细胞内的各种结构分化。酵母菌细胞的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。细胞壁：酵母细胞壁呈“三明治”结构外层：甘露聚糖（约占30%，以α-糖苷键联结（并非所有酵母菌都有）内层：葡聚糖（约占30-40%，由D-葡萄糖以β-糖苷键联结）中间层：蛋白质（含6-8%，多为酶类）细胞膜：酵母菌的细胞膜与原核生物的基本相同。但有的酵母菌如酿酒酵母中含有固醇类（甾醇）、VitD的前体麦角固醇，这在原核生物是罕见的。细胞核:核膜：核孔40～70nm，透性比任何生物膜都大。染色体:由DNA和组蛋白牢固结合而成，呈线状,数目因种而异。核仁：核内有一或几个区域rRNA含量很高，这一区域为核仁，是合成核糖体的场所。中心体:在核膜外，由蛋白质亚基组成的细丝状结构，在细胞繁殖分裂中起作用。细胞核的功能:携带遗传信息，控制细胞的增殖和代谢。酵母菌的繁殖方式大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，颜色单调。常见白色、土黄色、红色。采样的方法：原理：大多数酵母菌为腐生，，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。故可以从甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮上取样。利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长）实验材料和用具1、苹果果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。2、豆芽汁葡萄糖培养基原料：黄豆芽（100克）、葡萄糖（50克）、蒸馏水（1000ml），自然PH配制方法：陈新鲜豆芽100克，放入烧杯中，加水1000ml,煮沸约30min，用纱布过滤，用水补足原量，再加入葡萄糖50克，煮沸融化，121℃实验步骤l、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入到豆芽汁葡萄糖培养液试管中，置28一30℃，培养24小时2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml，注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，置28一30℃3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。4、活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。芽殖过程：母细胞形成小突起（A—D）核裂（E—G）原生质分配（H—I）新膜形成（J—K）形成新细胞壁（L）二、分离原理：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板。用划线法分离酵母菌培养液，从而得到单个菌落。挑取单个菌落反复再次划线分离纯化，最终可获得纯培养。培养基的设计：马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml），自然PH配制方法：将马铃薯去皮后，切片，加水煮烂（煮沸20—30分钟，能被玻璃棒戳破即可），用4层纱布过滤，再加入糖和琼脂，加热融化后再补足水分至1000ml,并在121摄氏度条件下高压灭菌20分种。方法:平板划线法鉴定原理：大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。啤酒酵母的菌落红酵母的菌落各种酵母菌的菌落。方法:制玻片并在显微镜下观察其形态四、实验的过程记录及其结果、结果分析日期2012/5/272012/2012/2012/2012/6/记录配制豆芽汁葡萄糖培养液，并接种，用的材料是成熟的苹果皮。在28℃的环境下培养了24小时，观察现象，培养液变浑浊。配制豆芽汁培养基，进一步进行培养。1.取菌液制片并滴加少许的美蓝染液，用显微镜观察，酵母菌大部分为活的，且处于母细胞形成小突起阶段。2.配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基，用划线法分离酵母菌1.观察培养基上的菌落，菌落表面光滑、湿润，容易挑起，菌落的质地很均匀，为乳白色。初步断定分离纯化出来的是酵母菌。2.镜检，在显微镜下观察大部分酵母菌处于核裂阶段，少数处于新膜形成阶段。可断定为酵母菌五、结果及结果分析:在本实验中，我们的最根本目的是从环境中分离出酵母菌，依据酵母菌的特性，我们选择从成熟的苹果皮中提取，依据酵母菌的形态、菌落特征我们进行了鉴定，最终在经过六天的实验后从环境中提取出了酵母菌，但在实验的过程中所提取出来的酵母菌的量不多，分析原因大概有如下两点:1.苹果皮在接种前洗过，把一些菌洗掉了。2.接种时，接种的量不足，导致后续的培养出来的量也不足。六、实验感想：此次实验是由四人的一个小组合