本科院校-基础医学-医学分子生物学-第十六章 分子生物学常用技术

本科院校-基础医学-医学分子生物学-第十六章分子生物学常用技术

单选题A11.基因芯片事实上就是高通量的基因芯片又称dna微阵列(dnamicroarray)，是以许多特定的dna片段有规律地紧密排列固定于单位面积的支持物上，然后与标记的荧光标记样品进行杂交，再用荧光检测系统等对芯片进行扫描，通过计算机对每一位点的荧光信号进行检测、比较和分析，从而迅速得到定性和定量的结果。答案：(A)A:核酸分子杂交B:ChIPC:蛋白质印迹D:EMSAE:实时PCR

单选题A12.PCR扩增DNA时不需要加入的是pcr原理：以含拟扩增序列两端互补的特异寡核苷酸片段(引物)，在耐热dna聚合酶(taqdna聚合酶)作用下，以dntp为原料，按照半保留机制沿dna模板链延伸合成新的dna。答案：(A)A:RNA聚合酶B:dNTPC:模板DNAD:TaqDNA聚合酶E:引物

单选题A13.一般不会用作探针的物质是核酸探针可以是人工合成的寡核苷酸片段，也可以是解链后的基因组dna片段、cdna全长或部分片段，还可以是rna片段。抗体在蛋白质印迹技术中也可被标记，用来探测分析，因此也可认为是一种探针。但氨基酸为小分子，一般不用作探针。答案：(B)A:人工合成的寡核苷酸片段B:氨基酸C:RNA分子D:蛋白质分子E:单链DNA分子

单选题A14.基因芯片检测的原理是基于基于双色荧光(常用cy3红色、cy5绿色)分别标记不同样品，基因芯片特别适合比较分析不同组织细胞或同一细胞不同状态下的基因差异表达情况。答案：(B)A:抗原-抗体标记系统的应用B:双色荧光探针系统的应用C:化学发光信号标记系统的应用D:放射性核素标记系统的应用E:地高辛-配基标记系统的应用

单选题A15.目前确定样品中DNA(或cDNA)拷贝数最敏感、最准确的方法是实时定量pcr可定量分析样品中dna(或cdna)中的含量，且更为敏感而准确，其他方法主要用于定性或半定量分析。答案：(D)A:SouthernblottingB:普通PCRC:荧光原位杂交D:实时定量PCRE:cDNA芯片

单选题A16.酵母双杂交实验可用来检测酵母双杂交检测蛋白质-蛋白质相互作用；酵母单杂交检测蛋白质-dna相互作用；酵母三杂交检测蛋白质-rna相互作用。答案：(A)A:蛋白质-蛋白质相互作用B:蛋白质-DNA相互作用C:蛋白质-RNA相互作用D:DNA-DNA相互作用E:DNA-RNA相互作用

单选题A17.用于检测体内蛋白质-DNA相互作用的技术是染色质免疫沉淀chip是检测体内蛋白质-dna相互作用目前最为广泛应用的方法，其基本原理是在活细胞状态下，用化学交联试剂固定蛋白质-dna复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，再利用pcr技术特异性地扩增目的蛋白结合的dna片段，从而获得蛋白质与dna相互作用的信息。答案：(D)A:酵母双杂交实验B:电泳迁移率变动测定(EMSA)C:GSTpull-down实验D:染色质免疫沉淀(ChIP)E:免疫沉淀(CoIP)

单选题A18.基因组DNA文库是基因组dna文库包含一个生物的全部基因组dna信息，以一群含不同dna片段的集合形式贮存。答案：(C)A:一个转化子细胞包含所有染色体片段B:一个转化子细胞包含所有cDNA片段C:携带各种基因组DNA片段的所有转化子细胞的集合D:携带各种cDNA片段的所有转化子细胞的集合E:一个转化子细胞包含所有基因组DNA

单选题A19.PCR技术不能用于pcr技术可以在体外特异性扩增已知基因，通过对引物的改造还可以引入突变等。pcr是在dna水平上的操作，不能用于检测蛋白含量。答案：(E)A:目的基因的克隆B:基因的体外突变C:DNA的微量分析D:DNA序列测定E:蛋白质含量测定

单选题A110.印迹技术的操作程序是southernblotting、northernblotting和westernblotting分别将dna、rna和蛋白质分子经过电泳分离后，转移到nc膜或尼龙膜上使样品固定并便于进行后续杂交处理，继而通过显色或同位素自显影等方式呈现结果。答案：(A)A:电泳rarr;转移rarr;杂交rarr;显色B:杂交rarr;电泳rarr;转移rarr;显色C:电泳rarr;显色rarr;转移rarr;杂交D:转移rarr;电泳rarr;杂交rarr;显色E:显色rarr;电泳rarr;转移rarr;杂交

单选题A111.Westernblotting的基本过程包括westernblotting是通过抗原-抗体反应检测蛋白质的含量。答案：(B)A:将DNA转移到膜上，用DNA探针杂交B:将蛋白质转移到膜上，用抗体做探针杂交C:将RNA转移到膜上，用DNA探针杂交D:将DNA转移到膜上，用RNA探针杂交E:将RNA转移到膜上，用RNA探针杂交

单选题A112.有关RT-PCR(逆转录PCR)叙述正确的是逆转录pcr是将rna的逆转录反应和pcr反应联合应用的一种技术。即首先以rna为模板，在逆转录酶的作用下合成cdna，再以cdna为模板通过pcr反应来扩增目的基因。答案：(B)A:需要先进行PCR，再进行逆转录B:该反应的最初起始模板不是DNAC:合成的终产物是基因组DNAD:在进行PCR时，模板不是cDNAE:逆转录合成的产物是RNA

单选题A113.Southernblotting的基本过程是southernblotting是利用杂交反应检测dna的水平，通常以dna为探针。同理掌握northernblotting是检测rna的水平，以cdna为探针。答案：(A)A:将DNA转移到膜上，用DNA探针杂交B:将蛋白质转移到膜上，用抗体做探针杂交C:将RNA转移到膜上，用DNA探针杂交D:将DNA转移到膜上，用RNA探针杂交E:将RNA转移到膜上，用RNA探针杂交

单选题A114.通常用于高通量研究细胞在RNA水平整体基因表达谱改变的技术是rt-pcr和northernblotting是经典的在rna水平研究基因表达改变的方法，但不是高通量的方法。答案：(C)A:蛋白质芯片B:RT-PCRC:cDNA芯片D:ChIP-on-chipE:Northernblotting

单选题A115.用于检测体外蛋白质-蛋白质相互作用的技术是gstpull-down技术是最常用的标签融合蛋白结合实验，可以在体外检测直接的蛋白质-蛋白质相互作用。免疫沉淀是检测细胞内蛋白质-蛋白质相互作用，而emsa是检测体外蛋白质-dna的相互作用。答案：(C)A:组织芯片B:免疫沉淀(CoIP)C:GSTpull-down实验D:WesternBlottingE:EMSA

单选题A116.印迹技术中最常用的固相介质是硝酸纤维素(nitrocellulose，nc)膜，是核酸、蛋白质印迹最广泛使用的转移介质，对核酸、蛋白质都有很强的结合能力，而且适用于各种显色方法，包括同位素，化学发光、常规显色、染色和荧光显色；背景低，信噪比高。a、c、e凝胶和b醋酸纤维素薄膜都直接用于电泳，而不是转移后固定待杂交分子的固相介质。答案：(D)A:琼脂糖凝胶B:醋酸纤维素薄膜C:琼脂胶D:硝酸纤维素膜E:聚丙烯酰胺凝胶

单选题A117.可以用于基因及表达产物定位分析的杂交技术是常用分子生物学技术的英文简称应用广泛，应该熟悉。可用于基因及表达产物定位分析的是fish，即荧光原位杂交法(fluorescenceinsituhybridization)。答案：(D)A:SouthernblottingB:NorthernblottingC:WesternblottingD:FISHE:ChIP

单选题A118.下列关于探针的描述错误的是qpcr分为两类，一类使用探针，另一类荧光染料直接掺入，因此不用探针。答案：(E)A:标记探针是为了方便后续的检测B:用于核酸分子杂交C:用于Southernblotting或NorthernblottingD:已知探针序列，就可通过对探针的检测来判断核酸样品的相关信息E:实时定量PCR技术总是需要使用探针

单选题A119.以下关于DNA测序技术中，说法错误的是自动化测序技术主要是从sanger双脱氧链终止法衍生而来的。答案：(D)A:DNA测序是分析基因结构的核心技术B:DNA测序有双脱氧链终止法和化学裂解法C:目前自动化测序技术已广泛应用D:自动化测序技术主要是从化学裂解法衍生而来的E:自动化测序中需要用到荧光标记的ddNTP

单选题A120.RT-PCR可以用于rt-pcr将rna反转录生成互补的cdna，再经过pcr扩增并对扩增产物进行定性或相对定量的分析。因此，rt-pcr分析的是rna水平即基因表达的情况。答案：(D)A:DNA序列测定B:RNA结构分析C:蛋白质表达分析D:基因表达分析E:蛋白质氨基酸序列分析

单选题A121.一个利用poly(A)引物制备的肝细胞cDNA文库包含cdna文库是包含某一组织细胞在一定条件下所表达的全部mrna经逆转录合成的cdna序列的克隆群体，它以cdna片段的形式贮存组织细胞的基因表达信息。答案：(E)A:肝细胞的全部基因信息B:肝细胞来源个体的全部基因信息C:肝细胞的全部RNA信息D:肝细胞来源个体的全部RNA信息E:在获取肝细胞时，其所转录的mRNA信息

单选题A222.某研究生发现一个具有转录因子活性的蛋白质M在肺癌组织中表达水平升高，为了研究M蛋白是否在肿瘤发生发展中发挥关键作用及其分子机理，该研究生希望从寻找M蛋白所调控的靶基因入手分析。下述哪种方法可以作为高通量筛选M蛋白的靶基因的方法表达谱芯片可以高通量筛选靶基因。将m基因在适当的细胞系中进行过表达或敲除表达，然后比较其与对照组细胞的基因表达谱，可以初步得出m转录因子可能参与调控的靶基因。表达谱芯片的结果还要经过一系列的生物信息学的分析和实验验证，才能证明m转录因子究竟直接调控哪些靶基因，及这些靶基因是否介导m在肿瘤发生发展中的作用。答案：(A)A:表达谱基因芯片B:SouthernBlottingC:NorthernBlottingD:实时定量PCRE:荧光原位杂交

单选题A223.某课题组通过免疫组化染色，发现G基因所编码的蛋白质在结肠癌病理标本中有高表达。他们还可以通过下述哪种方法，从蛋白质水平来检测G基因是否在结肠癌组织中有高表达上述几种方法中，只有westernblotting是从蛋白质水平检测基因表达的。可以提取肿瘤组织和癌旁正常组织的蛋白裂解液，用g蛋白的特异性抗体，进行westernblot比较蛋白质表达水平。答案：(C)A:SouthernBlottingB:NorthernBlottingC:WesternBlottingD:实时定量PCRE:荧光原位杂交

多选题24.构建cDNA文库的基本流程包括答案：(ABCD)A:制备mRNAB:逆转录合成cDNA第一链C:合成cDNA第二链D:双链cDNA的分子克隆及对构建的cDNA文库进行鉴定

多选题25.用于研究DNA-蛋白质相互作用的技术有答案：(BD)A:标签蛋白沉淀B:电泳迁移率变动测定C:酵母双杂交技术D:ChIP技术

多选题26.核酸杂交时，形成杂化双链分子必须具备的条件是答案：(AC)A:变性的DNAB:单链核酸分子之间完全互补C:DNA或RNA的单链之间存在一定程度的碱基互补D:不同生物来源的DNA

多选题27.PCR技术的用途有答案：(ABCD)A:目的基因的克隆B:基因的体外突变C:DNA和RNA的微量分析D:DNA序列测定

多选题28.用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的技术有答案：(BCD)A:电泳迁移率变动测定B:标签蛋白沉淀C:酵母双杂交技术D:免疫共沉淀

共用选项题29.A:将DNA转移到膜上，用DNA探针杂交B:将RNA转移到膜上，用DNA探针杂交C:将蛋白质转移到膜上，用抗体做探针杂交D:将RNA转移到膜上，用抗体做探针杂交E:将DNA转移到膜上，用RNA探针杂交1.SouthernBlotting的基本过程包括(A)2.NorthernBlotting的基本过程包括(B)3.WesternBlotting的基本过程包括(C)

共用选项题30.A:GSTpull-downB:电泳迁移率变动测定C:基因芯片D:ChIPE:PCR1.用于研究体外蛋白质-蛋白质相互作用技术的是(A)2.用于研究体外DNA-蛋白质相互作用技术的是(B)3.用于研究体内DNA-蛋白质相互作用技术的是(D)

名词解释题31.染色质免疫沉淀(chromatinimmunoprecipitation，CHIP)答案：(染色质免疫沉淀(chromatinimmunoprecipitation，CHIP)，在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过针对蛋白特异的抗体沉淀此复合体，继而利用PCR技术特异性地富集与目的蛋白结合的DNA片段，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。ChIP法主要用于研究体内DNA与蛋白质相互作用。)

名词解释题32.基因芯片(genechip)答案：(基因芯片(genechip)，又称为DNA微列阵(DNAmicroarray)。这种技术通过在固相支持物上原位合成寡核苷酸或将许多特定的DNA探针以显微打印的方式有序固化于支持物表面，然后与待测的荧光标记样品进行杂交，杂交后对芯片进行扫描并对每一探针位点的荧光信号做出检测、比较和分析，从而得出定性并定量地得出样品的遗传信息(基因序列及表达)。)

名词解释题33.酵母双杂交(yeasttwo-hybrid)答案：(酵母双杂交(yeasttwo-hybrid)，利用转录因子激活报告基因的表达来检测蛋白质-蛋白质相互作用。真核基因转录因子通常含有DNA结合域和转录激活域，其转录激活作用需要这两个结构域共同完成。当DBD和AD分别融合蛋白质分子后，就可依靠所融合分子间的相互作用而恢复对报告基因的表达激活。)

名词解释题34.电泳迁移率变动测定(electrophoreticmobilityshiftassay，EMSA)答案：(电泳迁移率变动测定(electrophoreticmobilityshiftassay，EMSA)，蛋白质与特定寡核苷酸探针结合，将增大其分子量，使其在凝胶中的电泳速度慢于游离探针，即表现为条带相对滞后。通过这种技术，可检测蛋白质和DNA序列体外相互结合。)

名词解释题35.PCR(polymerasechainreaction)答案：(聚合酶链式反应(polymerasechainreaction，PCR)，一种体外特异性扩增已知基因的方法，应用这一技术可以将微量目的DNA片段进行指数级扩增。主要包括变性、退火、延伸三个步骤循环进行。)

简答题36.简述印迹技术的种类及应用。答案：(印迹技术主要分为以下几类：①DNA印迹(Southernblotting)用于基因组DNA的定性定量分析；②RNA印迹(Northernblotting)用于mRNA的定性定量分析；③蛋白质印迹(Westernblotting)：蛋白质的定性定量分析；④原位杂交(insituhybridization，ISH)：检测染色体、细胞和组织原位的DNA或RNA。)

简答题37.如何寻找一个转录因子直接调控的细胞内靶基因?答案：(可以考虑通过ChIP-sequencing结合表达谱芯片等方法，来寻找转录因子直接调控的细胞内靶基因。)

简答题38.常用于研究DNA与蛋白质相互作用的方法有哪些?其原理分别是什么?答案：(检测DNA与蛋白质相互作用主要有三种方法：(1)yeastone-hybrid：类似于酵母双杂交系统，但将酵母的转录因子GAL4的DNA结合结构域置换为其他