《生物技术一》实验教案

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《生物技术一》试验教案2022/2022学年第二学期

选用教材医用生物化学试验〔自编，3版〕

生物化学试验〔上海交通高校出版社〕授课老师夏俊

职称教授

授课专业2022级生物科学本科

教研室检验系生物化学与分子生物学

蚌埠医学院教案

2022-2022年度第二学期

老师姓名：职称：系〔部〕：生物科学系教研室：试验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2022年3月4日

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2022-2022年度第二学期

老师姓名：职称：系〔部〕：生物科学系教研室：试验中心

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老师姓名：职称：系〔部〕：生物科学系教研室：试验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2022年3月4日

复习旧课：

新课导言：细胞培育概念和意义

细胞培育是生物学和医学讨论中最常用的手段之一。分为原代培育和传代培育两种。

体猎取组织或器官的一部分进行培育。

刚刚从活体组织分别出来，

状态。这一方法可为讨论生物体细胞生长，代谢，繁殖提供有力的手段，同时也为以后传代培育制造条件。举例：细胞各种生理活动如增殖的讨论

讲授新课：

试验九：胎鼠细胞原代培育

织

块培育法和消化培育法；

械

细

胞传代培育、细胞纯化和冷冻保存等试验提供材料。

二、主要器材与试剂

培育箱〔调整至

手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱〔

〔一〕细胞培育的分类启发式提问

细胞培育是生物学和医学讨论中最常用的手段之一。可

分为原代培育和传代培育两种。

〔二〕细胞原代培育的原理

原代培育：是径直从生物体猎取的细胞、组织或器官的

一部分进行培育；由于刚从活体组织分别出来，故更接

近于生物体内的生活状态。这一方法可为讨论生物体细

胞生长，代谢，繁殖提供有力的手段，同时也为以后传

代培育制造条件。

〔三〕胰酶消化法原理

将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶〔常

用胰蛋白酶〕、螯合剂〔常用EDTA〕或机械方法处理，

分散成单细胞，置合适的培育基中培育，使细胞得以生

存、生长和繁殖，这一过程称原代培育。

25分钟四、内容与操作

〔一〕组织块径直培育法

1、将孕鼠拉颈椎致死，取胎鼠带入超净台内。

2、超净台内，将孕鼠子宫剪开取胚胎。

3、用小镊子撕破胎膜，取出胎鼠，用PBS洗涤3次。

4、将胚胎转移到另一装有PBS的平皿中，用手术剪将

其

剪成小块〔1mm3〕，再用PBS液洗三次。

5、将组织块转移到培育瓶，贴附瓶壁。翻转此壁朝上，

将培育液加至瓶中，培育液勿接触组织块。

6、37℃静置3-5小时，轻轻翻转培育瓶，使组织浸入培

养液中〔勿使组织漂起〕，37℃继续培育。

〔二〕、酶消化分别细胞培育法

原理：在组织块培育法基础上，经各种酶〔常用胰蛋白

酶与胶原酶〕处理，分散成单细胞，置合适的培育基中

培育。

1、将孕鼠拉颈椎致死，取胎鼠带入超净台内。

2、超净台内，将孕鼠子宫剪开取胚胎。

3、用小镊子撕破胎膜，取出胎鼠，用PBS洗涤3次。

4、将胚胎转移到另一装有PBS的平皿中，用手术剪将

其

剪成小块〔1mm3〕，再用PBS液洗三次。

5、视组织块量加入5-6倍0.25%胰酶液，37℃中消化

20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，使细胞分别。

6、加入3-5ml培育液以终止胰酶消化作用。

7、静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加

入

到离心管中。

8、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。

9、加入培育液l—2ml〔视细胞量〕，血球计数板计数。

10、将细胞调整到5105/ml左右，转移至25ml细胞

培

养瓶中，37℃下培育。

80分钟〔三〕操作演示同学分组，进入无菌操作室详细操作。

老师巡察指导

五考前须知

1、操作前，提前将操作间和超净工作台内紫外灯打开，

消毒杀菌30分钟。

2、进操作间前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精

或

0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。

3、点燃酒精灯，操作在火焰四周进行。

4、手不能在开盖的消毒物品上方活动。

5、凡在超净台外操作的步骤，各器皿需用盖子或橡皮

塞，

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老师姓名：职称：系〔部〕：生物科学系教研室：试验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2022年3月4日

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授课对象：08生物