食品中药物残留的检测专家讲座

第六章

食品中药品残留

检测

1食品中药物残留的检测专家讲座第1页第一节药品残留概述一、药品残留概念及分类

当代化畜禽生产中，普遍使用抗生素类药品。在农业生产上，抗生素能够防治病虫害，刺激植物生长，提升产量。造成了抗生素在食品中残留。

2食品中药物残留的检测专家讲座第2页

为了到达投入少许饲料而取得更多畜产品目标，往往使用激素来促进畜禽生长发育。惯用于食品动物激素为性激素含有促进生长发育、增加体重和同时发情等作用，广泛用于畜牧业生产中，经过饲料添加剂或皮下置入等方法而摄入牲畜体内，造成了肉食品中激素残留而影响人体健康。食用含有药品残留食品，使人类健康受到了极大危害，引发了世界各国关注。所以，对食品中药品残留情况，必须加以监测，以确保食用安全。3食品中药物残留的检测专家讲座第3页药品使用后，部分药品被分解或直接排出体外，另一部分将残留在畜禽体内，这种残留称为药品残留(residueofdrugs，residueofveterinarydrugs)。4食品中药物残留的检测专家讲座第4页主要残留药品有以下几类：

1．抗生素类：包含青霉素、链霉素、金霉素、土霉素、四环素、泰乐菌素等。

2．呋喃药类：包含呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃呾啶等。

3．磺胺药类；4.抗球虫药；5.激素药类；6.驱虫药类。5食品中药物残留的检测专家讲座第5页二、药品对食品污染及危害(一)药品对食品污染

1．预防和治疗畜禽疾病2．作为饲料添加剂使用3．保鲜：在食品保鲜过程中，有时加入某种抗生素以抑制微生物生长、繁殖，使用后也会对食品造成污染。6食品中药物残留的检测专家讲座第6页（二）药品残留对人体危害

药品即使有预防和治疗疾病作用，但同时对机体也产生有害作用。药品与毒物之间并无显著界限，有些毒物在适当剂量时含有治疗作用，而全部药品过量或应用时间过长，都有毒性。残留药品对人体不良影响主要有：

1．毒性作用2．使一些细菌产生抗药性3．过敏反应4．造成菌群失调5．致癌作用：现已证实残留在食品中克球粉、雌激素含有致癌作用。7食品中药物残留的检测专家讲座第7页三、各种药品使用标准（一）合理配伍用药畜禽发生疾病以后要正确诊疗，合理用药，能用一个药情况下不用各种药。（二）按国家要求范围、剂量使用药品各国政府都严格要求了各种药品使用条件。多数国家要求对生命期短食用动物禁止应用雌激素。8食品中药物残留的检测专家讲座第8页（三）使用兽用专用药品一些国家要求，凡是人类经常使用抗生素及其药品不能作为畜禽饲料添加剂。世界卫生组织不主张用链霉素饲喂动物，以免产生耐药性菌株。

（四）要有一定休药期所谓休药期是指食品动物从停顿给药到许可屠宰或它们产品许可上市间隔时间。此时间要求是依据上述物质在动物体内代谢消除率和残留量不致影响人体健康为依据。9食品中药物残留的检测专家讲座第9页第二节食品中抗生素测定抗生素种类繁多，结构复杂，测定方法各不相同。因而给检测工作带来了许多困难。抗生素测定方法进展很快。主要可分为微生物测定法，化学测定法和物理测定法三大类。10食品中药物残留的检测专家讲座第10页其中以微生物测定法应用较广。因其测定原理基于抗生素对微生物生理机能和代谢作用抑制，所用试剂数量少，仪器简单。如牛乳中TTC测定法，肉中四环素杯蝶测定法都属于微生物分析法，但这类方法测定时间较长，且结果误差较大。11食品中药物残留的检测专家讲座第11页

化学测定法和物理测定法则利用抗生素中一些基团特殊性质或反应来测定其含量分析方法。包含比色法、荧光分光光度法、气相色谱法和高效液相色谱法。

12食品中药物残留的检测专家讲座第12页一、高效液相色谱HPLC（一）高效液相色谱法特点

1．分离效能高2．选择性高3．检测灵敏度高4．分析速度快

对于高沸点、热稳定性差、相对分子质量大有机物标准上都可用HPLC进行分离、分析。当前已广泛应用于化工、食品、医药、生化、卫生、环境保护和高能化合物等生产和科研工作中。13食品中药物残留的检测专家讲座第13页二、四环素类抗生素残留量测定

食品中四环素类抗生素测定多采取微生物法。

（一）原理

样品经提取，用离子交换树脂分离，甲醇溶剂洗脱，经浓缩，残渣用Mcllvaine缓冲液溶解，经荧光判定，然后用微生物法进行定量测定。本方法最低检出量为0.05mg/kg。14食品中药物残留的检测专家讲座第14页（二）其它抗生素也可用此法进行测定，只是试验菌种不一样或培养基不一样。测定青霉素为金黄色葡萄球菌，链霉素或双氢链霉素为枯草杆菌（6633），氯霉素为卵黄色八叠球菌（9341），新生霉素为白色葡萄球菌。15食品中药物残留的检测专家讲座第15页三、链霉素残留量测定（比色分析法）

（一）原理在酸性条件下，链霉素可与二硝基苯肼反应生成黄色链霉素二硝基苯腙；多出试剂经乙酸丁酯提取除去后，于430nm波优点测吸光度，以标准曲线求出样品中链霉素含量。16食品中药物残留的检测专家讲座第16页四、鲜乳中抗生素残留量测定（TTC试验）（一）原理

当乳中含有抗生素时，标准菌株嗜热链球菌生长受到抑制，不能将指示剂2,3,5—氯化三苯基四氮唑（TTC）还原为无色。反之，当乳中抗生素不存在时，加入标准菌株，就会大量生长繁殖，而且将TTC还原为红色化合物。其红色强度与细菌数量成正比。本法对各种抗生素最低检出量：青霉素为0.004IU/mL，链霉素为0.5IU/mL，庆大霉素为0.4IU/mL17食品中药物残留的检测专家讲座第17页

（二）注意事项

1.本法正确性与菌种活力有亲密关系。如菌种活力减弱时，应屡次重复传代加强活力。2.每次检验每个样品应一式二份，另外要作阴性、阳性对照各2管，阴性对照管作无抗生素乳9mL，阳性对照管用无抗生素乳9mL加抗生素。3.水浴培养要避光，保持37℃，水面高于被检样品，判断要快速；检样经80℃水浴加热5min，要严格掌握。4.制备培养基乳要绝对无抗生素存在；操作所用试管、吸管均须经灭菌。18食品中药物残留的检测专家讲座第18页第三节食品中激素测定

因为动物性食品中性激素含量极微，所以普通测定方法受到了限制，较惯用方法有薄层色谱法、荧光分析法、气相色谱法和高效液相色谱法等。其中高效液相色谱法含有更大优越性，并有取代其它方法之势。

一、性激素总量测定（薄层色谱法）

（一）原理样品中性激素经有机溶剂提取、浓缩，在硅胶G薄层板上点样、展开后，以硫酸显色，与标准斑点进行比较，从而到达定性和半定量目标。19食品中药物残留的检测专家讲座第19页硅胶H硅胶中未加入粘合剂硅胶G硅胶中加入粘合剂石膏硅胶S硅胶中加入粘合剂淀粉硅胶HF254硅胶H中加入波长254nm荧光物质硅胶GF254硅胶G中加入波长254nm荧光物质常见几个硅胶吸附剂20食品中药物残留的检测专家讲座第20页（二）注意事项1.薄层色谱法可用于性激素判别、半定量测定以及含量测定前分离。2.因为性激素种类多，故所用溶剂系统、吸附剂、展开剂和显色剂不能一概而论。可依据详细情况，挑选效果最正确者使用。21食品中药物残留的检测专家讲座第21页

二、雌激素残留量测定（包含己烯雌酚测定）（荧光分光光度法)

（一）荧光分光光度法

1.原理

样品中雌激素经盐酸水解为甾体缀合物，用有机溶剂提取后，再经硫酸处理，在紫外光照射下，产生蓝色荧光；其激发波长542nm，发射波长560nm，依据荧光强度，可测定雌激素含量。22食品中药物残留的检测专家讲座第22页2.注意事项(1)本法测定是雌激素总量，包含雌酮、雌二醇和雌三醇。(2)操作过程中加入氢醌，可预防荧光产物氧化，促进荧光稳定性；二氯甲烷溶剂中加入对—硝基苯酚也起促进荧光稳定性作用。

(3)因为雌激素有酚羟基存在而呈弱酸性，用碳酸氢钠缓冲液（pH10.5）洗涤，可将那些强酸性物质洗掉。23食品中药物残留的检测专家讲座第23页(4)测定中用NaOH振摇，可使雌激素转入NaOH液层，而中性甾体仍留在有机相中，起到去除杂质作用。

(5)在作乙醚提取之前，加入固体碳酸氢钠调整pH至10，是乙醚定量提出雌激素关键。24食品中药物残留的检测专家讲座第24页(二）液相色谱法

1.原理

试样匀浆后，以甲醇提取过滤，注入HPLC柱中，以紫外检测器判定。于波长230nm处测定吸光度，同条件下绘制工作曲线，己烯雌酚含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，试样与工作曲线比较定量。本法适合用于新鲜鸡肉、牛肉、猪肉、羊肉中己烯雌酚残留量测定。25食品中药物残留的检测专家讲座第25页2.分析步骤（1）提取及净化：甲醇（2）色谱条件（3）绘制标准曲线（4）测定26食品中药物残留的检测专家讲座第26页

3.注意事项

（1）对主要影响原因甲醇、磷酸二氢钠、pH采取正交试验选择最正确试