临床免疫学和免疫检验概论

临床免疫学和免疫检验概论

1

中枢免疫器官

2

免疫系统-免疫细胞

T细胞

3

B细胞

第02讲概论（二）

免疫系统一免疫分子

4

1.

免疫球蛋白

2.补体系统

5

3.细胞因子

6

4.黏附分子

5.CD抗原

人类白细胞分化抗原（HLA）是指血细胞在分化成熟为不同谱系、分

化的不同阶段及细胞活化过程中，出现或消失的细胞表面标记分子。采

用单克隆抗体鉴定识别的自细胞分化抗原称CD抗原。

检测CD抗原是实验室识别细胞及不同分化阶段细胞或细胞亚群最主

要的方法。

7

8

C.抵抗并清除传染性因子的能力

D.发现和消除恶变细胞的能力

E.清除体内衰老损伤细胞的能力

『正确答案JB

『答案解析J免疫的概念是指机体免疫系统具有识别和排除抗原性异

物

的能力。

机体免疫自稳功能低下，可导致A.免疫缺陷病B.免疫增殖病C.自身

免疫病D.恶性肿瘤E.超敏反应

『正确答案』C

『答案解析J免疫自稳是清除损伤或衰老细胞，功能低下时可导致自

身

免疫病。

人体内最大的外周免疫器官是A.胸腺B.骨髓C.脾D.淋巴结E.法氏

囊

『正确答案JC『答案解析J人体内最大的外周免疫器官是脾。

可非特异直接杀伤靶细胞的是A.NK细胞B.Th细胞C.Ts细胞D.Tc细

胞

9

E.TCRa

8+细胞

『正确答案』A『答案解析』NK细胞可非特异直接杀伤靶细胞。

新生儿从初乳中获得的1g主要是A.IgEB.lgDC.IgGD.SIgAE.IgM

『正确答案』D『答案解析』新生儿从初乳中获得的1g主要是SlgAo

特异性免疫效应功能不包括A.浆细胞分泌特异性抗体，执行体液免疫

功能B.Th细胞分泌细胞因子等效应因子，执行细胞免疫功能C.CTL细胞

杀伤靶细胞D.产生记忆细胞E.中性粒细胞吞噬与杀灭细菌

『正确答案JE

『答案解析J中性粒细胞吞噬与杀灭细菌属于固有免疫，是非特异性

免

疫。

粘膜伴随的淋巴组织主要的功能是A.B、T淋巴细胞栖息和增殖场所

B.各种免疫细胞的发源地C.T细胞分化成熟的场所D.B细胞分化成熟的场

所E.主要产生IgA及分泌性IgA,执行体液免疫与局部特异免疫作用

10

『正确答案JE

『答案解析J粘膜伴随的淋巴组织主要的功能是分泌性IgAo

抗原抗体反应

第01讲抗原抗体反应

抗原抗体反应

抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。

体内反应可介导吞噬、溶菌、杀菌、中和毒素等体液免疫效应；

体外反应则根据抗原、抗体性质的不同和反应条件的差别，在抗原抗

体复合物形成后表现为不同的现象。包括：沉淀反应、凝集反应等。★

抗原抗体反应(antigen-antibodyreaction)

抗原抗体反应的原理抗原抗体反应的特点影响抗原抗体反应的因

素免疫学检测技术的类型

11

抗原抗体反应的原理

一、抗原抗体结合力

抗原和抗体的结合为分子间结构互补的特异结合，是一种非共价的结

合，不形成牢固的共价键。在抗原抗体特异结合后有四种分子间引力参与

并促进其结合。

静电引力

范德华引力

氢键

疏水作用力

静电引力(electrostaticforces)范德华引力：作用最小。(vander

Waalsinteractions)氢键：最具特异性。(hydrogenbond)疏水作用

力：作用最大。(hydrophobicinteractions)

二、抗原抗体的亲和力与亲合力

亲和性(affinity)

12

抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位之间结合强度，抗原

抗体的亲和性取决于两者空间构型互补的程度。

亲合力（avidity）

指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结

合强度。与亲和性、抗体结合价、抗原的有效抗原表位有关。

Avidity

TheoverallstrengthofbindingbetweenanAgwithmanydeterminants

andmultivalentAbs

三、亲水胶体转化为疏水胶体

抗原抗体反应的特点

特异性

13

可逆性

比例性

阶段性

一、特异性

抗原与抗体结合反应的专一性

分子基础：抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性。

两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此

相应的抗血清发生反应，称为交叉反应。

14

二、比例性

抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系等价带：抗原抗体

比例合适。带现象：抗原抗体比例不合适。前带：抗体过量。后带：

抗原过量。

三、可逆性免疫复合物可在一定条件下解离为游离抗原与抗体影响

因素：抗体对相应抗原的亲合力越高，结合越牢固，越不易解离。环境

因素对复合物的影响一pH、离子强度。

15

四、阶段性

影响抗原抗体反应的因素

一、反应物自身因素

1.抗原

抗原的理化性状、表面抗原决定簇的种类和数目均可影响抗原抗体反

应的结果。

2.抗体

抗体的来源、浓度、特异性与亲和性均可影响抗原抗体反应。

二、环境因素电解质：生理盐水或缓冲液。酸碱度：pH6〜9。温度：

15℃~40℃,37℃最适。

免疫学检验技术的类型取决于：抗原、抗体的性质反应条件其他

参与成分五种主要类型：凝集反应沉淀反应补体参与的反应中和反

应标记免疫反应

【习题】

抗原抗体结合力中作用最大的是

16

A.静电引力

B.范德华引力C.氢键结合力D.疏水作用力E.分子间结合力

『正确答案』Dr答案解析』抗原抗体结合力中作用最大的是疏

水作用力。

有

用已知抗原或抗体来检测相对应的抗体或抗原，是由于抗原抗体反应

具A.特异性B.比例性C.可逆性D.亲和性E.带现象

『正确答案JA

『答案解析J已知抗原或抗体来检测相对应的抗体或抗原是由于抗原

抗

体反应具有特异性。

抗原抗体反应比例不合适出现的沉淀物减少的现象称为A.前带B.后

带C.带现象D.等价带E.等电点

『正确答案JC

『答案解析』抗原抗体反应比例不合适出现的沉淀物减少的现象称为

市4+h

现象。

有关交叉反应的描述，正确的是

A.为非特异性抗原抗体反应

17

B.由于不同抗原分子上存在共同抗原表位所致

C.对免疫学诊断结果判断没影响D.利用交叉反应进行诊断典型例子

是肥达试验E.利用交叉反应进行诊断典型例子是库姆试验

『正确答案JBf答案解析』交叉反应是由于不同抗原分子上存

在共同抗原表位。

下列关于抗原抗体反应的特点表述，正确的是A.抗原抗体反应有交叉

反应，故抗原抗体反应特异性不强B.抗原抗体反应必须抗体量略大于抗原

量C.抗原抗体反应形成的复合物又可解离为游离的抗原与抗体D.抗体与

抗原结合牢固，不易被解离E.抗原抗体反应分为两个阶段，两个阶段之间

有明显的界限

『正确答案JC

『答案解析J抗原抗体反应形成的复合物又可解离为游离的抗原与抗

体，

这是抗原抗体反应的可逆性。

免疫原和抗血清的制备

第01讲免疫原和抗血清的制备

免疫原和抗血清的制备

抗原和抗体是免疫反应的基本条件也是免疫检验的两大重要因素。抗

原是制备特异性抗体的前提条件，抗体可用于纯化抗原和检测抗原，也是

医学检验中用于疾病诊断和研究的重要物质。

免疫原的制备

免疫佐剂

抗血清的制备

抗血清的鉴定和保存

抗血清的纯化

颗粒性抗原的制备

颗粒性抗原主要是指细胞抗原和细菌抗原，制备的方法较简单，通过分

离或纯培养即可得到。

细胞抗原——绵羊红细胞。

细菌抗原菌体0抗原。

可溶性抗原的制备

18

可溶性抗原：蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、细菌外毒素等。

（一）组织可溶性抗原的粗提（二）可溶性抗原的纯化（三）纯化抗原

的鉴定

（-）组织可溶性抗原的粗提

1.组织均浆的制备：高速组织捣碎机法、研磨法；

2.细胞的破碎：反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法、表面

活性剂处理法。

（二）可溶性抗原的提取和纯化

1.超速离心法；

2.选择性沉淀法：核酸去除法、盐析法、有机溶剂沉淀法、聚合物沉

淀法;

3.凝胶过滤法;

4.离子交换层析法；

5.亲和层析法；

6.电泳法。

（三）纯化抗原的鉴定

主要包括蛋白含量测定、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定等。

半抗原性免疫原的制备

半抗原只具有抗原性而无免疫原性；如某些多肽、多糖、激素、小分

子量的药物等。半抗原与蛋白质载体或高分子聚合物结合后才有免疫原性。

（一）载体

1.蛋白质类：牛血白蛋白等；

2.多肽聚合物：多聚赖氨酸等；

3.大分子聚合物和某些颗粒：聚乙烯毗咯烷酮等。

（二）半抗原与载体的连接方法

1.物理方法：通过电荷和微孔吸附半抗原，吸附的载体有淀粉、聚乙

烯毗咯烷酮、硫酸葡聚糖、竣甲基纤维素等。

2.化学方法：利用某些功能基团将半抗原连接到载体上。如碳二亚胺

法、戊二醛法等。

（三）半抗原性免疫原的鉴定

与载体结合的半抗原数目与免疫原性密切相关。所以，应测定半抗原

与载体的比例，方法有：①吸收光谱分析法：②放射性核素标记半抗原渗

入法。

免疫佐剂

指先于抗原或与抗原同时注入体内，可增强机体对抗原的免疫应答的

物质。

佐剂的作用机制

19

①改变抗原的物理性状，延缓抗原降解和排除；②增强APC处理和

提呈抗原的能力；③刺激淋巴细胞增殖和分化；④改变抗体的产生类型；

⑤诱导迟发型超敏反应。

抗血清的制备

将制备好的免疫原按照一定的程序，免疫动物，使其产生多克隆抗体。

然后采集动物血液，分离含有抗体的血清，即为抗血清。

免疫动物的选择1.抗原来源与动物种属差异越大，免疫原性越强，免

疫效果越好。2.适龄、健康、体重合适。3.对于蛋白质抗原大部分动物

皆适合，常用的是山羊和家兔。

免疫程序

1.免疫原的剂量：由免疫原性的强弱、动物的个体状态和免疫时间确

7E。

2.免疫途径：初次免疫一般选择皮内接种，加强免疫和颗粒性抗原一

般选择静脉注射。

3.免疫间隔时间：重要因素。第1次与第2次免疫间隔时间以10〜20

天为好，第3次及以后的间隔一般为7〜10天。

动物采血法1.颈动脉采血法2.心脏采血法3.静脉采血法

抗血清的鉴定和保存抗血清的鉴定1.抗体特异性的鉴定2.抗体效

价的测定3.抗体纯度的鉴定

20

4.抗体亲和力的鉴定

抗血清的保存①2〜8c保存：用于短期保存；②冷冻保存：一般可

保存5年；③真空干燥保存:用真空冻干机进行干燥,在冰箱中可保存5〜

10年。

抗血清的纯化

纯化方法有盐析法、凝胶过滤法、离子交换层析法、亲和层析法等。

【习题】属于颗粒性抗原的是A.脂多糖B.球蛋白C.白蛋白D.DNAE.

血小板

『正确答案JE

『答案解析J颗粒性抗原包括血小板。可溶性抗原：蛋白质、糖蛋白、

脂蛋白、酶类、补体、细菌外毒素等。

颗粒性抗原免疫接种方法一般采用A.淋巴结注射B.静脉注射C.皮内

注射D.皮下注射E.肌肉内注射

『正确答案JBr答案解析』颗粒性抗原免疫接种方法一般采用

静脉注射。

要从组织和细胞匀浆中粗提某种蛋白抗原，最常用又简便的分离方法

A.盐析法

21

B.凝胶过滤法

C.离子交换层析法D.免疫亲和层析法E.免疫电泳法

『正确答案JA

『答案解析J盐析法是组织和细胞中粗提蛋白抗原最常用且简便的分

离

方法。

纯化特异性抗体时，可采用下列哪种方法除去杂抗体A.盐析法B.凝

胶过滤法C.离子交换层析法D.免疫亲和层析法E.免疫电泳法

『正确答案JD『答案解析』免疫亲和层析法能有效的去除杂抗

体。

蛋白质抗原首次免疫接种后，最好间隔多长时间再进行第二次免疫

A.7〜10天B.10〜20天C.20〜30天D.30〜60天E,3个月

『正确答案JB

『答案解析J蛋白质抗原首次免疫接种后，最好间隔10〜20天再进

行第

二次免疫。

免疫小鼠的采血方法常为A.静脉采血法B.心脏采血法C.颈动脉放血

法

22

D.断尾法或摘除眼球法

E.股动脉放血法

『正确答案JDf答案解析』免疫小鼠的采血方法常为断尾法或

摘除眼球法。

单克隆抗体与基因工程抗体的制备

第01讲单克隆抗体与基因工程抗体的制备

单克隆抗体与基因工程抗体的制备

由一个B细胞克隆产生的，针对单一表位、结构相同、功能均一的抗

体，称为单克隆抗体（mAb）。

第一代抗体：多克隆抗体（pAb）；

第二代抗体：单克隆抗体（mAb）；

第三代抗体：基因工程抗体（）

GEAb0

杂交瘤技术的基本原理

单克隆抗体的制备

基因工程抗体制备

单克隆抗体的应用

23

GeorgesKohlerandCesarMilstein,1975,discoveredhybridomatechnique

1984

24

杂交瘤技术1.小鼠骨髓瘤细胞①细胞株稳定，易于传代培养；②细

胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子；③次黄喋吟磷酸核酸核糖转

化酶（HGPRT）的缺陷株。

2.免疫脾细胞

①与骨髓瘤细胞同源的纯系小鼠；

②皮内多点注射抗原。

3.细胞融合

PEG可能导致细胞膜上脂类物质的物理结构重排，使细胞膜容易打开

而有助于细胞融合。

25

4.杂交瘤细胞的选择性培养

阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存

有限稀释法

26

有限稀释法

单克隆抗体的制备

单克隆抗体的产生

体内诱生法

体外培养法：将杂交瘤细胞置培养瓶中培养，待培养液颜色改变或细

胞过多开始死亡时，收集上清液，离心去掉碎片及细胞即可。

单克隆抗体的纯化①用半饱和、饱和硫酸钱进行沉淀，达到初步浓

缩和纯化的目的。②经过适当溶解和充分稀释后，用亲和层析法进一步

纯化。单克隆抗体的性质鉴定旧类型测定、特异性测定、抗体效价测定、

表位测定、亲和力测定。单克隆抗体的特性1.高度特异性。2.高度的均

一性和可重复性。

27

3.弱凝集反应和不呈现沉淀反应。

4.对环境敏感性。

单克隆抗体的优点

（1）杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代。

（2）可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。

（3）适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA

等。

（4）由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的

放射免疫显像和免疫导向治疗。

单克隆抗体的局限性

（1）单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范

围。

（2）反应强度不如多克隆抗体。

（3）制备技术复杂，而且费时费工，价格较高。

基因工程抗体制备

多克隆抗体和单克隆抗体来自异种动物，用于人体会引起很强的排斥

反应。应用DNA重组及蛋白工程技术对抗体编码基因按不同需要进行改造

和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体，称为基因工程抗体。

①降低甚至消除人体对抗体的排斥反应；

②分子量较小，更有利于穿透血管壁，进入病灶的核心部位；③

根据治疗的需要，制备新型抗体；

④生产成本低。

人源化抗体、小分子抗体、抗体融合蛋白、双特异性抗体、噬菌体抗

体库技术。

单克隆抗体的应用

检验医学诊断试剂

单克隆抗体广泛应用于ELISA、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪

等技术，并且单克隆抗体的应用很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。

①病原微生物抗原、抗体的检测；②肿瘤抗原的检测；③免疫细胞及其亚

群的检测；④激素测定；⑤细胞因子的测定

蛋白质的提纯

28

【习题】单克隆抗体目前效果较好的纯化方法A.亲和层析法B.凝胶

过滤法C.离子交换层析法D.超速离心法E.盐析法

『正确答案』AF答案解析』单克隆抗体目前效果较好的纯化方

法是亲和层析法。

在HAT选择培养基中可长期存活者是A.细胞多聚体B.融合的脾细胞

与瘤细胞C.融合的瘤细胞与瘤细胞D.未融合的瘤细胞E.未融合的脾细胞

『正确答案』B（答案解析』融合的脾细胞与瘤细胞能在HAT选

择培养基中可长期存活。

杂交瘤技术中的骨髓瘤细胞应具备的特点不包括

29

A.稳定和易培养

B.自身无分泌功能C.细胞无恶性变化D.融合度高E.HGPRT缺陷

『正确答案JC『答案解析J杂交瘤技术中的骨髓瘤细胞需要其

恶性变化。

小鼠骨髓瘤细胞与下列哪种细胞融合A.经过免疫的B淋巴细胞B.经

过免疫的T淋巴细胞C.未经过免疫的B淋巴细胞D.未经过免疫的T淋巴

细胞E.淋巴细胞

『正确答案JA『答案解析J小鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的B淋

巴细胞融合。

关于杂交瘤细胞特点的错误描述A.具备了双亲细胞的特点B.分泌人

源性单克隆抗体C.分泌鼠源性单克隆抗体D.体外繁殖快速E.能分泌抗体

『正确答案』B

『答案解析J杂交瘤细胞是分泌鼠源性单克隆抗体，而不是人源性单

克

隆抗体。

HAT培养基中三种关键成分为A.次黄喋岭、氨基蝶吟、胸腺喀咤核昔

B.黄喋吟、氨基蝶吟、胸腺喀咤核昔C.氨基喋岭、氨基蝶吟、胸腺喀咤核

昔

30

D.腺喋吟、氨基蝶吟、胸腺喀喔核甘

E.鸟喋吟、氨基蝶吟、胸腺喀咤核音

『正确答案JA

『答案解析JHAT培养基中三种关键成分为次黄喋岭、氨基蝶吟、胸

腺喀

咤核昔。

凝集反应

第01讲凝集反应

凝集反应

细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体在适当电解质存在下，形成肉

眼可见的凝集现象，称为凝集反应。

凝集反应的特点

直接凝集反应

间接凝集反应

凝集反应的特点

1.可定性检测，也可进行半定量检测。

2.灵敏度高、方法简便，因而在临床检验中被广泛应用。

3.分为两个阶段：①抗原抗体的特异性结合;②出现可见的颗粒凝聚。

直接凝集反应

细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当的电解质参与下可直接

与相应抗体结合出现凝集。

玻片凝集试验

31

试管凝集试验

32

间接凝集反应

将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（致敏

颗粒），然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，

出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。

间接凝集反应的类型

33

1.正向间接凝集反应

可溶性抗原致敏载体，用于检测标本中相应抗体的方法。简便、快速、

敏感性和特异性好，成本低。

2.反向间接凝集反应

选用已知特异性抗体致敏载体以检测标本中相应的抗原。

3.间接凝集抑制反应

先将可溶性抗原（或抗体）与相应的抗体（或抗原）混合，然后再加

入抗原（或抗体）致敏的红细胞，则能抑制原先的血凝现象。

4.协同凝集反应

实质上是反向间接凝集试验，但所用载体是金黄色葡萄球菌。方法简

便、34

快速、灵敏，可用于细菌、病毒、毒素及各种可溶性抗原的检测。

间接血凝试验

是以红细胞作为载体的间接凝集试验。试验结果稳定，具有简便、快

速、成本低廉等特点，其敏感性高于胶乳凝集试验和直接凝集反应。

胶乳凝集试验

是以聚苯乙烯胶乳微粒（0.8Rm）作为载体，将抗原（或抗体）与胶

乳颗粒结合成为致敏乳胶后，直接用以检测标本中相应抗体（或抗原）的

凝集反应。

明胶凝集试验

将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品

血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集。

间接凝集反应的应用

快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备，可用于抗原或抗体的

测定。

【习题】试管凝集试验的效价判断标准是依据出现肉眼可见的如下凝

集现象

A.+

B.+或++

C.++

D.+++

E.++++

『正确答案JC『答案解析J试管凝集试验的效价判断标准是依

据出现肉眼可见的++凝35

集现象。

间接凝集反应不能检测A.抗体B.AFP抗原C.伤寒沙门菌菌体抗原D.

类风湿因子E.HCG抗原

『正确答案jcr答案解析』伤寒沙门菌菌体抗原是颗粒性抗原，

属于直接凝集反应。

关于正向间接凝集试验说法错误的是A.抗原致敏载体B.用于检测标

本中抗原C.出现凝集则为阳性D.敏感性高E.特异性强

『正确答案』Bf答案解析』正向间接凝集试验用于检测标本中

抗体。

关于间接血凝试验说法错误的是A.红细胞作为载体B.不能检测抗原

C.可检测抗体D.可判断阳性反应的强弱E.应用广泛

『正确答案JBf答案解析』间接血凝试验可以检测抗原也可以

检测抗体。

关于反向间接凝集试验说法错误的是

36

A.抗体致敏载体

B.用于检测标本中抗原C.出现凝集为阴性D.敏感性高E.特异性强

『正确答案』cr答案解析』反向间接凝集试验出现凝集为阳性。

关于间接凝集抑制试验说法错误的是A.检测标本中抗原B.出现凝集

为阳性C.抗体为诊断试剂D.抗原致敏载体E.不出现凝集为阳性

『正确答案JB『答案解析』间接凝集抑制试验出现凝集为阴性。

协同凝集试验所用的载体是A.新鲜红细胞B.洗涤红细胞C.醛化红细

胞D.聚苯乙烯颗粒E.金黄色葡萄球菌

『正确答案JE『答案解析』协同凝集试验所用的载体是金黄色

葡萄球菌。

沉淀反应

第01讲沉淀反应

沉淀反应

蛋白质、多糖、毒素等可溶性抗原与相应抗体在特定条件下特异性结

合，出现的沉淀现象，称为沉淀反应。

37

38

免疫浊度测定的影响因素

1.抗原抗体比例

当反应液中抗体过量时，IC的形成随着抗原递增而增加，至抗原、抗

体最适比例处达最高峰，这就是经典的海德堡曲线理论。

2.抗体的质量

要求：抗体的特异性强、效价高、亲和力强。

R型,H型。

3.抗原抗体反应的溶液

PH6.5〜8.5,磷酸盐缓冲液。

4.增浊剂

聚乙二醇（PEG）、吐温-20,可消除抗原或抗体分子周围的电子云和水

化层，促进抗原、抗体分子靠近，结合形成大分子复合物。

39

免疫比浊方法分类

透射和散射免疫比浊法

免疫胶乳比浊法

凝胶内沉淀试验单向免疫扩散试验

40

Mancini曲线：适用大分子抗原和长时间扩散（＞48小时）的结果；

2公式：c/d=k。

Fahey曲线：适用于小分子抗原和较短时间（＜24h）扩散的结果处理，

用半对数纸画线。

公式：logc/d=ko

双向免疫扩散试验

41

免疫电泳技术免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物。1.

加快了反应速度2.集中了扩散方向3.分开了不同的蛋白

42

火箭免疫电泳

免疫电泳

免疫固定电泳

43

44

Mancini曲线

A.适用于小分子抗原，扩散时间大于48hB.适用于小分子抗原，扩散

时间小于24hC.适用于大分子抗原，扩散时间小于24hD.抗原浓度与沉淀

环直径的平方呈线性关系E.使用半对数坐标纸作图

『正确答案JD『答案解析』Mancini曲线抗原浓度与沉淀环直径

的平方呈线性关系。

单向琼脂扩散法可用于A.抗体定性B.抗体定量C.抗原定性D.抗原

定量E.抗体效价滴定

『正确答案』Dr答案解析』单向琼脂扩散法可用于抗原定量。

双向琼脂扩散试验出现多条沉淀线的原因A.抗原抗体过剩B.抗原抗

体相等C.抗原抗体缺乏D.抗原抗体不纯E.抗原抗体分子量不等

『正确答案JDF答案解析』双向琼脂扩散试验出现多条沉淀线

是由于抗原抗体不纯。

根据海德堡曲线，下列说法错误的是A.抗原过量时产生钩状效应，沉

淀物少B.抗体过量时，沉淀物也少C.抗原抗体比例适当时产生沉淀量最

多

45

D.免疫比浊法中抗原过量导致测量失败

E.免疫比浊法中抗体过量导致测量失败

『正确答案JE『答案解析J海德堡曲线免疫比浊法中抗原过量

导致测量失败。

放射免疫分析

第01讲放射免疫分析

放射免疫分析

放射免疫分析是利用放射性核素可探测的灵敏性、精确性和抗原抗体

反应特异性相结合的一种免疫技术。

放射免疫技术

放射免疫分析

免疫放射分析

放射免疫分析技术的应用

放射免疫技术

具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便

且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微

量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发

展起到了极大的推动作用。

基本类型及原理

1.放射免疫分析（RIA）

2.免疫放射分析（IRMA）

常用的放射性核素

放射免疫技术常用的放射性核素有125I、131I、3H、14c等。使用

最广泛的是125I,可采用探测Y射线的晶体闪烁计数器测量。

标志物制备及鉴定

125I以放射性碘原子通过置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以

及组胺残基上的氢原子。

（1）氯胺T（ch-T）法。

（2）乳过氧化物酶标记法。

（3）间接标记法。

放射性标志物的纯化

（1）凝胶过滤法：分子筛。

（2）离子交换层析法：极性差异。

（3）聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：电荷和直径。

（4）高效液相色谱法。

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放射性标志物的鉴定

1.放射化学纯度：大于95%。

2.免疫活性：标志物与抗体结合的能力。

3.比放射性：标志物中所含的放射性强度。

方法学评价

除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应

注意以下指标：

（1）可靠性。

（2）剂量-反应曲线。

（3）高剂量钩状效