吸附色谱分离技术

吸附色谱分离技术

吸附色谱分离技术基本原理1吸附剂2展开剂3影响吸附分离的因素4薄层色谱分离技术5柱色谱分离技术6基本原理

利用各组分与吸附剂之间的分子吸附力(范德华力，包括色散力、诱导力、定向力以及氢键)的差异而实现分离。吸附色谱分离技术基本原理吸附色谱分离技术平衡系数（分配系数、吸附系数、选择性系数）K=cs/cm

cs—固定相中的浓度；cm—流动相中的浓度影响K的因素：被分离物质本身的性质、固定相和流动相的性质、色谱柱的操作温度。K差异越大，色谱分离效果越理想。基本原理吸附色谱分离技术阻滞因数（比移值）0≤Rf≤1，Rf越大，溶质随流动相移动快，被洗脱速率也就越快。当Rf=1，此种溶质不溶于固定相，随流动相以同样的速率移动。当Rf=0，此种溶质不溶于流动相，而被吸附在固定相上。斑点到原点的距离

Rf值=—————————————

溶剂前沿到原点距离吸附剂吸附剂选择的原则：1.应有最大的比表面积和足够的吸附能力，对欲分离的不同物质应有不同的溶解和解吸能力；2.与洗脱剂、溶剂及样品组分不发生化学变化；3.颗粒均匀，操作过程中不破裂。吸附色谱分离技术吸附剂常用的吸附剂吸附剂均含有不饱和的氧原子或氮原子以及能够形成氢键的基团，如-OH和-NH2。常用的吸附剂有：吸附色谱分离技术1.硅胶2.氧化铝

3.活性炭4.纤维素5.聚酰胺6.硅藻土吸附剂吸附剂的吸附力次序 常用吸附剂的吸附力的强弱顺序为：活性炭>氧化铝>硅胶>氧化镁>碳酸钙>磷酸钙>石膏>纤维素>淀粉和糖吸附色谱分离技术展开剂

展开剂选择的原则：1.对被分离组分应具有一定的解吸附能力，极性应比被分离物质的极性略小；2.展开剂应对被分离物质具有一定的溶解能力。通常，先用一种极性较小的溶剂为基础，若展开不好，则用极性较大的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次实验，直到选出适合的展开剂。吸附色谱分离技术展开剂

展开剂的极性次序：己烷<环己烷<四氯化碳<甲苯<苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<正丙醇<乙醇<甲醇<水<冰醋酸吸附色谱分离技术展开剂极性越大，对同一化合物的洗脱能力越大，可以根据实验结果调整展开剂的极性以获得最佳的分离的效果。

影响吸附分离的因素

1.和功能基极性有关。极性增加的顺序：烷烃、不饱和烃、醚、酯、酮、醛、醇、酚和羧酸，同一类化合物极性基团越多，极性越大。2.小分子的化合物比大分子的化合物极性大。3.和某些细微结构有关，如氢键、异构体等。吸附色谱分离技术薄层色谱分离技术吸附色谱分离技术1.薄层板的制备吸附剂硅胶调制玻璃板涂布调制时慢慢搅拌，勿使产生气泡。均匀涂布在玻璃板上，摇动摊平，晾干。使用前放入烘箱内，在105-115℃烘干40-50min。冷却后使用。粘合剂、添加剂薄层色谱分离技术吸附色谱分离技术2.点样样品溶液的配制点样点样示意图样品点点样直径≤2mm1cm≤点间距≤1.5cm1-2cm薄层色谱分离技术吸附色谱分离技术3.展开展开剂要接触到吸附剂下沿，但切勿接触到样点。盖上盖子，展开。观察展开情况。取出薄层板

展开示意图薄层色谱分离技术吸附色谱分离技术3.展开上升法倾斜上行法下降法薄层色谱分离技术吸附色谱分离技术3.展开画溶剂前沿线观察斑点记录Rf值薄层色谱分离技术吸附色谱分离技术4.显色本身带有颜色——有色斑点本身无颜色——显色剂显色含有荧光剂的薄层板——暗色斑点柱色谱分离技术

吸附色谱分离技术洗脱剂的选择

层析柱的选择（内径、长度、材质）制备（色谱柱装填）洗脱方式、流速、梯度↓加样洗脱洗脱液的监测收集及组分鉴定吸附剂的清洗、再生和保存

↓↓↓←吸附剂的选择（既能吸附组分，又能被洗脱液将组分洗脱下来）

↘↑吸附剂的处理上样缓冲液（平衡液）的选择柱色谱分离技术

吸附色谱分离技术1.装柱干法装柱湿法装柱吸附色谱分离技术2.平衡色谱柱填装好后，必须用起始缓冲液平衡到与之pH和离子强度相同时才可使用。装好的柱子要求均匀，无纹路，无气泡，柱顶部平整。用蓝色葡聚糖-2000在恒压下走柱，若色带均匀下降，则柱填装均匀。柱色谱分离技术

吸附色谱分离技术3.上样湿法上样：把被分离的物质溶在少量色谱最初用的洗脱剂中，小心加在吸附剂上层，注意保持吸附剂上表面仍为一水平面，打开下口，待溶液面正好与吸附剂上表面一致时，在上面撒一层细砂，关紧柱活塞。干法上样：可选用一种对其溶解度大而且沸点低的溶剂，取尽可能少的溶剂将其溶解。在溶