磁珠分离细胞技术

磁珠分离细胞技术磁珠分离细胞技术第1页磁珠分选技术免疫学+细胞生物学+磁力学基于抗体反抗原特异性识别：免疫磁珠磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连：抗体偶联磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、OligodT磁珠在高强度、梯度磁场中到达磁性分离目标：分离细胞、蛋白、核酸、细菌等磁珠分离细胞技术第2页磁珠磁力架分离柱或分离试管

MACS，Dynal，BD，StemCell，R&D…磁珠分选系统磁珠分离细胞技术第3页管式分选Dynalbeads®Dynalbeads分离试管磁力架磁珠分离细胞技术第4页磁珠分离细胞技术第5页柱式分选磁珠分离细胞技术第6页未标识细胞

先行流出MACS微珠进行磁性标识撤去磁场，将标识细胞洗出磁性铁珠在分选器作用下形成强大磁场，使含磁珠细胞悬浮在磁场中磁珠分离细胞技术第7页MACSd≈50nm，多聚糖和氧化铁组成超顺磁化微粒；可被细胞生物降解而无需解离磁珠；分离丰度极小细胞(10-8);Dynald=4.5um﹑2.8um﹑1um，多聚材料包被氧化铁超顺磁微球；均一性好；也适合用于细胞活化；BDd≈200nm，超顺磁化微粒；包被了高质量BD抗体；StemCell

管式；柱式;R&Dd≈150nm，链酶亲和素磁珠，类胶体.磁珠分离细胞技术第8页直标间标抗链酶亲和素磁珠抗生物素磁珠抗免疫球蛋白磁珠抗荧光素磁珠磁珠分离细胞技术第9页在没有直接标识微珠可选时使用自备抗体或配体磁性分选中分选或去除用多个抗体混合物标识各种细胞分选稀有细胞和抗原弱表示细胞间标扩展了分选范围磁珠分离细胞技术第10页分选策略阳性分选去除分选多重分选磁珠分离细胞技术第11页用磁珠标识目标细胞目标细胞滞留在分选柱内目标细胞被洗脱，搜集目标细胞磁性标识后，作为阳性标识组分直接分选出来。高纯度，高回收率，操作简单，尤其是富集稀少细胞。磁珠分离细胞技术第12页分选前阴性组分(未滞留在分选柱上细胞)阳性组分(滞留在分选柱上细胞)应用anti-CD19磁珠分选人外周血中B细胞磁珠分离细胞技术第13页非目标细胞磁性标识后，作为阴性组分滞留在分选柱上，未标识目标细胞被分选出来。去除不需要细胞缺乏针对目标细胞特异性抗体（如肿瘤细胞）不需要抗体和目标细胞结合，即细胞不被刺激（如T细胞、B细胞、NK细胞功效分析）需深入经过阳性选择分选细胞亚群。标识非目标细胞非目标细胞滞留在分选柱上，被去除磁珠分离细胞技术第14页生物素标识CD2,CD14,CD16,CD36,CD43,CD235a;再加入链酶亲和素标识磁珠应用去除法分选人外周血中B细胞磁珠分离细胞技术第15页先去除非目标细胞，再进行阳性分选。非目标细胞也表示用来阳性选择目标细胞抗原；要分选非常稀有细胞，先去除非目标细胞再行阳性分选，可取得高纯度目标细胞。标识去除非目标细胞标识目标细胞洗脱目标细胞磁珠分离细胞技术第16页应用：分选人外周血中CD4+CD25+

T细胞分选前去除分选后阳性分选后阴性组分阳性分选后阳性组分磁珠分离细胞技术第17页洗脱目标细胞用标识1标识目标细胞用标识2标识目标细胞去除磁珠标识洗脱目标细胞进行屡次连续阳性分选，进行新标识前先去除原来磁珠标识。可进行多参数分选。磁珠分离细胞技术第18页应用：分选人外周血中CD3+CD56+

T细胞分选前第一次阳选第二次阳选磁珠分离细胞技术第19页优点：操作简单，高效快捷，无菌和细胞状态更有确保，回收率、纯度高。缺点：不能在分选同时进行分析，分选过程中极难去除死细胞团块干扰，难于同时进行各种标识物分选。磁珠分离细胞技术第20页分选前标本处理密度梯度离心(Ficoll,Percoll)（依据情况）溶血(溶解红细胞)过滤(单个细胞)分选标本：不含有死细胞或者碎片单细胞悬液