分子体外诊断检验+福尔马林固定及石蜡包埋组织检验前过程的规范+第3部分：分离dnagbt+422

《分子体外诊断检验福尔马林固定及石蜡包埋组织检验前过程的规范第3部分：分离dnagb/t42216.3-2022》详细解读contents目录1范围2规范性引用文件3术语和定义4通则5实验室外部5.1标本采集5.2运送要求6实验室内部contents目录6.1关于标本接收的信息6.2标本/样品的福尔马林固定6.3标本的病理学评估和样品的选择6.4冷冻样品的固定6.5脱钙6.6处理及石蜡包埋6.7贮存要求6.8DNA的分离contents目录6.9分离DNA的数量和质量评估6.10DNA的贮存附录A(资料性)贮存温度对FFPE组织块DNA完整性的影响参考文献011范围01021.1适用对象涉及的样本类型包括但不限于手术切除、活检、细胞学样本等。本标准适用于从福尔马林固定及石蜡包埋组织中分离DNA的体外诊断检验前过程。样本的采集、运输、接收、处理、储存等环节均应符合本标准要求。适用于医疗机构、独立实验室、科研机构等开展相关检验的部门。1.2适用环节定义了与福尔马林固定、石蜡包埋、DNA分离等相关的术语和定义。明确了本标准中使用的术语和定义的内涵和外延，避免歧义。1.3术语和定义03促进了相关领域的技术进步和标准化发展。01规范了福尔马林固定及石蜡包埋组织检验前过程中分离DNA的操作步骤和要求。02提高了DNA分离的质量和效率，为后续的体外诊断提供了可靠的样本基础。1.4标准的目的和意义022规范性引用文件GB/T20466-2006临床实验室定量测定室内质量控制指南GB/T22576.1-2018医学实验室质量和能力的要求第1部分：通用要求GB/T30120-2013临床实验室管理学概论引用标准福尔马林固定使用福尔马林溶液对组织进行固定的过程，以保持其形态和结构。石蜡包埋将固定后的组织嵌入石蜡中，以便于切片和后续处理。分离DNA从福尔马林固定及石蜡包埋的组织中提取DNA的过程。术语和定义123福尔马林固定和石蜡包埋的过程能够使组织保持稳定的形态和结构，有利于后续的切片和处理。分离DNA的方法通常采用特定的化学试剂和酶处理，以破坏细胞壁和细胞膜，释放DNA分子。通过离心、洗涤等步骤，可以进一步纯化提取的DNA，以去除杂质和抑制剂。方法原理福尔马林固定液用于固定组织的化学试剂，通常为甲醛溶液。石蜡用于包埋组织的材料，具有良好的塑性和稳定性。分离DNA试剂包括裂解液、蛋白酶K、洗涤液等，用于提取和纯化DNA。试剂和材料033术语和定义分子体外诊断检验是一种在实验室环境下进行的诊断方法，通过对人体样本（如血液、组织等）中的核酸、蛋白质等生物标志物进行检测和分析，以获取有关疾病或健康状况的信息。3.1分子体外诊断检验福尔马林固定是指使用福尔马林溶液（一种含有甲醛的水溶液）对组织样本进行处理，使其保持原有的形态结构，便于后续的切片和观察。福尔马林固定是组织病理学检验中常用的一种样本处理方法。3.2福尔马林固定石蜡包埋是指将经过固定和处理后的组织样本嵌入到石蜡中，制成石蜡块，以便于后续的切片和染色。石蜡包埋是组织病理学检验中制备组织切片的重要步骤之一。3.3石蜡包埋分离DNA是指从生物样本中提取出DNA分子的过程。在分子体外诊断检验中，分离DNA是获取有关疾病或健康状况的遗传信息的关键步骤之一。常用的DNA分离方法包括酚/氯仿抽提法、离心柱法等。3.4分离DNA044通则4.1适用范围本部分规定了从福尔马林固定及石蜡包埋组织中分离DNA的检验前过程，包括样本的采集、运输、接收、储存和处理等环节。本部分适用于分子体外诊断领域，特别是基于PCR等分子生物学技术的DNA检测。福尔马林固定使用福尔马林溶液对组织进行固定，以保持其形态和结构，便于后续处理和分析。石蜡包埋将固定后的组织嵌入石蜡中，以便于切片和染色等操作。分离DNA从生物样本中提取DNA分子的过程，包括裂解细胞、去除蛋白质和其他杂质等步骤。4.2术语和定义样本采集应遵循无菌操作原则，避免污染和损伤。采集的样本应尽快送至实验室，运输过程中应保持低温并避免反复冻融。4.3样本采集与运4.4样本接收与储存实验室在接收样本时应进行登记和检查，确保样本的完整性和符合要求。样本在储存过程中应保持稳定性和可溯源性，避免混淆和误用。样本处理前应进行充分的匀浆和裂解，以提高DNA的提取效率。实验室应建立严格的质量控制体系，确保检验结果的准确性和可靠性。包括试剂耗材的质量控制、仪器的校准和维护、室内质控和室间质评等措施。同时，实验室还应定期对检验过程进行回顾和分析，持续改进和优化检验流程。4.5样本处理与质量控制055实验室外部样本应被正确标识，并包含足够的信息以供追踪和记录。接收样本时应检查样本容器是否完整、无泄漏，并确认样本类型与申请单一致。接收人员应记录样本接收时间、状态等信息，并签字确认。5.1样本接收样本应在适当的温度和湿度条件下运输，以确保样本的完整性和稳定性。运输过程中应避免剧烈震动和光照，以防止对样本造成损害。运输容器应具有足够的强度和密封性，以防止泄漏和污染。5.2样本运010203实验室应建立样本处理前的准备程序，包括样本的登记、编号、分类和储存等。样本应在规定的时间内进行处理，以确保检验结果的准确性和可靠性。实验室应具备处理特殊样本的能力，如感染性样本、易燃易爆样本等。5.3样本处理前的准备实验室应配备必要的环保设施，如通风橱、废气处理装置等，以确保实验室环境符合相关标准和要求。同时，实验室应定期对环保设施进行检查和维护，确保其正常运行。实验室应建立完善的安全管理制度，包括化学试剂管理、设备操作规范、防火防盗等措施。实验室人员应接受安全培训，了解并遵守实验室安全规定。5.4实验室安全与环境保护065.1标本采集根据检测需求选择合适的采集器具，如手术刀、剪刀、镊子等。确保采集环境的清洁度，避免污染标本。采集人员应接受专业培训，熟悉采集流程和注意事项。5.1.1采集前准备采集时应避免对组织造成挤压、拉伸等机械性损伤。采集的组织块应大小适中，便于后续处理。对于不同类型的组织，应采取不同的采集方法，以确保采集到足够的细胞数量。5.1.2采集过程采集后应立即将标本放入适当的容器中，并加入适量的固定液。标本应尽快送往实验室进行处理，避免长时间放置导致细胞自溶或腐败。实验室接收标本后应进行登记和核对，确保标本信息的准确性。5.1.3采集后处理采集过程中应严格遵守无菌操作原则，避免污染标本。对于疑似有传染性的标本，应采取特殊的防护措施，确保采集人员的安全。采集前应详细询问患者的病史和用药情况，以排除可能的干扰因素。5.1.4注意事项075.2运送要求VS应使用防漏、密封的容器进行运送，确保样本在运输过程中不会发生泄漏或污染。容器外应标明样本信息，包括样本名称、来源、采集时间等，以便识别和追溯。5.2.1运送容器福尔马林固定及石蜡包埋组织应在室温下运送，避免过高或过低的温度对样本造成影响。如需长时间运输或跨越较大温差地区，应使用温度控制设备，确保样本在适宜的温度范围内。5.2.2运送温度应尽快将样本送至实验室进行检测，避免长时间运输导致样本质量下降。如因特殊情况需延迟运送，应将样本存放在适宜的环境中，并尽快安排运送。5.2.3运送时间运送过程中应遵守生物安全规定，防止样本泄漏、污染或损坏。运送人员应接受相关培训，了解样本特性和运送要求，确保安全、准确地完成运送任务。5.2.4运送安全086实验室内部实验室应具备良好的通风和排气系统，以确保空气流通并减少有害气体的积聚。实验室应配备适当的生物安全柜或超净工作台，以提供无菌操作环境。实验室应设有独立的试剂储存区、样本处理区和废弃物处理区，以确保实验过程的有序进行。6.1实验室环境与设施

6.2仪器与设备实验室应配备高质量的显微镜、离心机、恒温箱等必要设备，以满足实验需求。所有仪器和设备应定期进行维护和校准，以确保其准确性和可靠性。实验室应建立仪器使用和维护档案，记录仪器的使用情况和维修历史。所有试剂和耗材应储存在适当的条件下，避免受潮、受热或过期使用。实验室应建立试剂和耗材的库存管理制度，确保及时补充和更换。实验室应使用符合质量标准的试剂和耗材，以确保实验结果的准确性。6.3试剂与耗材实验室应制定严格的安全操作规程和应急预案，以应对可能发生的危险情况。实验室人员应接受相关的安全培训和防护知识教育，提高安全意识和自我保护能力。实验室应配备必要的个人防护用品，如实验服、手套、口罩等，以确保实验人员的安全。6.4实验室安全与防护096.1关于标本接收的信息03标本容器应使用密封、无泄漏的容器，容器上应贴有标签，注明患者姓名、标本名称、采集日期等信息。01福尔马林固定组织应为手术或活检取得的新鲜组织，立即放入足量福尔马林中进行固定。02标本大小应适合后续处理及制片，过大或过小的标本应在接收时注明并特殊处理。6.1.1标本类型及要求核对信息接收标本时，应核对标本容器上的标签信息是否与申请单一致。检查标本检查标本是否符合要求，如福尔马林量是否充足、组织是否完整等。登记信息将标本信息录入实验室信息系统，并生成唯一标本编号。6.1.2标本接收流程对于不符合要求的标本，如容器破损、标签脱落或信息不全、福尔马林量不足等，应予以拒收。与临床医生或患者沟通，说明拒收原因，并建议重新采集标本。同时，在实验室信息系统中记录拒收及处理情况。拒收标准处理方式6.1.3不合格标本处理保存条件标本应保存在阴凉、通风、避光的地方，防止福尔马林挥发及组织自溶。运输方式标本应在采集后尽快送至实验室，运输过程中应防止剧烈震荡和高温。同时，应确保标本容器密封无泄漏，以防福尔马林挥发污染环境。6.1.4标本保存与运106.2标本/样品的福尔马林固定6.2.1福尔马林固定液的选择与配制选择适宜的福尔马林浓度根据标本类型和固定需求，选择适宜浓度的福尔马林固定液，一般使用10%中性福尔马林固定液。配制方法按照标准配方，将甲醛、磷酸盐缓冲液、蒸馏水等按比例混合，制备成所需浓度的福尔马林固定液。选用适宜的容器，如广口瓶、标本瓶等，确保容器干净、无破损。固定容器选择将新鲜标本/样品修剪成适当大小，放入固定容器中，加入足量的福尔马林固定液，确保标本/样品完全浸没在固定液中。标本/样品处理根据标本/样品类型和厚度，确定适宜的固定时间，一般固定时间为24-48小时。固定时间6.2.2标本/样品的固定操作固定完成后，取出标本/样品，用流水冲洗干净，去除残留的福尔马林固定液。固定后处理将处理后的标本/样品放入密封袋或标本盒中，标明名称、日期等信息，放入冰箱或冰柜中保存备用。保存方法6.2.3固定后的处理与保存确保操作环境通风良好，避免长时间吸入福尔马林挥发出来的有害气体。操作环境操作人员需穿戴防护服、手套、眼镜等防护用品，避免直接接触福尔马林固定液。个人防护废弃的福尔马林固定液和标本/样品需按照医疗废弃物处理标准进行处理，避免对环境造成污染。废弃物处理6.2.4注意事项与安全防护116.3标本的病理学评估和样品的选择评估标本的完整性确保福尔马林固定及石蜡包埋的组织块完整，无破损或挤压现象。评估标本的病变情况观察组织块中的病变类型、范围和程度，确定是否具有代表性。评估标本的固定效果检查组织块是否充分固定，避免过度或不足固定对后续实验的影响。标本病理学评估选择不同病变程度的样品为了更全面地了解病变情况，可以选择不同病变程度的组织块进行实验。选择适量样品进行实验在确保实验结果准确性的前提下，选择适量的组织块进行实验，避免浪费。选择具有代表性的样品根据病理学评估结果，选择能够反映病变特征的组织块进行实验。样品选择126.4冷冻样品的固定03有利于后续处理固定后的细胞更易于进行脱水、透明、浸蜡和包埋等后续处理步骤。01保持细胞形态和结构通过固定剂迅速渗入细胞，使细胞内物质尽可能保持其生活状态时的结构和位置。02防止细胞自溶和腐败固定剂可以杀死细胞并凝固细胞质，防止细胞在后续处理过程中发生自溶或腐败。冷冻样品固定的目的

冷冻样品固定的方法浸入固定法将冷冻样品直接浸入固定液中，使固定液迅速渗透到组织内部。这种方法适用于小块组织或细胞悬液的固定。灌注固定法通过血管或体腔将固定液灌注到动物或器官的内部，使固定液迅速到达组织的各个部分。这种方法适用于大型组织和器官的固定。喷雾固定法用喷雾器将固定液喷洒在冷冻样品的表面，使固定液逐渐渗透到组织内部。这种方法适用于表面较大的组织或器官的固定。应根据实验目的和样品类型选择合适的固定液，常用的固定液有福尔马林、酒精、丙酮等。固定液的选择固定时间不宜过长或过短，过长会导致组织过硬，过短则不能充分固定。一般根据组织大小和固定液种类来确定最佳固定时间。固定时间的控制在固定过程中，应控制适当的温度，避免高温导致组织变形或固定液挥发，也避免低温导致固定液结晶或组织冻裂。温度的控制在固定过程中，应遵循无菌操作原则，避免污染样品或引入外源性物质。同时，应做好实验记录和标记，以便后续识别和追溯。操作的规范性冷冻样品固定的注意事项136.5脱钙去除组织中的钙质，以便于后续的切片和染色等操作。防止在切片过程中由于钙质的存在而导致切片的碎裂或破损。脱钙的目的化学脱钙法使用酸或螯合剂等化学物质与组织中的钙质发生反应，将其去除。常用的脱钙剂包括盐酸、硝酸、甲酸、EDTA等。物理脱钙法利用物理方法如微波、超声波等辅助化学脱钙剂的作用，加速脱钙过程。脱钙的方法脱钙时间应根据组织的种类、大小和钙化程度等因素进行调整，以确保脱钙的彻底性同时避免过度脱钙导致组织损伤。脱钙时间脱钙剂的浓度应根据组织的种类和钙化程度进行选择，浓度过高可能导致组织损伤，浓度过低则脱钙效果不佳。脱钙剂浓度脱钙过程中应控制适当的温度，避免高温导致组织损伤或脱钙剂失效。温度控制脱钙的终点应根据组织的柔软度和弹性进行判断，也可通过化学方法检测脱钙液中钙离子的浓度变化来确定。终点判断脱钙的注意事项146.6处理及石蜡包埋使用福尔马林作为固定液，确保组织细胞形态和结构的保存。固定时间应根据组织类型和大小进行调整，以避免过度或不足固定。组织固定通过逐步升高酒精浓度，将组织中的水分逐渐脱去，以便于后续的石蜡渗透。脱水过程中应注意避免组织过度收缩和变硬。脱水处理使用透明剂替代组织中的酒精，使组织呈现透明状态，有利于石蜡的渗透和包埋。常用的透明剂包括二甲苯等。透明处理6.6.1组织处理石蜡选择根据组织类型和实验需求选择合适的石蜡类型，如软蜡、硬蜡等。石蜡的熔点应适中，以便于操作和后续切片。石蜡渗透将透明处理后的组织置于熔化的石蜡中，使石蜡充分渗透入组织内部，确保包埋后组织的完整性和均匀性。包埋后处理对包埋块进行修整和标记，便于后续的切片和识别。同时，应对包埋块进行适当的保存，避免其受潮、变形或开裂。包埋操作将渗透好的组织块放入包埋框中，倒入熔化的石蜡，待石蜡凝固后形成包埋块。包埋过程中应注意避免气泡的产生和组织块的移位。6.6.2石蜡包埋156.7贮存要求01026.7.1样本贮存容器容器应具有良好的密封性能，以防样本泄漏或污染。应使用无核酸酶、无DNA酶的洁净容器进行样本贮存。样本应在-20℃以下低温保存，以避免DNA降解。应避免直接阳光照射，以防紫外线对DNA的损伤。6.7.2贮存温度及光照条件样本应在规定时间内尽快进行检验，以保证检验结果的准确性。长期贮存的样本应定期进行质量评估，以确保样本的可用性。贮存过程中应避免反复冻融，以减少对DNA的损伤。6.7.3贮存期限及注意事项166.8DNA的分离6.8.1分离DNA的原理利用化学和物理方法破碎细胞，使DNA从细胞内释放出来。通过去除蛋白质、RNA等杂质，进一步纯化DNA。最终得到的DNA应具有足够的纯度和浓度，以满足后续分子体外诊断检验的需求。组织样本的处理细胞破碎DNA的提取和纯化DNA的浓缩和保存6.8.2分离DNA的步骤将福尔马林固定及石蜡包埋的组织样本进行处理，以便于后续的DNA分离操作。利用化学试剂去除杂质，如蛋白质、RNA等，同时保护DNA的完整性。采用适当的方法破碎细胞，如机械研磨、酶消化等。将提取得到的DNA进行浓缩处理，并保存在适当的条件下，以备后续使用。在分离DNA的过程中，应严格避免不同样本之间的交叉污染。避免交叉污染控制温度和时间选择合适的试剂和耗材做好安全防护在操作过程中，应控制好温度和时间，以保证DNA的稳定性和提取效率。根据实验需求选择合适的试剂和耗材，以保证实验的准确性和可靠性。在实验过程中，应注意安全防护措施，避免对实验人员和环境造成危害。6.8.3分离DNA的注意事项176.9分离DNA的数量和质量评估通常采用荧光定量PCR、分光光度计等方法对提取的DNA进行数量评估，确保其浓度符合后续实验要求。一般来说，高质量的DNA应具有较高的浓度，以满足后续PCR扩增等实验的需求。具体标准可能因实验方法和试剂的不同而有所差异。评估方法评估标准6.9.1数量评估完整性评估01通过琼脂糖凝胶电泳等方法评估DNA的完整性，观察DNA是否降解或断裂。高质量的DNA应呈现出完整的条带。纯度评估02采用分光光度计等方法检测DNA的纯度，确保其不受蛋白质、RNA等杂质的污染。纯DNA的A260/A280比值应在1.8-2.0之间。抑制剂检测03某些化学物质可能抑制PCR扩增等反应，因此需要对提取的DNA进行抑制剂检测，以确保其不含有抑制剂。通常采用内参基因扩增等方法进行检测。6.9.2质量评估在进行数量和质量评估前，应确保实验操作规范，避免交叉污染和样品混淆。评估过程中使用的试剂和仪器应经过校准和验证，确保其准确性和可靠性。对于不符合要求的DNA样品，应重新提取或进行适当处理，以满足后续实验要求。6.9.3注意事项186.10DNA的贮存应选择无DNA吸附、无RNA酶和无DNA酶污染的容器。容器应具有良好的密封性能，以防DNA降解。6.10.1贮存容器的选择6.10.2贮存条件DNA应在低温下贮存，一般推荐在-20℃以下。避免反复冻融，以减少DNA降解的风险。在适当的贮存条件下，DNA可以长期保存。应定期检查DNA的质量和完整性，以确保其适用性。6.10.3贮存期限6.10.4贮存记录应详细记录DNA的来源、提取日期、贮存位置等信息。记录应清晰、完整，并妥善保存，以便于后续查询和使用。19附录A(资料性)贮存温度对FFPE组织块DNA完整性的影响在较低温度下（-20℃以下），