猪肉中瘦肉精的检测法

关于猪肉中瘦肉精的检测法目录一、背景事件二、概述1、瘦肉精2、克伦特罗三、气相色谱-质谱联用法（GC-ＭＳ）检测克伦特罗1、检测方法选择2、实验具体方案3、实验结果及分析四、杜绝措施五、参考文献第2页,共21页，2024年2月25日，星期天

2011年3•15特别行动中，央视曝光了双汇“瘦肉精”养猪一事。河南省孟州市等地养猪场采用违禁动物药品“瘦肉精”饲养生猪，有毒猪肉流入双汇食品中。一、“双汇”瘦肉精事件第3页,共21页，2024年2月25日，星期天

瘦肉精是一类动物用药，有数种药物被称为瘦肉精，例如莱克多巴胺（Ractopamine）及克伦特罗（Clenbuterol）等。将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。但因为考虑对人体会产生副作用，各国开放使用的标准不一。二、概述

1、瘦肉精肉质对比第4页,共21页，2024年2月25日，星期天2.1在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗。其学名是盐酸克伦特罗，是一种平喘药。结构简式：

CAS号：37148-27-9分子式：C12-H18-Cl2-N2-O理化特性：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。2、克伦特罗第5页,共21页，2024年2月25日，星期天2.2人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心率失常、酮症酸中毒或乳酸中毒、急性中毒症状如面色潮红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢麻木等。国家标准规定，每克肉中瘦肉精含量不能超过1纳克。

2.2人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心率失常、酮症酸中毒或乳酸中毒、急性中毒症状如面色潮红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢麻木等。国家标准规定，每克肉中瘦肉精含量不能超过1纳克。

第6页,共21页，2024年2月25日，星期天三、气相色谱-质谱联用法（GC-ＭＳ）检测克伦特罗1、检测方法选择

GC-MS法优点：把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低，常用作筛选后阳性样品的确证。第7页,共21页，2024年2月25日，星期天2.1分析方法

用C18小柱和聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）整体柱进一步富集净化，经N,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生，选择离子监测方式进行气相色谱质谱测定。该方法以克伦特罗同位素(Clenbuterol-D9)为内标，内标法定量。C18小柱2、实验具体方案第8页,共21页，2024年2月25日，星期天2.2仪器与试剂仪器：岛津GCMS-QP2010Plus高速离心机（转速可达到12000r/min以上）漩涡混合器超声波清洗器氮吹仪固相萃取装置C18固相萃取小柱（100mg,3mL）混合型阳离子交换固相萃取柱第9页,共21页，2024年2月25日，星期天试剂：盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CLB）标准溶液1μg/mL内标溶液（Clenbuterol-D9，CLB-D9）1μg/mLN,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）甲醇(分析纯）20mmol/L磷酸溶液甲苯（分析纯）第10页,共21页，2024年2月25日，星期天2.3分析条件色谱柱：Rtx-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)进样口温度：220℃柱温程序：70℃(0.6min)-25℃/min-220℃(6min)-25℃/min-280℃(5min)恒线速度方式,柱流量0.9mL/min不分流进样检测波长：244nm检测离子：CLB：检测m/z86,187,243,262，CLB-D9：检测m/z95,187,262以克伦特罗(m/z86)与内标峰(m/z95)的峰面积比校准定量。第11页,共21页，2024年2月25日，星期天2.4实验流程称取(2±0.01)g己绞碎的猪肉4mL0.1mol/L盐酸旋涡振荡5min超声10min离心5min上清液C18小柱0.8mL甲醇：20mmol/L磷酸=1：1(v/v）解析，调ph=7，定容2mL毛细管整体柱0.2mL的甲醇解析+50μL的内标使用液100μL甲苯100μLBSTFA涡旋30s衍生5min300μL甲苯混匀按操作规程使GC-MS仪到工作状态，基线平直时进样质谱图第12页,共21页，2024年2月25日，星期天3.1盐酸克伦特罗的GC-MS测定

图1为衍生化克伦特罗和内标的质谱图，以克伦特罗碎片离子(m/z86)与内标碎片离子(m/z95)的浓度比值为横坐标，峰面积比值为纵坐标进行定量。

3、实验结果及分析第13页,共21页，2024年2月25日，星期天第14页,共21页，2024年2月25日，星期天3.2标准曲线

图2为空白猪肉和添加2.5μg/kg克伦特罗的猪肉样品提取液的离子流图，内标(Peak1)和克伦特罗(Peak2)的保留时间分别为9.83min和9.92min,空白猪肉样品在被测物及内标处均无干扰第15页,共21页，2024年2月25日，星期天第16页,共21页，2024年2月25日，星期天相关性分析

分别添加不同体积的克伦特罗标准溶液(1μg/mL)和50μL内标溶液于2g猪肉样品中(其中克伦特罗的质量分别为1、5、10、20、40和100ng)，样品的处理方法如上所述。以克伦特罗与内标的峰面积的比值对浓度比值进行线性回归，发现克伦特罗在0.5-50μg/kg的浓度范围内，线性关系良好，相关系数大于0.999。第17页,共21页，2024年2月25日，星期天3.3检测限及精密度

以信噪比的3倍和10倍分别计算检测限和定量限，方法检测限为0.13μg/kg,定量限为0.43μg/kg。该方法有较好的日内及日间精密度，在定量限附近，相对标准偏差小于20%（见表1），可满足分析要求。表1.克伦特罗的方法学数据第18页,共21页，2024年2月25日，星期天相关部门要对瘦肉精的流通进行严加监管，实行购买登记制度。养牲畜者自律，监管人严格监督。对责任人加大处罚力度，完善法律法规实。

四、杜绝措施第19页,共21页，2024年2月25日，星期天[1]气相色谱质谱联用仪(GC-MS)测定猪肉中的瘦肉精的含量.食品与发酵工业．2011年03期．[2]DengRuiguang，ZhangHaitang，WangZiliang，ZhongHua，ZhangGaiping．DevelopmentofGC-MSMethodforDetectingClenbuterolResiduesandConfirmationofSelf-madeStripPerformance．CHINESEAGRICULTURAL