微生物实验内容汇总

医学微生物学实验微生物学教研室

1可整理ppt医学微生物学实验1可整理ppt第一次实验内容

细菌基本形态观察（球菌、杆菌、螺形菌）细菌特殊结构观察（荚膜、鞭毛、芽胞）革兰染色法2可整理ppt第一次实验内容

细菌基本形态观察2可整理ppt1.细菌的三种基本形态球菌：葡萄球菌。杆菌：大肠杆菌。螺形菌：霍乱弧菌。3可整理ppt1.细菌的三种基本形态球菌：葡萄球菌。3可整理ppt

细菌的三种基本形态示意图⊕4可整理ppt细菌的三种基本形态示意图⊕4可整理ppt葡萄球菌：5可整理ppt葡萄球菌：5可整理pptFigure1-AGramstainofGram+Staphylococcuscells.6可整理pptFigure1-AGramstainofGra显微镜下的杆菌杆菌(bacillus)Figure2-GramstainofGram-E.colicells7可整理ppt显微镜下的杆菌杆菌(bacillus)Figure2-弧菌8可整理ppt弧菌8可整理ppt霍乱弧菌Figure3-GramstainofGram–Choleracells9可整理ppt霍乱弧菌Figure3-GramstainofG2.细菌的特殊结构观察芽胞示教片：破伤风杆菌。鞭毛示教片：变形杆菌。荚膜示教片：肺炎双球菌。

10可整理ppt2.细菌的特殊结构观察芽胞示教片：破伤风杆菌。10可整理pp芽孢产芽孢细菌的种类

菌体（营养细胞）芽胞11可整理ppt芽孢产芽孢细菌的种类菌体芽胞11可整理ppt破伤风梭菌×100012可整理ppt破伤风梭菌×100012可整理ppt鞭毛13可整理ppt鞭毛13可整理ppt变形杆菌鞭毛×100014可整理ppt变形杆菌鞭毛×100014可整理ppt细菌荚膜示意图15可整理ppt细菌荚膜示意图15可整理ppt荚膜的观察：负染色

16可整理ppt荚膜的观察：负【菌种】齿垢【试剂】生理盐水、结晶紫、碘液、95%乙醇、复红【材料】酒精灯、接种环、玻片、3.革兰氏染色法由丹麦医生HansChristianGram于1884年创立。17可整理ppt【菌种】3.革兰氏染色法由丹麦医生HansChristia【操作步骤】结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色复红复染涂片固定1min1min30s1min滤纸吸干，油镜观察18可整理ppt【操作步骤】结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色复红复染涂片固定1m

结晶紫

1’

碘液

1’95%乙醇

30”复红

1’

冲洗滤纸干燥

油镜观察冲洗冲洗冲洗染色初染媒染脱色复染19可整理ppt冲洗冲洗冲洗染色初染媒染脱色复染19可整理ppt紫色（G＋）革兰氏染色步骤示意图革兰氏染色甲菌乙菌初染结晶紫媒染碘液脱色乙醇复染复红紫色（G＋）红色（G-）革兰氏染色步骤示意图20可整理ppt紫色（G＋）革兰氏染色步骤示意图革兰氏染色甲菌乙菌初染结晶紫【结果】细菌被染成紫色者，称为革兰氏阳性菌；而细菌染成红色者，称为革兰氏阴性菌；阳性菌——紫色

阴性菌——红色21可整理ppt【结果】细菌被染成紫色者，称为革兰氏阳性菌；阳性菌——紫色【意义】鉴别细菌，用本法染色可将细菌分成两大类。了解致病性指导选择用药22可整理ppt【意义】鉴别细菌，用本法染色可将细菌分成两大类。22可整理p【革兰氏染色法的原理

】革兰氏染色法的原理尚未阐明，可能与以下因素有关。1、通透性学说2、等电点学说3、化学学说23可整理ppt【革兰氏染色法的原理】革兰氏染色法的原理尚通透性学说G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易进入。G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含大量脂质，乙醇易渗入。24可整理ppt通透性学说G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖等电点学说G+菌等电点（pI2~3）G-菌等电点（pI4~5）在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。25可整理ppt等电点学说G+菌等电点（pI2~3）25化学学说G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱色G-菌菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色26可整理ppt化学学说G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫等染注意事项涂片的厚度。固定的程度。染色的时间控制：一一半一。冲洗的方法，不要对着涂片区。95%乙醇脱色时间。27可整理ppt注意事项涂片的厚度。27可整理ppt第二次实验内容一、细菌基础培养基的制备（示教）二、细菌分离接种技术（操作）平板划线接种法；斜面培养基接种法液体培养基接种法；半固体穿刺接种法三、细菌在培养基上生长现象（观察）

28可整理ppt第二次实验内容一、细菌基础培养基的制备（示教）28可整理p一、细菌基础培养基制作液体培养基制作普通肉汤培养基成分：新鲜牛肉浸液100ml，蛋白胨1g，NaCl0.5g称量，包装，灭菌后使用。固体培养基制作称取营养琼脂4.5g，加入100ml蒸馏水中溶解。包装后灭菌使用。斜面培养基制作

29可整理ppt一、细菌基础培养基制作液体培养基制作29可整理ppt1、称量及溶化2、调pH3、加琼脂、溶化、定容、（过滤）4、分装、加塞、包扎5、灭菌（6、摆斜面）操作步骤30可整理ppt1、称量及溶化2、调pH3、加琼脂、溶化、定容、（过滤）1.半固体培养基接种法（操作）2.斜面培养基接种法3.液体培养基接种法细菌的分离接种接技术（一）分离培养1.平板分离划线接种法（操作）（二）纯培养31可整理ppt1.半固体培养基接种法（操作）细菌的分离接种接技术（一平板分离划线接种法①连续划线法②分段划线法32可整理ppt平板分离划线接种法①连续划线法IVIII1/5I1/10Rotate90

FlameloopRotate90

Rotate90

III1/4Flameloop平板划线接种法（分离培养法）33可整理pptIVIII1/5I1/10Rotate90Fl培养结果132注意事项：1.各区之间接种环要灭菌2.用力适当，不要划破琼脂表面3.注意无菌操作34可整理ppt培养结果132注意事项：1.各区之间接种环要灭菌2.用力适当斜面培养基接种法（操作）用途：常用于扩大纯种细菌及实验室保存菌种。35可整理ppt斜面培养基接种法（操作）用途：常用于扩大纯种细菌及实验室保存液体培养基接种法36可整理ppt液体培养基接种法36可整理ppt半固体培养基接种法（操作）方法：穿刺接种结果：沿穿刺线生长——动力-扩散生长——动力+37可整理ppt半固体培养基接种法（操作）方法：穿刺接种结果：沿穿刺线生长—三、细菌在培养基上生长现象沉淀—成链生长浑浊—均匀分散生长菌膜—表面生长（需氧菌）1.固体2.半固体3.液体菌落菌苔动力+动力-38可整理ppt三、细菌在培养基上生长现象沉淀—成链生长1.固体2.半固固体培养基生长现象39可整理ppt固体培养基生长现象39可整理ppt液体培养基中生长现象沉淀生长混浊生长表面生长40可整理ppt液体培养基中生长现象沉淀生长混浊生长表面生长40可整理ppt半固体培养基中生长现象有鞭毛动力+无鞭毛动力－沿刺线生长混浊生长41可整理ppt半固体培养基中生长现象有鞭毛无鞭毛沿刺线生长混浊生长41可整培养基生长现象用途固体平板固体斜面液体半固体细菌在培养基上生长现象42可整理ppt培养基生长现象用途固体平板固体斜面液体半固第三次实验内容一、细菌分布实验空气中细菌的检查皮肤、日常物品细菌的检查二、药敏实验43可整理ppt第三次实验内容一、细菌分布实验43可整理ppt一、细菌的分布实验（1）空气细菌检查材料：培养基，普通琼脂平皿（2）皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查材料：培养基，无菌生理盐水，75%酒精棉球，2.5%碘酒棉球，无菌棉棒（3）自来水中的细菌检查材料：培养基，无菌棉棒，酒精灯44可整理ppt一、细菌的分布实验（1）空气细菌检查44可整理ppt1.空气中细菌的检查取三块琼脂平板，将2个打开皿盖分别置于不同的环境15~30min后，盖好皿盖。另外1个不启盖作为对照。置37℃培养18~24h。材料：普通琼脂平板方法：结果：计数菌落数，观察菌落数的差异。45可整理ppt1.空气中细菌的检查取三块琼脂平板，将2个打开皿盖材料：普2、皮肤消毒前后的细菌检查方法在1个平皿底部做好标记，分为消毒前与消毒后两个区域。取一支无菌棉签放入无菌盐水中浸泡，在管壁上挤干水后擦拭皮肤或其他物品，然后将该棉签涂布于无菌平皿消毒前区域，作来回划线，注意勿划破琼脂表面。将皮肤区域或物品用碘酒棉球及酒精棉球涂擦消毒，另取一支无菌棉棒用消毒前所述方法取材，接种于标有消毒后的平皿区域。平皿37℃、24h培养后取出观察表面有无细菌生长，比较消毒前后菌落数目，描述菌落特征。46可整理ppt2、皮肤消毒前后的细菌检查方法在1个平皿底部做好标记，分为消结果：计数菌落数37℃×18~24h消毒前消毒后47可整理ppt结果：计数菌落数37℃×18~24h消毒前消毒后47可整理p自来水中的细菌检查在1个平皿底部做好标记。用酒精灯对水管口灭菌，拧开水管开关放水15S。取一支无菌棉签蘸取自来水，将该棉签涂布于标有消毒前的无菌琼脂平皿表面，作来回划线，注意勿划破琼脂表面。将平皿于37℃、24h培养后取出观察平皿表面有无细菌生长，描述菌落特征。48可整理ppt自来水中的细菌检查在1个平皿底部做好标记。48可整理ppt

二、药敏试验（纸片扩散法）材料：方法：普通琼脂平板(2块平板/组）大肠杆菌、金葡菌氯霉素、青霉素、碘酒、结晶紫

大肠杆菌葡菌球菌氯青庆链氯青庆链37℃×18~24hG+G-49可整理ppt二、药敏试验（纸片扩散法）材料：方法：普通琼脂平板(2块平步骤（无菌操作）1、在培养基平皿上做标记。2、接种；用棉签分别沾取菌液（G+，G-）均匀分别涂布于2个平皿上。3、贴药片；镊子灭菌取药片放置于平皿上的标记位置，再灭菌后可取另一药片放置。4、37℃，过夜培养，观察结果。药敏实验（纸片扩散法）50可整理ppt步骤（无菌操作）药敏实验（纸片扩散法）50可整理ppt药敏实验结果51可整理ppt药敏实验结果51可整理ppt药敏实验结果药敏实验纸片法抑菌环直径青霉素(10ug/片)链霉素(10ug/片)氯霉素(30ug/片)庆大霉素(10ug/片)敏感标准抗药≦20≦11﹤10≦12中度敏感21-2812-1410-1713-14高度敏感≧29≧15﹥17≧15白色葡萄球菌（G+）大肠杆菌（G-）52可整理ppt药敏实验结果纸片法抑菌环直径青霉素链霉素氯霉素庆大霉素抗药≦第四次实验内容

病原性球菌标本片观察链球菌、脑膜炎双球菌血浆凝固酶试验抗“O”试验

53可整理ppt第四次实验内容

病原性球菌标本片观察53可整理ppt目的要求掌握病原性球菌的基本形态。掌握药敏实验操作技术与判断。54可整理ppt目的要求掌握病原性球菌的基本形态。54可整理ppt链球菌55可整理ppt链球菌55可整理ppt脑膜炎双球菌56可整理ppt脑膜炎双球菌56可整理ppt[原理和意义]致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使人或动物血浆发生凝固，因此，测定血浆凝固酶的有无是鉴定葡萄球菌致病性的重要依据。血浆凝固酶试验57可整理ppt[原理和意义]血浆凝固酶试验57可整理ppt步骤：血浆血浆12金葡白葡++凝集（+）不凝集（-）血浆凝固酶试验生理盐水++无菌操作：58可整理ppt步骤：血浆血浆12金葡血浆凝集试验结果59可整理ppt血浆凝集试验结果59可整理ppt链球菌侵入体内产生SLO，刺激机体产生相应抗体ASO，当两者中和后，再加入SLO乳胶试剂，因病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗体与乳胶试剂反应，产生清晰凝集，为阳性；无凝集，为阴性。方法：间接凝集结果：效价大于400单位意义：风湿热及其活动性的辅助诊断抗“O”试验（ASOtest）原理：60可整理ppt链球菌侵入体内产生SLO，刺激机体产生相应抗体ASO，当两者步骤：抗“O”试验（ASOtest）阴性对照（1滴）待检血清

（1滴）++胶乳试剂（1滴）胶乳试剂（1滴）-？2min2min61可整理ppt步骤：抗“O”试验（ASOtest）阴性对照（1滴）第五次实验内容

操作：肥达试验肉毒梭菌、产气荚膜菌标本62可整理ppt第五次实验内容

62可整理ppt肥达实验肥达试验（Widaltest）是用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原与病人血清做定量凝集试验，以测定患者血清中有无相应抗体，根据抗体含量的多少以及增长情况，可帮助诊断伤寒及副伤寒。

【原理】63可整理ppt肥达实验肥达试验（Widaltest）是用已知肥达反应稀释法示意表试验管（每管0.5ml）对照管1234567生理盐水0.50.50.50.50.50.50.5-1“O”抗原0.50.50.50.50.50.50.52“H”抗原0.50.50.50.50.50.50.53PA抗原0.50.50.50.50.50.50.54PB抗原0.50.50.50.50.50.50.5血清最终稀释度

1:401:801:1601:3201:6401:1280-64可整理ppt肥达反应稀释法示意表试验管（每管0.5ml）对照管123肥达实验结果判断血清的凝集效价（滴度）：是指能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集（即“++”凝集）的血清最高稀释倍数。血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗体的量愈多。65可整理ppt肥达实验结果判断血清的凝集效价（滴度）：是指能结果判断1、正常凝集效价伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价在1：80以下，伤寒沙门菌“H”抗体在1：160以下，甲、乙型副伤寒沙门菌“H”抗体凝集效价在1：80以下。2、病程中动态观察

二份血清，第二次效价增长四倍以上有意义3、O与H抗体在诊断上的意义66可整理ppt结果判断1、正常凝集效价66可整理ppt

OHAB

诊断意义（可能）伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种/非特异性回忆反应伤寒甲型副伤寒乙型副伤寒接种伤寒及副伤寒三联疫苗非肠热症/早期用抗生素/免疫功能低下3、O与H抗体在诊断上的意义67可整理pptOHAB肉毒梭菌68可整理ppt肉毒梭菌68可整理ppt产气荚膜梭菌69可整理ppt产气荚膜梭菌69可整理ppt第六次实验内容一、细菌染色标本检查法

抗酸染色法（操作）二、标本片观察：（钩端螺旋体

、白色念珠菌，曲霉、枯草杆菌）

70可整理ppt第六次实验内容一、细菌染色标本检查法70可整理ppt分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。一、抗酸染色原理71可整理ppt分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽抗酸染色材料：标本：卡介苗染液：石炭酸复红，3%盐酸酒精，美蓝器具：同革兰氏染色72可整理ppt抗酸染色材料：72可整理ppt

实验方法：1、细菌涂片标本的制备涂片

干燥

固定3、油镜观察1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。2）脱色：3%盐酸酒精脱色30’’~1’；用水冲洗。3）复染：用碱性美兰溶液复染1’，用水冲洗后用吸水纸吸干。2、染色73可整理ppt实抗酸染色步骤

1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。涂片干燥固定74可整理ppt抗酸染色步骤1、涂片包括涂片、干燥、固抗酸染色步骤2、染色包括初染、脱色、复染三步。

石炭酸复红维持3-5’3%盐酸酒精30’’

~1’美蓝复染1’

冲洗干燥

油镜观察冲洗冲洗初染脱色复染75可整理ppt抗酸染色步骤2、染色包括初染、脱色、复染三步。冲洗冲洗初染脱三、抗酸染色结果抗酸菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。76可整理ppt三、抗酸染色结果抗酸菌呈红色，76可整理ppt77可整理ppt77可整理ppt注意事项：1、无菌操作2、菌种管摇匀后取菌3、涂片均匀4、初染加热维持3~5分钟，勿沸腾烧干5、冷却后冲洗6、油镜下从视野中找红色抗酸菌78可整理ppt注意事项：1、无菌操作78可整理ppt二、标本片观察白色念珠菌钩端螺旋体枯草杆菌曲霉79可整理ppt二、标本片观察白色念珠菌79可整理ppt白色念珠菌80可整理ppt白色念珠菌80可整理ppt钩端螺旋体81可整理ppt钩端螺旋体81可整理ppt类炭疽（枯草杆菌）炭疽杆菌82可整理ppt类炭疽（枯草杆菌）炭疽杆菌82可整理ppt曲霉83可整理ppt曲霉83可整理ppt第七次实验内容

脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定

84可整理ppt第七次实验内容

脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定84可整理p实验器材标本：脓拭子、感染分泌物或模拟脓汁标本菌种：金黄色葡萄球菌培养物、表皮葡萄球菌培养基：血琼脂平板、甘露醇发酵管其他：血浆、生理盐水、革兰染液、玻片、滴管培养箱、酒精灯、接种环等85可整理ppt实验器材标本：脓拭子、感染分泌物或模拟脓汁标本85可整理pp检查原则在脓汁标本中，以化脓性球菌最为常见，本实验主要检测金黄色葡萄球菌用药前采集标本无菌操作86可整理ppt检查原则在脓汁标本中，以化脓性球菌最为常见，本实验主要检标本检测程序脓汁、脓性分泌物（未知菌液/固体培养物）涂片革兰染色镜检血琼脂平板接种直接菌落观察血浆凝固酶试验甘露醇发酵诊断报告87可整理ppt标本检测程序脓汁、脓性分泌物（未知菌液/固体培养物）涂检查方法和结果报告直接显微镜检查：取标本直接涂片，均匀涂成菌膜，自然干燥，固定后革兰染色，油镜观察。注：若染色后未发现细菌，可报告“直接镜检未发现细菌”

革兰染色镜检

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形态