异尖线虫病诊断规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准2005-02-17发布国家质量监督检验检疫总局本标准规定了鱼类等水生动物感染异尖线虫病的诊断要求和判定标准。本标准适用鱼类等水生动物感染异尖线虫病病原的鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修订单(不包括助误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。由异尖科线虫幼虫寄生于人或动物导致宿主各种临床表现的疾病。能引起异尖线虫病的某些种的线虫，指蛆目、异尖科，异尖亚科中某些种的幼虫感染，目前病原有异尖线虫I型和Ⅱ型幼虫、海豹线虫A型幼虫和对盲肠线虫V型幼虫。中间宿主intermediatehost幼虫寄生的宿主为中间宿主。此类线虫幼虫有不同发育阶段，不只一个中间宿主，其在发育阶段中首先寄生的宿主为第一中间宿主，异尖线虫的第一中间宿主为甲壳类，晚期幼虫寄生的宿主为第二中间宿主，海鱼类为它们的第二中间宿主。异尖线虫第Ⅲ期幼虫anlsakislarva3异尖线虫发育过程中经过两次脱皮后形成的具有特定形态结构的幼虫。鱼类异尖线虫病anlsakiasisoffish鱼类感染异尖线虫病病原。4材料和试剂显微镜(具目镜测微尺)、解剖台、手术刀、剪刀、小镊子、培养皿、酒精灯、盖玻片、载波掘尔马林，酒精(70%、80%、95%及无水酒精)、二甲苯、中性树脂、氯化钠、石蜡、Harris氏苏木素染液、0.5%伊红酒精溶液、1%盐酸酒精溶液、二甲苯石炭酸混合液。配置试剂用水符合GB/T6682要求。5操作步骤5.1临床观察观察判定待检鱼的种类，来源。检查临床症状、大体情况。测量每条鱼的质量及长度；解剖鱼体，观察病理变化，检查腹腔、胃、肠、肠系膜、肝、生殖腺等器官及肌肉组织等处有无虫体或囊包。5.3病理变化观察检查、观察消化道、腹腔及内脏等各处病理变化。5.4虫体检查用小镊子、昆虫针、手术刀轻轻取出虫体或从囊包内分离出虫体，将虫体置于0.85%生理盐水培养皿中，清除虫体周围杂物，迅速观察并计数，虫体立即用5%福尔马林(见附录A)固定，将固定之虫体置于乳酸-酚-甘油混合液中透明后，观察虫体外形及内部形态。观察虫体用带测微尺的显微镜，将虫体置于载玻片上，先在低倍镜，进一步用高倍镜观察，测量、指绘、记录虫体形态结构，必要时做显微摄影。虫体按组织切片技术参见附录B,进一步观察内部结构。6病原形态特征鉴别6.1异尖线虫(AnisakisSp,)在鱼体内发现的多为幼虫，其活体呈黄白色的长圆筒形，体长10mm～30mm不等，前端饨圆，口唇还未发育完全，头部顶端有一钻孔齿，平均高10.5μm,食管为肌肉质，中间较细，前端和后端都膨大，神经环呈黑点状位于食管前端约七分之一处。连接食管是呈圆简形的胃，黑色而不透明，其长为宽的3倍～5倍，肠管粗大，直肠显著,无胃盲囊和肠盲囊。尾部很短，末端圆钝，其正中有一小的突起，突起的表皮上有显著的横纹，雄虫有数对肛前、肛后乳突，雌虫阴门位于体前部。这些幼虫多以包囊形式寄生于寄主体内，包囊往往是一种长形套，紧包住虫体(参见图C.1、图C.2)。成虫头部的钻孔齿变为嵴状齿，唇发育明显，但没有中问唇，体长约60mm,雌虫产的虫卵(直径50pm),球形，鲷虫卵所特有的蛋白膜不明显，雄虫交合刺等长或不等长。横断面形态特征：在光滑的角皮下见多肌型肌细胞；左右侧线为双叶状顶端分开；肠管为发达而厚的圆柱状上皮构成；内腔呈Y型；在食道后半至肠管前半的腹侧左方有被认为是排泄器官的腺肾管细胞，在横断面呈香燕形(参见图C.3),异尖线虫I型和Ⅱ型的区别：前者平均体长19.0mm~36.0mm,宽0.26mm～0.50mm,后者长宽平均为(24.5mm~32.9mm)×(0.65mm～0.69mm);I型尾端有小棘而后者没有。生殖器官均未发育，排泄孔均位于两亚腹唇间。I型肠腔呈“Y”字形，截面上肠细胞数70个，肌细胞数292个~380个，Ⅱ型肠腔呈“I”、“Y”形，肠细胞数85个，肌细胞数296个～336个；I型中肠与腺胃交界面呈斜面，Ⅱ型则呈平面。6.2海的线虫[Phocamema(=Terramova)]该属幼虫主要寄生于海鱼肌肉或内脏中，分A型、B型幼虫。虫体呈黄褐色，运动活跃，受刺激卷曲呈螺旋状，头端有钻齿，胃很长，无胃盲囊，肠育囊长，仅比肌性食道略短，昆端无小较。A型虫体较长，平均长24.2(11.0～37.2)mm,宽0.57(0.3～0.95)mm;B型短，6.7(6.6～6.7)mm,宽0.15《0.14~0.16)mm,A型肠盲囊较腺胃短，B型肠盲囊较腺胃长；A型排泄细胞位于食道的稍后方至腺胃的后部之间，断面呈大香燕形，B型排泄细胞位于腺胃附近至中肠前部，断面呈米粒状；A型侧腺呈大蝴蝶状，胃腔大，B型侧腺呈小蝴蝶状，胃腔小(参见图C,1、图C.2、图C.3)。6.3对盲肠线虫(Contracaecwm)本属线虫唇间瓣发达(三个屏间瓣和唇瓣),口孔周围不具齿状的唇嵴，食道后端没有膨大部分，它的后方有一条盲管，肌肉性的食道颇长，前后的宽径略相等。肠前方伸出一条盲管，延展至食道前方(约五分之四处)。对盲肠线虫幼虫同时都具有胃盲囊和肠盲囊。雄虫后端无明显尾翼，肛前乳突多对，肛后乳突3对～4对，数目常有加多。交接刺均等，无导刺带。雌虫阴门在体前方，卵生出时没有发育的胚。对盲肠线虫V型幼虫具钻齿和极小的尾突，存在间唇，生殖器官未发育，排泄管开口于神经环后方，胃盲囊与肠盲囊之比为27:1,肠管内充大量棕黄色颗粒，虫体因而呈棕黄色，尾部长弯曲，排泄管位于腹左侧，由食道末端至体中部(参见图C.4)。6.4宫脂线虫[Hysterothylacium(=鲔蝈线虫Thynnascaris)]本属线虫具肠盲囊及胃盲囊，排泄管开口于神经环后方(参见图C.1、图C.4)。官脂线虫B型幼虫口屏发达，间唇存在，无钻齿及尾突，生殖器官已发育，排泄管开口于神经环后方，由食道后部延伸至中肠后方，肠育囊及胃育囊末端处膨大，中间细，前端位于虫体腹左侧，后端则位于腹右侧，尾端有20~30个刺。宫脂线虫C型幼虫具钻齿及尾突，间唇存在，生殖器官已发育，排泄管开口于神经环后方，排泄管位于腹左侧，局限于食道末端，尾部有15～20个小刺。7异尖线虫科4个属的Ⅲ期幼虫区别要点(见表1)表1异尖线虫科4个属的Ⅲ期幼虫区别要点(海豹线虫)(鲔蜗线虫)无有有无无有有有胃育囊无无有有长图图圆有有无有无无无有注1。对育肠线虫属与宫所线虫属幼虫区别要点在搭世孔位置及有无8结果判定主要依据对鱼类剖检，发现虫体，其特征符合者，可判断为本病阳性。剖检发现相应病变和虫体，虫体特征符合异尖线虫病病原特征者，判断为本病阳性。剖检未发现明显病变，但检出符合异尖线虫病病原特征的虫体者，判断为本病阳性。剖检发现其他线虫者，判断为相应的线虫感染。2份70%酒精6(资料性附录)B.1石蜡切片制作程序图(见图B.1)求洗B.2石蜡切片苏木素-伊红染色法B.2.1.1二甲苯1min~2minB.2.2染色B