细胞生物学学时

1细胞生物学学时第1页课时安排第一章绪论2课时第二章细胞膜与细胞表面3课时第三章物质跨膜运输与信号传递4课时第四章细胞质基质和内膜系统4课时第五章细胞能量转换——线粒体和叶绿体3课时第六章细胞骨架与细胞运动2课时第七章核糖体和蛋白质合成1课时第八章细胞核2课时第九章细胞增殖及其调控2课时第十章细胞分化与肿瘤2课时第十一章细胞衰老与凋亡1课时总结1课时2细胞生物学学时第2页第一章绪论（2课时）

细胞生物学研究内容和现实状况

细胞生物学发展简史

细胞基本知识概要

细胞生物学研究方法

3细胞生物学学时第3页细胞生物学研究内容和现实状况

细胞生物学是当代生命科学主要基础学科细胞生物学主要研究内容

当前细胞生物学研究总趋势与重点领域总趋势：细胞生物学与分子生物学(包含分子遗传学与生物化学)相互渗透与交融是总发展趋势。重点领域：

染色体DNA与蛋白质相互作用关系—主要是非组蛋白对基因组作用

细胞增殖、分化、凋亡相互关系及其调控

细胞信号转导研究

细胞结构体系组装4细胞生物学学时第4页细胞生物学

生命体是多层次、非线性、多侧面复杂结构体系，而细胞是生命体结构与生命活动基本单位，有了细胞才有完整生命活动。

细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律科学，它是在不一样层次（显微、亚显微与分子水平）上以研究细胞结构与功效、细胞增殖、分化、衰老与凋亡、细胞信号传递、真核细胞基因表示与调控、细胞起源与进化等为主要内容。5细胞生物学学时第5页细胞生物学发展简史从研究内容来看细胞生物学发展可分为三个层次，即：显微水平、超微水平和分子水平。从时间纵轴来看细胞生物学历史大致能够划分为四个主要阶段：第一阶段：从16世纪末-19世纪30年代，是细胞发觉及细胞知识积累阶段。第二阶段：从19世纪30-20世纪中期，细胞学说形成后，主要进行显微形态研究。第三阶段：从20世纪30年代-50年代，以细胞超微结构、核型等研究为主要内容。第四阶段：从20世纪50年代，J.Watson和H.CrickDNA双螺旋模型提出到70年代分子克隆技术成熟到当前，细胞生物学与分子生物学结合愈来愈紧密，基因调控、信号转导、细胞分化和凋亡、肿瘤生物学等领域成为当前主要研究内容。6细胞生物学学时第6页主要内容

细胞结构与功效、细胞主要生命活动：

细胞核、染色体以及基因表示研究

生物膜与细胞器研究

细胞骨架体系研究

细胞增殖及其调控

细胞分化及其调控

细胞衰老与凋亡

细胞起源与进化

细胞工程7细胞生物学学时第7页美国科学情报研究所（ISI）1997年SCI（ScienceCitationIndex）收录及引用论文检索，全世界自然科学研究中论文发表最集中三个领域分别是：细胞信号转导（signaltransduction）；细胞凋亡（cellapoptosis）；基因组与后基因组学研究（genomeandpost-genomicanalysis）。8细胞生物学学时第8页

美国国立卫生研究院（NIH）在1988年底发表一份题为《什麽是当今科研领域热门话题？》（“Whatispopularinresearchtoday？”）调查汇报中指出，当前全球研究最热门是

三种疾病：

癌症（cancer）

心血管病（cardiovasculardiseases）

爱滋病和肝炎等传染病

（infectiousdiseases：AIDS，hepatitis）

五大研究方向：

细胞周期调控（cellcyclecontrol）；

细胞凋亡（cellapoptosis）；

细胞衰老（cellularsenescence）；

信号转导（signaltransduction）；

DNA损伤与修复（DNAdamageandrepair）9细胞生物学学时第9页细胞发觉是和显微镜创造分不开。1665英国人RobertHook用自己设计与制造显微镜（放大倍数为40-140倍)观察了软木（栎树皮)薄片，第一次描述了植物细胞结构，并首次用拉丁文cellar（小室)这个词来称呼他所看到类似蜂巢极小封闭状小室（实际上只是观察到到纤维质细胞壁)。

1680荷兰人A.vanLeeuwenhoek成为皇家学会会员，一生中制作了200多台显微镜和500多个镜头。他是第一个看到活细胞人，观察过原生动物、人类精子、鲑鱼红细胞、牙垢中细菌等等。10细胞生物学学时第10页在1838－1839年，德国植物学家M.Schleidon和动物学家T.Schwann在总结前人工作基础上提出了细胞学说。“细胞学说”基本内容认为细胞是有机体，一切动植物都是由细胞发育而来,并由细胞和细胞产物所组成；每个细胞作为一个相对独立单位，现有它“自己”生命,又对与其它细胞共同组成整体生命有所助益；新细胞能够经过老细胞繁殖产生。11细胞生物学学时第11页1680荷兰人A.vanLeeuwenhoek成为皇家学会会员，一生中制作了200多台显微镜和500多个镜头。他是第一个看到活细胞人，观察过原生动物、人类精子、鲑鱼红细胞、牙垢中细菌等等。

12细胞生物学学时第12页13细胞生物学学时第13页1.1831英国人RobertBrown发觉植物细胞核。2.1832德国人？C.J.Dumortier观察了藻类细胞分裂，并认为细胞起源于原来存在细胞。3.1835德国人H.vonMolh仔细观察了植物细胞分裂，认为是植物根和芽尖极易观察到现象。4.1835法国人F.Dujardin观察动物活细胞时发觉“肉样质”（Sarcode)。5.1839捷克人J.E.Pukinye用prtoplasm这一术语描述细胞物质，“Protoplast”为神学用语，指人类始祖亚当。6.1841波兰人R.Remak发觉鸡胚血细胞直接分裂（无丝分裂）。7.1846德国人H.vonMohl研究了植物原生质，发表了“identifiesprotoplasmasthesubstanceofcells”。14细胞生物学学时第14页8.1848德国人W.Hofmeister描绘了鸭跖草Tradescantia花粉母细胞，明确表达出染色体，但他没有认识到之一主要性，40年后德国人H.vonWaldeyer因这一结构可被碱性染料着色而定名为Chromosome。9.1861德国人M.Shultze认为动物细胞内肉样质和植物体内原生质含有一样意义。他给细胞定义是："thecellisanaccumulationoflivingsubstanceorprotoplasmdefinitelydelimitedinspaceandpossessingacellmembraneandnucleus。“10.1864德国人MaxSchultze观察了植物胞间连丝。11.1865德国人J.vonSuchs发觉叶绿体。12.1866奥地利人G.Mendel发表了对豌豆杂交试验结果，提出遗传分离规律和自由组合规律。15细胞生物学学时第15页13.1868英国人T.H.Huxley在爱丁堡作题为“生命物质基础”（thephysicalbasisoflife）演讲汇报时首次把原生质概念介绍给了英国公众。14.1871德国人F.Miescher从脓细胞中分离出核酸。15.1876德国人O.Hertwig发觉海胆受精现象，其论文题目为"observethefertilizationofaseaurchinegg"。16.1879德国人W.Flemming观察了蝾螈细胞有丝分裂，于1882年提出了mitosis这一术语。以后德国人E.Strasburger(1876~80)在植物细胞中发觉有丝分裂，认为有丝分裂实质是核内丝状物（染色体)形成及其向两个子细胞平均分配，动植物受精实质上是父本和母本配子核融合，并于1984提出了Prophase和Metaphase概念。17.1882德国人E.Strasburger提出细胞质（cytoplasm）和核质（nucleoplasm）概念。16细胞生物学学时第16页

18.1883比利时人E.vanBeneden证实马蛔虫Ascarismegalocephala配子染色体数目是体细胞二分之一，而且在受精过程中卵子和精子贡献给合子染色体数目相等。19.1883比利时人E.vanBeneden和德国人T.Boveri发觉中心体。20.1884德国人O.Hertwig和E.Strasburger提出细胞核控制遗传论断。21.1886德国人A.Weismann提出种质论。22.1890德国人RichardAltmann描述了线粒体染色方法，他推测线粒体就像细胞内共生物，并认为线粒体与能量代谢相关。他还于1889年提出了核酸概念。23.1892德国人T.Boveri和O.Hertwig研究了减数分裂本质，并描述了染色体联会现象。24.1898意大利人C.Golgi用银染法观察高尔基体。17细胞生物学学时第17页25.1900孟德尔在34年前发表遗传法则被重新发觉。26.1905美国人ClarenceMcClungshowsthatfemalemammalshave2XchromosomesandthatmaleshaveanXandaY27.1908美国人T.H.Morgan以Drosophilamelanogaster为材料开始著名遗传学试验，19提出遗传染色体理论，19发表"遗传本质"（PhysicalBasisofHeredity）。1926年发表"基因学说"（TheTheoryoftheGene）28.1910德国人A.Kossel取得诺贝尔生理医学奖，他首先分离出腺嘌呤、胸腺嘧啶和组氨酸。29.1935美国人W.M.Stanley首次得到烟草花叶病毒结晶体。

30.1940德国人G.A.Kausche和H.Ruska发表了世界第一张叶绿体电镜照片。18细胞生物学学时第18页31.1941美国人G.W.Beadle和E.L.Tatum提出一个基因一个酶概念。32.1944美国人O.Avery等人经过微生物转化试验证实DNA是遗传物质。33.1945美国K.R.Porter、A.Claude和E.F.Fullam发觉小鼠成纤维细胞中内质网。34.1949加拿大人M.Bar发觉巴氏小体。35.1951美国人JamesBonner发觉线粒体与细胞呼吸相关。

36.1953美国人J.D.Watson和英国人F.H.C.Crick提出DNA双螺旋模型。37.1955比利时人C.deDuve发觉溶酶体和过氧化物酶体。19细胞生物学学时第19页38.1955美国人VincentDuVigneaud因人工合成多肽而获诺贝尔奖。39.1957J.D.Robertson用超薄切片技术取得了清楚细胞膜照片，显示暗-明-暗三层结构。40.1959年，蒋有兴（美籍华人）利用徐道觉创造低渗处理技术证实了人2n为46条，而不是48条。41.1961英国人P.Mitchell提出线粒体氧化磷酸化偶联化学渗透学说，获1978年诺贝尔化学奖。42.1961~64美国人M.W.Nirenberg破译DNA遗传密码。43.1968瑞士人WernerArber从细菌中发觉DNA限制性内切酶。44.1970美国人D.Baltimore、R.Dulbecco和H.Temin因为发觉在RNA肿瘤病毒中存在以RNA为模板，逆转录生成DNA逆转录酶而获1975共享诺贝尔生理医学奖。20细胞生物学学时第20页45.1971美国人DanielNathans和HamiltonSmith发展了核酸酶切技术。46.1973美国人S.Cohen和H.Boyer将外源基因拼接在质粒中，并在大肠杆菌中表示，从而揭开基因工程序幕。47.1975英国人F.Sanger设计出DNA测序双脱氧法。于1980年获诺贝尔化学奖。另外Sanger还因为1953年测定了牛胰岛素一级结构而取得1958年诺贝尔化学奖。48.1982美国人S.B.Prusiner发觉蛋白质因子Prion，更新了医学感染概念，于1997年获诺贝尔生理医学奖。49.1983美国人K.B.Mullis创造PCR仪，1987年发表了“SpecificsynthesisofDNAinvitroviaapolymerase-catalyzedchainreaction”，于1993年获诺贝尔化学奖。21细胞生物学学时第21页50.1984德国人G.J.F.Kohler、阿根廷人C.Milstein和丹麦科学家N.K.Jerne因为发展了单克隆抗体技术，完善了极微量蛋白质检测技术而分享了诺贝尔生理医学奖。51.1989美国人S.Altman和T.R.Cech因为发觉一些RNA含有酶功效（称为核酶)而共享诺贝尔化学奖。Bishop和Varmus因为发觉正常细胞一样带有原癌基因而分享当年诺贝尔生理医学奖。

52.1997多利羊在卢斯林研究所诞生，成为世纪末重大新闻。多利是IanWilmut领导研究小组克隆。

22细胞生物学学时第22页图1-9多利和邦妮图片来自http://www.ri.bbsrc.ac.uk/23细胞生物学学时第23页细胞基本知识概要细胞基本概念

细胞大小非细胞形态生命体——病毒及其与细胞关系原核细胞与真核细胞

图植物细胞与动物细胞24细胞生物学学时第24页各类细胞直径比较25细胞生物学学时第25页细胞是生命活动基本单位一切有机体都由细胞组成，细胞是组成有机体基本单位。细胞含有独立、有序自控代谢体系，细胞是代谢与功效基本单位。细胞是有机体生长与发育基础。细胞是遗传基本单位，细胞含有遗传全能性。没有细胞就没有完整生命。细胞基本概念26细胞生物学学时第26页细胞基本共性全部细胞表面都有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质组成生物膜，即细胞膜。全部细胞都含有两种核酸：即DNA与RNA作为遗传信息复制与转录载体。作为蛋白质合成机器─核糖体，毫无例外地存在于一切细胞内。全部细胞增殖都以一分为二方式进行分裂。

27细胞生物学学时第27页病毒基本知识

病毒（virus）——核酸分子（DNA或RNA）与蛋白质组成核酸-蛋白质复合体；依据病毒核酸类型能够将其分为两大类：

DNA病毒与RNA病毒

病毒多样性）

类病毒（viroid）——仅由感染性RNA组成；比如，马铃薯锤管类病毒

朊病毒（prion）——仅由感染性蛋白质亚基组成；1982年S．B．Prusiner在患羊瘙痒病羊体内发觉了一个蛋白质因子，证实是羊瘙痒病致病因子，他将其命名为PRION。Prusiner所以项重大发觉而于1997年取得诺贝尔奖。

对于蛋白质感染因子引发疾病，当前尚没有有效治疗办法，据报道，自1996年以来，共有106人得了疯牛病，其中仅有七人还活着。28细胞生物学学时第28页29细胞生物学学时第29页原核细胞与真核细胞遗传结构装置和基因表示比较

30细胞生物学学时第30页31细胞生物学学时第31页32细胞生物学学时第32页植物细胞与动物细胞比较

细胞壁

液泡

叶绿体

33细胞生物学学时第33页病毒与细胞在起源与进化中关系病毒是非细胞形态生命体，它主要生命活动必须要在细胞内实现。病毒与细胞在起源上关系，当前存在3种主要观点：

生物大分子→病毒→细胞 病毒

生物大分子细胞

生物大分子→细胞→病毒34细胞生物学学时第34页细胞生物学研究方法

细胞形态结构观察方法

细胞组分分析方法

细胞培养、细胞工程与显微操作技术35细胞生物学学时第35页细胞形态结构观察方法

光学显微镜技术（lightmicroscopy）

电子显微镜技术(Electromicroscopy)

扫描探针显微镜（ScanningProbeMicroscope）

扫描遂道显微镜

(scanningtunnelingmicroscope)

36细胞生物学学时第36页细胞组分分析方法

离心分离技术

细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等显示方法

特异蛋白抗原定位与定性

细胞内特异核酸定位与定性

放射自显影技术

定量细胞化学分析技术37细胞生物学学时第37页细胞培养、细胞工程与显微操作技术

细胞培养

细胞工程38细胞生物学学时第38页一、光学显微镜技术（lightmicroscopy)

普通复式光学显微镜技术

荧光显微镜技术（FluorescenceMicroscopy）

激光共焦扫描显微镜技术（LaserConfocalMicroscopy）

相差显微镜（phase-contrastmicroscope）

微分干涉显微镜（differentialinterferencecontrastmicroscope,DIC）

录像增差显微镜技术（video-enhancemicroscopy）39细胞生物学学时第39页二、电子显微镜技术

电子显微镜基本知识

电镜与光镜比较

电镜与光镜光路图比较

电子显微镜基本结构

主要电镜制样技术

负染色技术

冰冻蚀刻技术

超薄切片技术

电镜三维重构技术

扫描电镜（Scanningelectronmicroscope，SEM）SPM(Scanningprobemicroscope)40细胞生物学学时第40页三、扫描遂道显微镜

ScanningProbeMicroscope,SPM(80年代发展起来检测样品微观结构仪器)包含：STM、AFM、磁力显微镜、摩擦力显微镜等原理：扫描探针与样品接触或到达很近距离时，即产生彼此间相互作用力，如量子力学中隧道效应（隧道电流）、原子间作用力、磁力、摩擦力等，并在计算机显示出来，从而反应出样品表面形貌信息、电特征或磁特征等。

装置：扫描压电陶瓷，迫近装置，电子学反馈控制系统和数据采集、处理、显示系统。

特点：（1）可对晶体或非晶体成像，无需复杂计算，且分辨本事高。（侧分辨率为0.1～0.2nm，纵分辨率可达0.01nm）； （2）可实时得到样品表面三维图象，可测量厚度信息；（3）可在真空、大气、液体等各种条件下工作；非破坏性测量。 （4）可连续成像，进行动态观察

用途：纳米生物学研究领域中主要工具,在原子水平上揭示样本表面结构。41细胞生物学学时第41页普通复式光学显微镜技术光镜样本制作显微镜物象是否清楚不但决定于放大倍数，还与显微镜分辨力（resolution）相关。分辨率是指区分开两个质点间最小距离n=介质折射率；α=镜口角（聚焦点对物镜镜口张角），N.A.=镜口率（numericaperture）。42细胞生物学学时第42页荧光显微镜技术（FluorescenceMicroscopy）

原理：

细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但假如用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜可对这类物质进行定性和定量研究。光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜。是当前在光镜水平用于特异蛋白质等生物大分子定性定位最有力工具。

应用

直接荧光标识技术

间接免疫荧光标识技术

43细胞生物学学时第43页激光共焦扫描显微镜技术

（LaserScanningConfocalMicroscopy）

原理和应用：激光共聚焦扫描显微镜（laserconfocalscanningmicroscope）用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像，扫描激光与荧光搜集共用一个物镜，物镜焦点即扫描激光聚焦点，也是瞬时成像物点。因为激光束波长较短，光束很细，所以共焦激光扫描显微镜有较高分辨力，大约是普通光学显微镜3倍。系统经一次调焦，扫描限制在样品一个平面内，调焦深度不一样时，就能够取得样品不一样深度层次图像，这些图像信息都储于计算机内，经过计算机重新组合，就能显示细胞样品立体结构，给出细胞内各部分之间定量关系及各种结构线度。

激光共聚焦扫描显微镜既能够用于观察细胞形态，也能够用于细胞内生化成份定量分析、光密度统计以及细胞形态定量。

优点：

排除焦平面以外光干扰，增强图像反差和提升分辨率(1.4—1.7)，可重构样品三维结构。44细胞生物学学时第44页

相差显微镜（phase-contrastmicroscope）将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞

微分干涉显微镜（differential-interferencemicroscope）

偏振光经合成后，使样品中厚度上微小区分转化成 明暗区分，增加了样品反差且含有立体感。适于研究活细胞中较大细胞器图

录像增差显微镜技术（video-enhancemicroscopy）

计算机辅助DIC显微镜可在高分辨率下研究活 细胞中颗粒及细胞器运动45细胞生物学学时第45页电镜与光镜比较

显微镜分辨本事光源透镜真空成像原理LMTEM200nm100nm0.1nm可见光（400-700）紫外光（约200nm)电子束（0.01-0.9）玻璃透镜玻璃透镜电磁透镜不要求真空不要求真空要求真空1.33x10-5～1.33x10-3Pa利用样品对光吸收形成明暗反差和颜色改变利用样品对电子散射和透射形成明暗反差46细胞生物学学时第46页主要电镜制样技术

超薄切片技术用于电镜观察样本制备。通常以锇酸和戊二醛固定样品，以环氧树脂包埋，以热膨胀或螺旋推进方式推进样品切片，切片厚度20-50。示意图

负染色技术（Negativestaining）与金属投影 染色背景，衬托出样品精细结构

冰冻蚀刻技术（Freezeetching）（技术示意图） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面蛋白质颗粒和膜表面结构。

电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成含有主要应用前景一门新技术。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振分析技术相结合，是当前结构生物学（StructuralBiology）——主要硕士物大分子空间结构及其相互关系主要试验伎俩。

47细胞生物学学时第47页扫描电镜

（scanningelectronmicroscope，SEM）

原理与应用：

扫描电子显微镜于20世纪60年代问世，用来观察标本表面结构。工作原理是用一束极细电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子多少与电子束入射角相关，也就是说与样品表面结构相关，次级电子由探测体搜集，并在那里被闪烁器转变为光信号，再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束强度，显示出与电子束同时扫描图像。图像为立体形象，反应了标本表面结构。为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属微粒，重金属在电子束轰击下发出次级电子信号。CO2临界点干燥法预防引发样品变形表面张力问题。图48细胞生物学学时第48页人类血细胞SEM照片图片来自/49细胞生物学学时第49页一、离心分离技术

用途：

离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体等细胞器，以及各种大分子基本伎俩。普通认为，转速为10000-25000r/min离心机称为高速离心机；转速超出25000r/min，离心力大于89Kｇ者称为超速离心机。当前超速离心机最高转速可达80000r/min，离心力超出500Kg。

差速离心（Differencialcentrifugation）：在密度均一介质中由低速到高速逐层离心，用于分离不一样大小细胞和细胞器。

密度梯度离心：用一定介质在离心管内形成一连续或不连续密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质顶部，经过重力或离心力场作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心惯用介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。用于精细组分或生物大分子分离。50细胞生物学学时第50页二、细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等显示方法

原理：利用一些显色剂与所检测物质中一些特殊基团特异性结合特征，经过显色剂在细胞中定位及颜色深浅来判断某种物质在细胞中分布和含量。1.金属沉淀法：利用金属化合物在反应过程中生成有色沉淀，借以识别所检验物质或酶活性。如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反应产物最终生成CoS或PbS有色沉淀，而显示出酶活性。2.偶氮偶联法：酚类化合物与偶氮染料结合后能够形成耐晒染料。3.Schiff反应：细胞中醛基可使Schiff试剂中无色品红变为红色。这种反应通惯用于显示糖和脱氧核糖核酸（Feulgen反应）。51细胞生物学学时第51页4.联苯胺反应：过氧化酶分解H202。产生新生氧，后者再将无色联苯胺氧化成联苯胺蓝，进而变成棕色化合物。5.普鲁士蓝反应：三价铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成普鲁士蓝。6.Formazane反应：显示脱氢酶。7.“Nadi”反应：显示细胞色素氧化酶。8.脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。9.茚三酮反应：显示蛋白质。52细胞生物学学时第52页三、特异蛋白抗原定位与定性免疫荧光技术：依据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，并标上标识荧光素，反抗原进行定位测定技术。快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限。蛋白电泳(SDS与免疫印迹反应(Western-Blot)免疫电镜技术：能有效提升样品分辨率，在超微结构水平上研究特异蛋白抗原定位。免疫铁蛋白技术免疫酶标技术免疫胶体金技术

应用：经过对分泌蛋白定位，能够确定某种蛋白分泌动态；胞内酶研究；膜蛋白定位与骨架蛋白定位等53细胞生物学学时第53页四、细胞内特异核酸定位与定性光镜水平原位杂交技术（同位素标识或荧光素标识探针）电镜水平原位杂交技术（生物素标识探针与抗生物素抗体相连胶体金标识结合）PCR技术聚合酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR）

54细胞生物学学时第54页五、放射自显影技术

（radioautography；autoradiography)）原理及应用：其原理是将放射性同位素（如14C和3H）标识化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间放射性曝光，组织中放射性即可使乳胶感光。然后经过显影、定影处理显示还原黑色银颗粒，即可得知标本中标识物准确位置和数量，放射自显影切片还可再用染料染色，这么便可在显微镜下对标识上放射性化合物进行定位或相对定量测定。还可实现对细胞内生物大分子进行动态和追踪研究。

图55细胞生物学学时第55页六．定量细胞化学分析技术

细胞显微分光光度术（Microspectrophotometry）

利用细胞内一些物质对特异光谱吸收，测定这些物质 （如核酸与蛋白质等）在细胞内含量。 包含：

紫外光显微分光光度测定法可见光显微分光光度测定法

流式细胞仪（FlowCytometry）

主要应用：用于定量测定细胞中DNA、RNA或某一特异蛋白含量； 测定细胞群体中不一样时相细胞数量； 从细胞群体中分离一些特异染色细胞； 分离DNA含量不一样中期染色体。

56细胞生物学学时第56页一、细胞培养动物细胞培养类型：原代培养细胞（primaryculturecell）继代培养细胞（sub-culturecell）细胞株（cellstrain）正常二倍体，接触抑制细胞系（cellline）亚二倍体，接触抑制丧失植物细胞类型：

原生质体培养（体细胞培养）单倍体细胞培养（花药培养）

57细胞生物学学时第57页二、细胞工程细胞融合（cellfusion）与细胞杂交（cellhybridization）技术单克隆抗体（monocloneantibody）技术图细胞显微操作技术（micromanipulationtechnique）显微操作技术是指在高倍复式显微镜下，利用显微操作器（micrcmanipulator）进行细胞或早期胚胎操作一个方法。显微操作技术包含细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等。细胞核移植技术已经有几十年历史，Gordon等人