版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
胚胎在体外的维持第六章胚胎在体外的维持动物繁殖学双语教学Maintaining维持embryosinvitro
Chapter6Embryosderive得自nutrientsfromthefluidinwhichtheyarebathed;moreover,ofperhapsmoreimportance,embryosdependontheambient周围环境
fluidtomaintaintheirphysiologicalintegrity完整性.第2页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Todate,nochemicallydefinedmediumhasbeenformulated阐明tosupportnormaldevelopmentofbovineembryossatisfactorilyforlongerthanabout24hours.第3页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学However,severalmediaarecommerciallyavailable(orcanbepreparedeasily)thatadequatelymaintainembryosfortheusualintervalbetweencollectionandtransfer.Forlongerperiods,cryopreservation低温贮藏
isrecommended.第4页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学STORAGECONDITIONSForshortperiodsofculture,thenutrientpropertiesofthemediumarefarlesscriticalthanpH,osmolality,temperature,sterility,andlackoftoxicity.第5页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Anembryo'srangeoftoleranceforthesepropertiesisnarrow.Inadequate不充分的controloftheseaspectsofcultureaccountsformanyfailedtransfers.Inaddition:embryosaredamagedifexposedtoexcesslight(e.g.microscopelights)forprolongedperiods,butnormallightingordaylightintheworkareaisnotharmfulifembryosarenotexposedformorethanhalfanhour.第6页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Bodytemperatureofcattleis39℃,andforcertainpurposesthistemperalureisappropriate.However,forroutine程序commercialembryotransferwedonotrecommendstorageabove37℃becausethermometers温度计,eventhoseonincubators孵卵器,arefrequentlyincorrectby1℃or2℃.Culturingembryosat41℃isextremelydamaging,whereasstoringthemforupto12hoursbetween18℃and37℃isnot.第7页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学MEDIAThesimplestmediumissterilesaline(9gmNaCl/litreofsterilized,deionized脱离子ordistilledwater).第8页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Salinewillnotsupportembryonicdevelopment,butwillkeepembryosforafewhours;itisbettertousesalineandtransferembryosquicklythantouseamorecomplexmediumwithoutaproperbuffering缓冲(作用)system.第9页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Moreover,salinecanbesteam-sterilized(atleast30minutesat121℃underapressureof104kilopascals千克力,)ifa0.22-gmbiologicalfiltrationsystemisnotavailable.Aseriousproblemwithsaline,however,isthatembryoswillfloat漂浮orsticktoplasticorglassunlessamacromolecule高分子suchasbovineserumalbumin(BSA)orserumisadded,bothofwhichrequiremembranefiltrationforsterilization.BSAandserumaresterilewhenpurchased.
第10页,共40页,2024年2月25日,星期天TABLE3Recommendedcultureconditiongs第11页,共40页,2024年2月25日,星期天第12页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Formostapplications,werecommendamodifiedDulbecco'sphosphatebufferedsaline(PBS).Itiseasytousebecauseitdoesnothavetobeequilibratedandmaintainedinanatmosphereof5percentCO2inair.第13页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Itcanbepreparedfromstockreagents(Table4)orpurchasedineitherready-to-useorconcentratedform,whichmustbedilutedwithsterile,deionized脱离子剂ordistilledwater.第14页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Afrequenterrorisfailuretodiluteconcentratedmedium;embryoscontractmarkedlywhenexposedtothehighosmolality同渗重摩.CommerciallyavailableDulbecco'sPBSdoesnotusuallycontainantibiotics,sodiumpyruvate丙酮酸盐(或酯),glucoseormacromolecules高分子.
第15页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学
Theleastimportantingredient因素istheNapyruvate丙酮酸钠;neitherNapyruvatenororganismsglucoseisneededformostapplications.TheCaC12andMgSO4canalsobeeliminated排除ifembryosaretobekeptinvitro在生物体外onlyashorttime.Iftheseareomitted漏检,
osmolality同渗重摩shouldbeadjustedbyaddingextraNaC1.第16页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学OthermediausedtoculturebovineembryosincludeTissueCultureMedium-199(TCM-199),Ham'sF-10medium,andBrinster'sMouseOvaCultureMedium-3(BMOC-3).Allofthesearecommerciallyavailable.TCM-199withHank'ssaltsdoesnotdependonCO2forbuffering,butTCM-199withEafie'ssaltsaswellasHam'sF-10andBMOC-3mustbemaintainedunderanatmosphereof5percentCO2inair.第17页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学MACROMOLECULARSUPPLEMENTSSupplementationofmediawithalargeproteinmoleculedecreasessurfacetension张力的,whichreducesthetendencyoftheembryotofloat漂浮oradheretoplasticorglass,andhelpstoinactivate阻止活动heavymetalsandothertoxins.第18页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学However,macromoleculesderivedfromserumarealsoapossiblevector带菌者forviralinfectionofembryos.BSAandbovineserumarecurrentlyrecommendedsourcesofmacromolecules.Polyvinyl乙烯聚合物alcoholandpolyvinylpyrrolidone吡咯啉arebeingstudiedaspossiblenon-biologicalmacromoleculestocircumventthedangerofinfection.第19页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学ThesemacromoleculesdonotfunctionaswellasBSAinreducingsurfacetensionorchelating螯合toxins.BSA(FractionV)shouldbeaddedtomediumjustbeforeuseataconcentrationof0.05-0.1percentforflushingand0.4percentforculture.第20页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Thepowdershouldbepouredverygently逐渐地onthesurfaceofthemediumandbeallowedtodissolve溶解forabout20minuteswithoutstirring活跃的orshaking摇动,(otherwiseittums小丘intoaglutinousblob粘性水滴的ormakesthemediumunusablyfrothy空洞的).第21页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学AftertheBSAhasdissolved,thecontainershouldbeinvertedgentlyfiveorsixtimestomixintheBSAcompletely.Themediumshouldthenbesterilizedbypassagethrougha0.22-gbacteriologicalfilter.PurertypesofBSAarealsoacceptable.BSAcanalsobepurchasedasanaqueoussolution,e.g.7percentBSAinwater.第22页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Ifserumisused,steer向...前进orcalfbloodshouldbeharvestedintosterile,sealablecontainersdirectlyfromthevein(toavoidcontaminantsfromskinandhair).Aftercoagulation凝结物,clots血(凝)arecutevery2-3cmwithasterileknife,andthebloodstoredovernightat5℃.第23页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Clotsarethenfilteredoutandtheserumcentrifugedat2000Xgfor12-15minutes.Thesediment沉淀物isdiscarded可废弃的andthesupernatant浮在表面的
recentrifuged换发.Thisstepisrepeatedonceagain.Thefinalsupematantissterilizedbypassagethrougha0.22-gbacteriologicalfilterintosterilecontainersofconvenientsize.第24页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Inordertoinactivate,阻止活动theproteincomplement,whichcanbetoxictoembryos,serummustbetreatedina56℃waterbathforexactly30minutesaftertheserumhasreached56℃.第25页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Serumcanbefrozenandstoredforuptoeightmonthsprovidedthatthecontainersaretightlysealed.Forqualitycontrol,onealiquotfromeachbatchofserumshouldbeincubatedovernightinasterile,sealedcontainerat37℃andexaminedthenextdayforbacterialcontamination.第26页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Forsomesituations,suchasinternationalmovementofembryosormaintenanceofspecific-pathogen-freeherds,additionalsterilizationofserumbygamma微克irradiation放射
isrecommended(ManualoftheInternationalEmbryoTransferSociety,1987).Heat-inactivated,sterilizedserumisaddedtomediuminsteadofBSAataconcentrationof0.5-1percentforflushingand10percentforstorage.第27页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学CONTAINERS容器Embryosshouldbestoredinsmall(<5ml),sterile,transparent透明的,sealable密封性能,inert惰性的container.第28页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Smalltesttubes,Petridishes陪替氏培养皿ormulti-wellplatesareconvenientforroutineuse(Figure13),butsmalltesttubesarerecommendedifembryosmustbemovedanydistancebeforeloading装填intostraws.第29页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Iftheembryosaretobestoredinuncoveredcontainers/ormorethan20minutes,however,themediumshouldbecoveredwithathinlayerofnon-toxicparaffin石蜡oiltopreventevaporationandcontaminationandtoregulatetherateofgasexchangebetweenthemediumandthesurroundingatmosphere.第30页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Paraffinoil石蜡canalsobeusedwithothertypesofcontainersandisrecommendedifsealablecontainersarenotused.第31页,共40页,2024年2月25日,星期天FIGURE13
Left:Plasticmulti-wellplatewith16x17-mmwells(lidtoleft)第32页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Exceptwhiletheyarebeingmanipulated,embryosshouldbestoredinadark,dust-freeincubatororcabinet(e.g.arefrigeratororanicechestwithatightly-fittinglidsetatroomtemperatureor37℃).第33页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学PIPETTES吸移管Manydevices装置,havebeenusedtomanipulateembryos.StandardPasteurpipettesaremuchtoolargeandthetipsrequirefirepolishingtopreventdamagetoembryos.第34页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学WeprefertomakeourownpipettesfromPyrex耐热玻璃glasstubingwitha4-mmoutsidediameter.Glass,in15-cmlengths,isheatedinthecentrewithaBunsenbumer本生灯andpulled拉tomakeanoutsidediameteroflessthan1mm.第35页,共40页,2024年2月25日,星期天动物繁殖学双语教学Thisisthenscoredwithadiamondpencilandbrokentomaketwopipettes.Allendsa
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 2024-2029年中国分析测试行业市场现状分析及竞争格局与投资发展研究报告
- 2024-2029年中国几丁质酶行业市场现状分析及竞争格局与投资发展研究报告
- 2024-2029年中国冻肉切片机行业供需分析及发展前景研究报告
- 2024-2029年中国冷离子喷雾机市场发展分析及市场趋势与投资方向研究报告
- 2024-2029年中国冷冻毛豆仁行业市场现状分析及竞争格局与投资发展研究报告
- 2024-2029年中国冰球行业发展趋势及发展前景研究报告
- 2024-2029年中国农机行业发展分析及发展前景与投资研究报告
- 2024-2029年中国农业旅游行业发展分析及发展前景与投资研究报告
- 2024-2029年中国养老机构行业竞争分析及发展前景预测报告
- 2024-2029年中国公路运输行业投资分析及前景预测报告预测
- 营养与健康知到章节答案智慧树2023年海南工商职业学院
- 2023压力容器设计审核人员考试题库-2
- 电路(上海电力大学)知到章节答案智慧树2023年
- 生活中的金融学智慧树知到答案章节测试2023年山东理工大学
- 2023年春季高考机电专业知识高考题整理版
- 王琦中医体质分类量表
- GB/T 20632.3-2022电气用钢纸第3部分:平板钢纸
- GB/T 34539-2017氢氧发生器安全技术要求
- 八下动词过去式和过去分词默写
- 小学英语逆向教学设计策划课件
- 全国计算机等级考试一级计算机基础MS+Office应用真题1(含答案)
评论
0/150
提交评论