非小细胞肺癌患者EGFR基因检测

非小细胞肺癌患者EGFR基因检测腺癌的驱动基因LCMC(美国)MSN(法国)中国日本EGFR17%13%40%50%KRAS22%28%7%15%ELM4-ALK7%2%7%5%BRAF2%2%2%1%HER21%1%NA3%PIK3CA1%1%4%NAPTENNANA6%NAMET扩增1%1%5%4%Nil46%33%29%22%KrisASCO2011PlanchardELCC2012WuJSMO2011MitsudomiJCCO2010第2页,共37页，2024年2月25日，星期天

97%的基因突变互相排斥单个突变数ALKAKTBRAFEGFRHER2KRASMEK1METNRASPIK3CAALK(38)X1211AKT(1)XBRAF(9)X1EGFR(89)X13HER2(3)XKRAS(114)X11MEK1(2)X11METAMP(3)XNRAS(2)XPIK3CA(6)XKrisMG.etal.ASCO2011,Abstract#CRA7506.

第3页,共37页，2024年2月25日，星期天4高加索人腺癌各基因构成比图第4页,共37页，2024年2月25日，星期天5中国人肺腺癌各基因构成比图第5页,共37页，2024年2月25日，星期天关于“驱动基因”近50%NSCLC驱动基因已经被发现双基因同时突变罕见对已知的靶点，已有很多上市或在研的药物驱动基因突变状态与人种、性别、病理类型、吸烟状况等有关，不同类型用药不同。第6页,共37页，2024年2月25日，星期天NSCLC基因检测的意义基因检测决定了分子靶向治疗2011年我国制定了:中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变检测专家共识第7页,共37页，2024年2月25日，星期天EGFR基因突变检测的临床意义EGFR-TKI一线治疗必须进行EGFR基因突变的检测，国内外均推荐EGFR基因突变阳性的NSCLC给予EGFR-TKI一线治疗优势人群不代表个体：尽管在女性、亚裔、不吸烟或少吸烟、腺癌EGFR基因突变发生频率较高，但在鳞癌、腺鳞癌，甚至SCLC中也可检测到EGFR基因突变。第8页,共37页，2024年2月25日，星期天EGFR基因突变检测的临床意义EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del较L858R疗效好,检测的必要性第9页,共37页，2024年2月25日，星期天EGFR基因突变检测的临床意义化疗能改变EGFR突变状态264例一线化疗的Шb~IV期NSCLC患者的血DNA标本，EGFR突变率在化疗后显著降低（23.1%对34.5%，P<0.001）提示检测更有必要，决定TKI一线治疗的时机第10页,共37页，2024年2月25日，星期天全国检测情况(基康+迪安)第11页,共37页，2024年2月25日，星期天国内EGFR基因突变率在我国未经选择的NSCLC中EGFR突变约30%，腺癌突变约42.5%，非腺癌约9.5%。2012年基康公司共收到1500名患者样品，全部完成检测，其中108名患者的样品因DNA质量不合格而终止检测，因此共有1392名患者已出检测结果，其中660名患者突变阳性（47%），其中腺癌、腺鳞癌、BAC为52%，鳞癌为14%。第12页,共37页，2024年2月25日，星期天国内EGFR基因突变率第13页,共37页，2024年2月25日，星期天铜陵检测结果（ARMS法）送检66份标本,11份无结果，55份有结果，检出率83.33%，不同标本检出率n有结果检出率手术3030100%淋巴结活检66100%气管镜13538.5%肺穿11872.7%胸腔镜11100%胸水55100%合计665583.33%第14页,共37页，2024年2月25日，星期天EGFR突变率55份有结果的标本中，29份EGFR突变阳性，突变率55.7%第15页,共37页，2024年2月25日，星期天EGFR突变类型n检出率L858R1448.3%19-del1137.9%L858R+19-del310.3%G719X14.2%合计293.5%第16页,共37页，2024年2月25日，星期天EGFR突变与病理类型突变率腺癌男44.4%(8/18)女68%(17/25)腺鳞癌男33.33%(1/3)女100%（1/1）鳞癌男14.3%(1/7)女50%(1/2)合计55.7%(24/42)第17页,共37页，2024年2月25日，星期天EGFR基因突变检测的一般原则为使患者尽可能地从最有效的治疗中受益，所有NSCLC，只要条件许可，都应进行EGFR突变的检测，特别是肺腺癌。第18页,共37页，2024年2月25日，星期天EGFR基因突变检测标本肿瘤部位的新鲜组织、活检组织、手术切除标本和细胞学标本均可用于EGFR突变的检测。理想的标本，需保证200～400个肿瘤细胞（文献报道大于100个即可）第19页,共37页，2024年2月25日，星期天检测标本冰冻组织外科手术标本：最好标本，可获得高质量肿瘤DNA，取得可靠检测结果---广泛使用穿刺活检、支气管镜标本：量少，但肿瘤DNA质量仍好，获得较可靠检测结果---使用受限第20页,共37页，2024年2月25日，星期天检测标本固定包埋组织外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片段化，但仍获得可靠检测结果---使用受限支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。---极度受限第21页,共37页，2024年2月25日，星期天检测标本淋巴结标本也可——淋巴结标本中EGFR突变能否反映原发灶中EGFR状态？外周血、癌性胸水、经支气管细针穿刺标本有研究也有阳性结果外周血标本：血浆中游离DNA（cfDNA）浓度变化很大（10~1200ng/ml）,cfDNA片段很短（180bp），可能多由凋亡产生，肿瘤释放的cfDNA在总cfDNA中的含量不稳定（3%~93%）胸水可以做——前景很好第22页,共37页，2024年2月25日，星期天标本的处理新鲜组织（手术、穿刺、支纤镜下活检样本等）含有肿瘤组织50%以上；重量≥10ｍg（约米粒大小，尽量提供所有穿刺样本），经PBS或生理盐水冲洗干净。取癌组织的中心位置组织块，切至厚度在0.5cm以下，浸没于75～100%的乙醇中60分钟以上；可在4℃冰箱暂时保存。送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。第23页,共37页，2024年2月25日，星期天标本的处理癌性胸水脱落细胞尽量收集更多胸水，离心后去掉上清，沉淀物必须>1毫升。如需长途运输，加入乙醇浸泡60分钟以上。为符合托运要求，可付运前可离心后倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保3天内到达。第24页,共37页，2024年2月25日，星期天EGFR检测方法目前公认有两种：测序法和ARMS法（等位基因特异PCR+荧光探针）第25页,共37页，2024年2月25日，星期天EGFR检测方法测序法ARMS法敏感度10~30%(变异)1~0.1%(变异)发现突变已知和未知已知石蜡包埋组织成功率低高假阳性（交叉污染）多少假阴性多少检测流程复杂漫长，污染多简单快速仪器成本高低试剂成本低略高第26页,共37页，2024年2月25日，星期天EGFR检测方法北京协和张静报道：82例NSCLC直接测序法中24例无结果，ARMS法均有结果，且16例检测到变异中华病理学杂志，2008,37（5）有结果变异率测序法70.7%（58/82例）43.1%(25/58例）ARMS法100%（82/82例）51.2%(42/82例）第27页,共37页，2024年2月25日，星期天

关于胸水EGFR突变的检测第28页,共37页，2024年2月25日，星期天CancerSci.2006;97(7):642-8.IntJCancer.2006;119(10):2353-8.ChangGungMedJ.2006;29(4):373-9.BrJCancer.2006;95(10):1390-5.JCancerResClinOncol.2010;136(9):1341-7.国内外胸水标本EGFR检测的研究作者国家/地区病例数EGFR突变率（%）KimuraH日本2433%SohJ日本6126%HungMS台湾2941%KimuraH日本4325.6%JianG中国3228.1%第29页,共37页，2024年2月25日，星期天用胸水检测肿瘤EGFR突变需要敏感方法用胸水中细胞及无细胞液均可检测EGFR突变，且检出率基本相同目前缺少胸水与肿瘤组织直接对比（配对样本检测）数据，故对其敏感度与特异性尚无结论第30页,共37页，2024年2月25日，星期天胸膜转移和胸水的对比研究本研究的目的：探索胸腔积液与胸膜转移灶EGFR突变检测的一致性，从而判断当存在胸膜转移灶时，胸液EGFR基因突变状态检测的价值。收集2011年4月-2012年12月间就诊于上海长海医院呼吸科符合入组条件患者的胸液标本及相应的胸膜转移病灶组织，共35对样本。第31页,共37页，2024年2月25日，星期天研究步骤胸膜转移灶样本采集电子胸腔镜在局麻下进行胸腔镜检查术镜下见病灶后以活检4-6块组织，10%中性福尔马林固定，后包埋成蜡块每例蜡块切取10-12片5μm厚连续切片，切片在37℃烘箱内烤片3h后常温保存第32页,共37页，2024年2月25日，星期天研究步骤胸腔积液样本采集每例患者同时收集胸水100-200ml，常温静置30min后取上清15ml，-80℃保存，为待检测的胸液上清；在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；每例蜡块切取10-12片5μm厚连续切片，切片在37℃烘箱内烤片3h后常温保存。第33页,共37页，2024年2月25日，星期天胸膜活检组织EGFR突变状况病人数EGFR突变突变率%P男性18633.30.094女性171164.7有吸烟史101100.007无吸烟史251664第34页,共37页，2024年2月25日，星期天胸液沉淀与相应胸膜转移灶EGFR突变的比较

胸膜组织EGFR突变胸液沉淀EGFR突变+-合计+12416-2810合计141226符合率为73.1%第35页,共37页，