消毒灭菌技术及效果监测

关于消毒灭菌技术及效果监测2灭菌－杀灭或除去所有微生物的繁殖体和芽胞。消毒－杀灭或除去病原微生物。防腐－抑制微生物的生长与繁殖。抑菌剂或防腐剂。无菌—不含有任何的活菌一消毒与灭菌技术

基本概念第2页,共30页，2024年2月25日，星期天3二消毒与灭菌方法

1物理灭菌法热力灭菌法（干热灭菌、湿热灭菌）辐射灭菌法（紫外线、电离幅射、微波）滤过除菌法（除菌滤器、适用物品）其他超声波（机制：裂解细菌，主要用于粉碎细胞、提取抗原）干燥与低温抑菌第3页,共30页，2024年2月25日，星期天4热力灭菌法原理使微生物蛋白质，酶变性凝固；膜结构破坏微生物体内的DNA断裂，核蛋白解体。方法

干热灭菌法湿热灭菌法热力灭菌法第4页,共30页，2024年2月25日，星期天5

焚烧----最彻底的灭菌方法烧灼----直接用火焰灭菌方法如接种环、试管口、三角瓶口干烤----加热160-170℃2h

玻璃器皿、陶瓷1、干热灭菌法灭菌效果：可杀死营养体和芽胞如尸体等第5页,共30页，2024年2月25日，星期天62.湿热灭菌法高压蒸汽灭菌法（热压灭菌法）最有效的湿热灭菌法121℃15-20mim（杀芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(杀繁殖体)-2h(杀芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽100℃15-30mim(杀繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌(杀芽胞）较低的温度61℃30mim/71℃30s（杀致病菌）效果比干热好第6页,共30页，2024年2月25日，星期天7利用化学药物（消毒防腐剂）破坏微生物的化学组成、物理结构和生理活动，达到防腐灭菌目的。消毒与灭菌方法

2化学消毒法第7页,共30页，2024年2月25日，星期天

三、医院消毒效果监测范围

日常监测重点科室（手术室、层流洁净病房、ICU、产房、新生儿科、母婴同室病房、透析室、血液病房、烧伤病房、供应室、内镜室、治疗室、换药室发生医院内感染时应在发生感染的科室及相关科室采样监测

第8页,共30页，2024年2月25日，星期天四、医院消毒效果监测分类

消毒灭菌效果监测：使用中消毒液或无菌器械保存液灭菌设备（压力蒸汽灭菌器、环氧乙烷灭菌器）紫外线灯灭菌物品环境卫生学监测：空气物表医务人员手

第9页,共30页，2024年2月25日，星期天1、空气消毒效果监测

1、采样时间：消毒处理后、操作前进行采样。

2、布点及采样方法：（1）Ⅰ类环境布点、采样方法：依据《医院洁净手术部建筑技术规范》(GB50333-2002)10.3.13、手术区：需要特别保护的手术台及其周围区域。

Ⅰ级手术室的手术区是指手术台两侧边至少各外推0.9m、两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域；

Ⅱ级手术室的手术区是指手术台两侧边至少各外推0.6m、两端至少各外推0.4m后(包括手术台)的区域；

Ⅲ级手术室的手术区是指手术台四边至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域。

Ⅳ级手术室不分手术区和周边区。周边区：洁净手术室内除去手术区以外的其他区域。第10页,共30页，2024年2月25日，星期天

Ⅰ类环境采样方法

将普通营养琼脂平皿（直径为9cm）放在室内手术区和周边区各采样点处，采样高度离地面≤0.8米，采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露30分钟，盖好，于37℃培养24小时，分别计数手术区和周边区的平均菌落数。第11页,共30页，2024年2月25日，星期天Ⅱ、Ⅲ类环境布点、采样方法

依据《消毒技术规范》(卫生部2002年版)3.17.8。室内面积≤30M2，设内、中、外对角线3点，内、外点布点部位距墙壁1M处；室内面积>30M2，设4角及中央5点（双对角线），4角的布点部位距墙壁1M处。将普通营养琼脂平皿(直径为9cm)放在室内各采样点处，采样高度距地面1.5米（GB15982-1995：0.8～1.5米），采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露5分钟，盖好立即送检，于37℃培养48小时，计数平板菌落数，并计算出空气细菌菌落总数。

第12页,共30页，2024年2月25日，星期天空气采样时的注意事项

1、（消毒前）前提将放置平皿的采样台准备好。

2、开门方式：自动门,推拉式弹簧门,有把手的门。

3、行走路线（尽可能少在室内走动）动作要轻。先布皿后开盖。

4、动态环境

5、同一房间空气、物表采样，先采空气，后采物表；最好由同一人操作。

54321第13页,共30页，2024年2月25日，星期天2、物体表面消毒效果监测

1、采样时间：消毒处理后进行采样。

2、采样方法：用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转棉拭子，连续采样4个，剪去手接触部位后，投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，进行细菌菌落总数和致病菌检测。门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样第14页,共30页，2024年2月25日，星期天物体表面消毒效果监测

3、检测方法：（1）细菌总数检测：检测方法按《消毒技术规范》3.17.6.3（1）执行。小型物体表面的结果计算，用cfu/件。（2）致病菌检测：检测方法按《消毒技术规范》3.17.15原则执行。

4、结果判定

Ⅰ、Ⅱ类区域：细菌总数≤5cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

Ⅲ类区域：细菌总数≤10cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

Ⅳ类区域：细菌总数≤15cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。第15页,共30页，2024年2月25日，星期天采样注意事项

1、空气、物表采样由同一人操作。

2、物表采样应由近及远，兼顾上下中左右

3、母婴同室、血透室属Ⅱ类环境

4、样品标识一定要清楚，能朔源、追踪，以便整改。

5、致病菌包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌（产房、新生儿科、母婴同室加测沙门氏菌）

6、采样棉签在现场要做空白对照。

第16页,共30页，2024年2月25日，星期天3、手消毒效果监测

1、采样时间：消毒后立即采样。

2、采样方法：被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面积约30cm2)，并随之转动采样的棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，进行细菌菌落总数和致病菌检测。第17页,共30页，2024年2月25日，星期天手消毒效果监测检测方法

（1）细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20秒或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的45℃～48℃的营养琼脂15ml～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃温箱培养48h，计数菌落数。采样结果计算方法：细菌总数（cfu/cm2）=

（2）致病菌检测：按《消毒技术规范》3.17.15原则执行。

平板上菌落数×稀释倍数

采样面积（cm2）第18页,共30页，2024年2月25日，星期天结果判定

Ⅰ、Ⅱ类区域工作人员：细菌总数≤5cfu/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌为消毒合格。

Ⅲ类区域：细菌总数≤10cfu/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。

Ⅳ类区域：细菌总数≤15cfu/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。母婴同室、婴儿室、新生儿科及儿科病房的工作人员手上，不得检出沙门氏菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、黄色葡萄球菌。第19页,共30页，2024年2月25日，星期天

注意事项

1、分清普通卫生洗手和外科洗手卫生手消毒。外科洗手标准值?Ⅱ类环境：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌(产房、母婴同室、新生儿科加测沙门氏菌、溶血性链球菌)Ⅲ类环境：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌第20页,共30页，2024年2月25日，星期天4、使用中消毒液或无菌器械保存液监测

1、使用中消毒液有效成分的测定

2、使用中消毒液或无菌器械保存液染菌量的测定（1）涂抹法：（2）倾注法：用无菌吸管吸取消毒液1.0ml，加入到9ml含相应中和剂的无菌生理盐水采样管中混匀，分别取0.5ml放入2只灭菌平皿内，加入已溶化的45℃～48℃的营养琼脂15ml～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置20℃培养7天，观察霉菌生长情况；另一个平板置36℃±1℃温箱培养72h，计数菌落数。同时按3.17.15检测致病菌。使用中消毒液或无菌器械保存液染菌量（cfu/ml）=每个平板上的菌落数×20

结果判定：消毒液染菌量≤100cfu/ml，并未检出致病菌为合格。第21页,共30页，2024年2月25日，星期天注意事项：1、必须是使用中消毒液或无菌器械保存液。

2、要求采样后1h内检测，实际工作中由于各种原因做不到，采5ml样品放在灭菌试管中（试管中不放中和剂）带回实验室。

3、样品名称一定要标识清楚，不仅要注明采样地点，而且要注明消毒液的名称、有效浓度等，例：劲康消毒剂、0.1%健之素消毒液、80%漂白粉溶液、0.5%洗必泰等标识都是不正确的。

4、消毒液细菌菌落总数标准值≤100cfu/ml，无菌器械保存液细菌菌落总数标准值是不得检出。

5、致病菌检测包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌、溶血性链球菌。第22页,共30页，2024年2月25日，星期天5、灭菌物品消毒效果监测

1、采样时间：在灭菌处理后，存放有效期内采样。

2、采样方法：按《消毒技术规范》3.17.5.2原则执行

3、结果判定：阳性对照在24小时内应有菌生长，阴性对照在培养期间应无菌生长,如需-厌氧菌及霉菌培养管内均为澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长，判为灭菌合格；如需-厌氧菌及霉菌培养管中任何1管显浑浊并证实有菌生长，应重新取样，分别同法复试2次，除阳性对照外，其他各管均不得有菌生长，否则判为灭菌不合格。第23页,共30页，2024年2月25日，星期天灭菌物品消毒效果监测注意事项1、无菌检验应在洁净度为100级单向流空气区域内进行，最好把灭菌包带回在百级实验室打开。应严格遵守无菌操作，避免微生物污染。

2、应采有效期内的样品（高压灭菌：一般是两周；还氧乙烷：两年）第24页,共30页，2024年2月25日，星期天6、灭菌器灭菌效果监测1、监测方法：工艺监测化学监测（化学指示卡、指示胶带）生物监测2、常用灭菌器种类压力蒸汽灭菌器环氧乙烷灭菌器3、生物指示物嗜热脂肪杆菌芽胞（ATCC7953）,压力蒸汽灭菌器枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC9372）环氧乙烷灭菌器第25页,共30页，2024年2月25日，星期天7、压力蒸汽灭菌器灭菌效果监测

检测方法

生物指示菌片布放方法（《消毒技术规范》）（1）将两个嗜热脂肪杆菌芽胞菌片分别装入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。（2）下排气压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包手提压力蒸汽灭菌器：通用贮物盒代替标准试验包，贮物盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位的两支灭菌试管内，贮物盒放于手提压力蒸汽灭菌器底部。第26页,共30页，2024年2月25日，星期天8、环氧乙烷灭菌